黨參藥材不同提取方法的比較研究

施志順，孟祥松，時(shí) 軍

（1.亳州市藥品檢驗(yàn)所，安徽 亳州236800；2.廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州510006）

黨參為常用補(bǔ)益類(lèi)中藥，味甘、性平，入脾、肺二經(jīng)，具補(bǔ)中益氣、生津和胃之功效，臨床常用于氣虛證患者［1］.近年來(lái)，黨參廣泛用于冠心病、高血壓及功能性子宮出血等癥的治療，在保健食品方面亦有較多應(yīng)用［2］.然而，現(xiàn)行的2010年版《中國(guó)藥典》只有顯微鑒別和薄層鑒別，缺乏定量的評(píng)價(jià)方法［3，4］.本文通過(guò)比較冷浸法、加熱回流法、索氏回流法和超聲提取法等提取方法，采用HPLC法測(cè)定其中黨參炔苷的含量，考察藥材中黨參炔苷的含量，以期確定黨參的提取方法，為黨參藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考.

1 儀器和試劑

1.1 儀器 Dionex型高效液相色譜系統(tǒng)（P680型泵，PDA－100型檢測(cè)器，ASI－100自動(dòng)進(jìn)樣器），Dikma C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），Sartorius BS110S萬(wàn)分之一天平（北京賽多利斯天平有限公司），101A－1電熱鼓風(fēng)烘箱（上海索域）.

1.2 試藥 黨參炔苷對(duì)照品（購(gòu)于本草天工科技有限責(zé)任公司，純度＞98%），乙腈（重慶迪馬，色譜純），水為娃哈哈純凈水.黨參藥材購(gòu)于廣州清平中藥材專(zhuān)業(yè)市場(chǎng)，為甘肅產(chǎn)同一批次的優(yōu)質(zhì)品.

2 方法與結(jié)果

2.1 黨參炔苷測(cè)定方法的確定［5］取黨參炔苷對(duì)照品0.008 5g，精密稱(chēng)定，甲醇定容成10mL，即得對(duì)照品溶液.以下列色譜條件測(cè)定：固定相 Phenomenex Synergi C18柱（4.6 mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相乙腈－水（25∶75）；流速1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)268nm；進(jìn)樣量20μL；理論板數(shù)以黨參炔苷計(jì)不低于3 000.取黨參炔苷對(duì)照品溶液，精密吸取0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01mL，定容成1mL，得425、340、255、170、85、42.5、34、25.5、17、8.5μg·mL－1系列對(duì)照品溶液.吸取上述對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣2次，測(cè)定峰面積.以對(duì)照品質(zhì)量濃度（μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

回歸方程A＝0.124 1C－0.769 1，r＝0.999 8，表明黨參炔苷在0.008 5～0.425mg·mL－1范圍內(nèi)進(jìn)樣量與面積呈良好的線性關(guān)系.黨參炔苷對(duì)照品與黨參藥材樣品色譜圖見(jiàn)圖1.

2.2 提取方法的選擇 黨參主要含有糖類(lèi)、氨基酸、皂苷、甾醇及多種無(wú)機(jī)元素，其中黨參炔苷為專(zhuān)屬性成分.采用冷浸法、回流法、索氏提取及超聲法提取，比較黨參炔苷的含量，優(yōu)選提取方法.

2.2.1 冷浸法 取黨參藥材，60℃烘2h，粉碎成粗粉.取1 g，精密稱(chēng)定，加入甲醇100mL，冷浸24h過(guò)夜，濾過(guò)，濾液70℃水浴蒸干，甲醇定容至10mL，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得.

圖1 黨參炔苷測(cè)定色譜圖

2.2.2 加熱回流法 取黨參藥材，60℃烘2h，粉碎成粗粉.取1g，精密稱(chēng)定，加入甲醇50mL熱回流2h，濾過(guò)，濾渣再加入30mL甲醇熱回流1.5h，合并濾液，甲醇定容至100 mL，70℃水浴蒸干，甲醇定容至10mL，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得.

2.2.3 索氏提取法 取黨參藥材，60℃烘2h，粉碎成粗粉.取1g，精密稱(chēng)定，用濾紙包好放入索氏提取器，從上端加入甲醇80mL，70℃下恒溫提取約5h直到藥包周?chē)崛∫鹤優(yōu)橥该?，收集好提取液，水浴蒸干，甲醇定容?0mL，蒸干，甲醇定容至10mL，0.45μm濾膜濾過(guò).

2.2.4 超聲提取法 取黨參藥材，60℃烘2h，粉碎成粗粉.取1g，精密稱(chēng)定，加入甲醇50mL超聲2h，趁熱過(guò)濾，收集濾液，放冷補(bǔ)足50mL，精確量取25mL供試品溶液70℃水浴蒸干，最后用甲醇定容至5mL，即得.

2.2.5 不同提取方法的比較 取上述4種供試品溶液，進(jìn)樣20μL，按2.1方法進(jìn)行測(cè)定，峰面積定量，計(jì)算其中黨參炔苷含量，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 不同提取方法黨參炔苷含量（n＝3）

采用加熱回流法提取，測(cè)得黨參炔苷含量最高（1.013±0.039）mg·g－1，選擇該法為黨參藥材的提取方法.

2.3 提取方法的確定 取黨參藥材，置于烘箱中60℃烘2 h，粉碎成粗粉（20目）.取1g，精密稱(chēng)定，加入甲醇50mL熱回流2h，濾過(guò)，濾渣再加入30mL甲醇熱回流1.5h，合并濾液，甲醇定容至100mL，70℃水浴蒸干，甲醇定容至10mL，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，對(duì)同一藥材進(jìn)行5次連續(xù)提取試驗(yàn)，結(jié)果熱回流提取工藝黨參炔苷平均含量為1.008mg·g－1，RSD為4.50%.含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2.

表2 加熱回流提取驗(yàn)證性試驗(yàn)（n＝3）

3 討論

3.1 上述4種方法均為藥材含量測(cè)定的常用提取方法［6］.采用加熱回流法及索氏提取法，測(cè)得黨參炔苷含量最高，采用甲醇加熱回流法提取.

3.2 現(xiàn)行的2010版藥典黨參項(xiàng)下只有顯微鑒別和薄層鑒別，缺乏定量的評(píng)價(jià)方法.為更好地進(jìn)行黨參質(zhì)量的評(píng)價(jià)，建議制定黨參炔苷含量測(cè)定方法，提高黨參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).

［1］劉恩荔，秦雪梅.黨參研究進(jìn)展［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，33（6）：567－569.

［2］李黎星，康杰芳.中藥黨參的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9（12）：2371－2373.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：264.

［4］賀慶，朱恩圓，王崢濤，等.黨參中黨參炔苷HPLC分析［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志.2005，40（1）：56－58.

［5］時(shí)軍，馬方勵(lì)，廖華衛(wèi)，等.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地黨參藥材中黨參炔苷的含量［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，27（1）：51－53.

［6］陳璐，王天志，楊兵，等.比較和優(yōu)化黨參炔苷的提取工藝［J］.華西藥學(xué)雜志，2008，23（4）：454－455.