HPLC法測(cè)定子花潔膚搽劑中苦參堿的含量

張立慶，張 娜

（1.山東大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南250012；2.山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東 威海264210）

子花潔膚搽劑是山東省淄博市張店區(qū)中醫(yī)院的自制制劑，由蛇床子、苦參、黃柏等中藥制成，具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、殺蟲止癢之功效，臨床上用于真菌感染、過敏性疾病、皮膚瘙癢癥、尖銳濕疣、滴蟲性疾病等.苦參為該制劑的主要成分之一，含有苦參堿等有效成分.原標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測(cè)定項(xiàng)［1］，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)［2，3］，采用高效液相色譜法對(duì)該制劑中的苦參堿含量進(jìn)行研究，為該制劑建立完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù).本方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確.

1 儀器與試藥

SHIMADZU高效液相色譜儀（SHIMADZU LC－20AT泵，SHIMADZU SPD－20A紫外檢測(cè)器，SHIMADZU柱溫箱CTO－20A，自動(dòng)進(jìn)樣器SHIMADZU SIL－20A，LC－solution色譜工作站）.苦參堿對(duì)照品（批號(hào)：200508，供含量測(cè)定用，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所）；子花潔膚搽劑（淄博市張店區(qū)中醫(yī)院提供）；陰性樣品（按處方比例，稱取除苦參以外的中藥材適量，模擬制劑的制備工藝制備）.實(shí)驗(yàn)所用甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：GL Sciences lnc.ODS－SP色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.02mol·L－1磷酸二氫鉀溶液－乙腈－三乙胺－磷酸（95∶5∶0.2∶0.2）；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；柱溫：40 ℃ ；進(jìn)樣量：10μL；理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000.

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品10.59mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得苦參堿對(duì)照品溶液（濃度為0.105 9mg·mL－1），備用.

2.3 供試品溶液的制備 取子花潔膚搽劑，搖勻，精密量取1mL，加水25mL，濃氨溶液1mL，搖勻，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取4次（30mL、30mL、20mL、20mL），合并三氯甲烷提取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得.

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn) 取陰性樣品適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液.

照上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖.結(jié)果表明，在與苦參堿對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上無(wú)干擾峰出現(xiàn)，方中其他組分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響.色譜圖見圖1.

圖1 苦參堿對(duì)照品（A）、供試品（B）、陰性對(duì)照（C）液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件，測(cè)定峰面積.通過對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行回歸分析，以苦參堿對(duì)照品微克數(shù)（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y＝671 500X－2 538.8（r＝0.999 7）.結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在0.423 6～2.118 0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系.

2.6 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定苦參堿的峰面積，結(jié)果RSD為0.36%.表明儀器精密度良好.

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、6、8、10h注入液相色譜儀，分別測(cè)定峰面積.結(jié)果苦參堿峰面積RSD＝0.42%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定.

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，在相同色譜條件下測(cè)定并計(jì)算苦參堿的含量，結(jié)果RSD為1.08%.

2.9 加樣回收試驗(yàn) 采用加樣回收法，精密量取已知含量的供試品 （批號(hào)：201007141，苦參堿含量0.102 0mg·mL－1）0.5mL，加入苦參堿對(duì)照品0.5mL（0.105 9mg·mL－1），按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，計(jì)算回收率.結(jié)果見表1.

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 取不同生產(chǎn)批號(hào)的3批樣品，按上述方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2.

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)供試品萃取過程易產(chǎn)生泡沫，振搖時(shí)宜增加振搖時(shí)間，適當(dāng)降低振搖強(qiáng)度，并增加稀釋倍數(shù).

供試品提取中，筆者嘗試直接取本品適量水浴蒸干，用甲醇定容后進(jìn)樣，同樣得到比較滿意的效果，苦參堿峰無(wú)干擾，但雜質(zhì)峰相應(yīng)增加，從提取簡(jiǎn)易角度也可采用［4］.

本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于該制劑中苦參堿的含量測(cè)定.

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：188－189.

［2］熊英，鄔曉鷗.RP－HPLC測(cè)定龍鳳潔身純中苦參堿和蛇床子素的含量［J］.華西藥學(xué)雜志，2001，16（3）：213－214.

［3］汪魏平.HPLC法測(cè)定止癢酊中苦參堿的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10（1）：27－28.

［4］徐今寧，蔣貴昱，湯建華.苦參藥材高效液相指紋圖譜分析方法研究［J］.河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，25（2）：15－18.