HPLC法測(cè)定神痛靈膠囊中青藤堿的含量

王海龍，趙慶華，王寶全，劉善奎

（1.濟(jì)南大學(xué)醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東 濟(jì)南250022；2.濟(jì)南軍區(qū)聯(lián)勤部藥品儀器檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南250022）

神痛靈膠囊是濟(jì)南軍區(qū)某醫(yī)療機(jī)構(gòu)自制制劑，由青風(fēng)藤、制川烏、制草烏、木瓜等8味中藥組成.用于治療各種神經(jīng)性、風(fēng)濕性疼痛等疾患，具有扶正固本、補(bǔ)血益氣、祛風(fēng)止痛、舒經(jīng)活絡(luò)等功效，臨床療效顯著.為了有效地控制該制劑的質(zhì)量，我們參照有關(guān)文獻(xiàn)［1～3］，采用高效液相色譜法建立了制劑中青藤堿的含量測(cè)定方法.

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜系統(tǒng)（安捷倫科技有限公司，配四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、可變波長(zhǎng)檢測(cè)器）.青藤堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用）；神痛靈膠囊（濟(jì)南軍區(qū)某醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供）；甲醇為色譜純，其余為分析純，水為重蒸餾水.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：日本Sil C18色譜柱（4.6mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－磷酸鹽緩沖液（0.005mol·L－1磷酸氫二鈉溶液，以0.005mol·L－1的磷酸二氫鈉調(diào)節(jié)pH值至8.0，再以1% 三乙胺調(diào)節(jié)pH 值至9.0）（55∶45）；檢測(cè)波長(zhǎng)：262nm；流速：1mL·min－1；柱溫：35 ℃ ；進(jìn)樣量：10 μL.

2.2 樣品溶液制備 取神痛靈膠囊內(nèi)容物約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得.

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取樣品溶液10μL，注入高效液相色譜儀測(cè)試，青藤堿的保留時(shí)間為8.5min左右，理論塔板數(shù)以青藤堿計(jì)不低于6 000，青藤堿與相鄰未知色譜峰的分離度大于2.5.色譜圖見(jiàn)圖1.

圖1 對(duì)照品、樣品和陰性樣品的HPLC圖譜

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24h的青藤堿對(duì)照品24.3mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液.分別精密吸取青藤堿對(duì)照品貯備液0.5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液.分別精密吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液各10μL，進(jìn)樣測(cè)定.以進(jìn)樣量X（μg）對(duì)峰面積Y作圖，進(jìn)行回歸分析.回歸方程為：Y＝2 120.2X－23.562，r＝0.999 6（n＝6）.結(jié)果表明青藤堿進(jìn)樣量在0.243～2.43μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

2.5 陰性干擾試驗(yàn) 按處方配制不含青風(fēng)藤的樣品，然后按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照溶液并進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明陰性樣品不含青藤堿峰，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1.

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.4中對(duì)照品溶液（每1mL含青藤堿0.048 6mg）10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果青藤堿平均峰面積為1 017.2，RSD＝0.45%（n＝6）.

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份，按樣品測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果樣品中青藤堿的平均含量為0.21mg·g－1，RSD＝1.2%（n＝5）.

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)同一樣品溶液，在5h內(nèi)每隔1h進(jìn)樣10μL進(jìn)行測(cè)定，共測(cè)5次，記錄青藤堿色譜峰面積.5次測(cè)定中青藤堿的平均峰面積為712.1，RSD＝0.93%（n＝5）.表明樣品溶液在5h內(nèi)穩(wěn)定.

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知青藤堿含量（0.21mg·g－1）的神痛靈膠囊內(nèi)容物約3g共9份，3份為一組分別精密加入青藤堿對(duì)照品貯備液0.5mL、1mL、1.5mL，按2.2制備樣品溶液（精密加入70%乙醇分別調(diào)整為19.5mL、19.0mL、18.5mL），分別進(jìn)樣10μL測(cè)定，計(jì)算回收率，3組的平均回收率為100.3% ，RSD＝0.42%，結(jié)果見(jiàn)表1.

2.10 樣品測(cè)定 取神痛靈膠囊3批，按2.2制備樣品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2.

3 討論

3.1 青藤堿的提取測(cè)定方法很多，本方法采用超聲提取法提取，可以最大限度地減少加熱提取過(guò)程中青藤堿損失，而且方便快捷.本實(shí)驗(yàn)對(duì)超聲提取的時(shí)間進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)超聲提取25min已能將制劑中的青藤堿提取完全，該法可以替代加熱回餾提取.

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3.2 在流動(dòng)相配比的考察中，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相pH值對(duì)待測(cè)組分色譜峰的峰形及保留時(shí)間影響較大，在實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)對(duì)流動(dòng)相pH值進(jìn)行準(zhǔn)確調(diào)節(jié).

3.3 青風(fēng)藤是神痛靈膠囊配方中的君藥，其主要成分青藤堿具有鎮(zhèn)痛、抗炎和免疫作用，對(duì)制劑中青藤堿的含量進(jìn)行控制對(duì)于保證制劑質(zhì)量有重要作用.本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可以作為神痛靈膠囊中青藤堿的含量測(cè)定方法.

［1］常新全，李瑞峰，康靜.HPLC測(cè)定秦芪消痹顆粒中的青藤堿含量［J］.中成藥，2004，26（10）：111－112.

［2］嚴(yán)華，馬雙成.RP－HPLC法測(cè)定青風(fēng)藤中青藤堿的含量［J］.藥物分析雜志，2006，26（2）：201－203.

［3］鄭紅，石力夫，胡晉紅.青藤堿凝膠劑的制備及體外滲透性能研究［J］.藥學(xué)服務(wù)與研究，2006，6（4）：271－273.