HPLC 法測定前列安通膠囊中鹽酸小檗堿的含量

王 媛，崔 彥

前列安通膠囊由黃柏、赤芍等八味中藥組成，具有清熱利濕，活血化瘀的功效，用于濕熱瘀阻證，癥見:尿頻、尿急、排尿不暢，小腹脹痛等癥，臨床療效確切。處方中黃柏為君藥，鹽酸小檗堿為活性成分。目前文獻(xiàn)報(bào)道測定方法有薄層掃描法[3]和HPLC法[2]。由于薄層掃描法存在準(zhǔn)確性低、重現(xiàn)性差等缺點(diǎn)，因此，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC 法測定黃柏中的鹽酸小檗堿，為有效地控制復(fù)方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器:Agilent 1100高效液相色譜儀;MWD紫外檢測器;Sartorius BP211D型電子天平;HENGAO-HU10260B型超聲儀。試藥:鹽酸小檗堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號(hào):110713–200208);乙腈(色譜純);水(超純水);其余試劑勻?yàn)榉治黾?。前列安通膠囊由連云港市第一人民醫(yī)院藥房提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:X– Terra C18(250×4.6 mm，5 μm)，WATERS公司;流動(dòng)相:乙腈 －0.5‰磷酸水溶液(27∶73);檢測波長265 nm;柱溫30℃。

2.2 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 在上述條件下，測定樣品中鹽酸小檗堿的含量，以鹽酸小檗堿峰計(jì)算理論塔板數(shù)大于6 000，分離度大于2，已達(dá)到基線分離。為確保定量分析的準(zhǔn)確，在系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)中鹽酸小檗堿的理論塔板數(shù)不得低于4 000。

2.3 對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1 ml含35 μg的溶液，即得。液相圖譜見圖1。

2.4 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，密塞，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲(功率250 W，頻率40 KHz)處理30 min，放冷，稱定重量，加50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。液相圖譜見圖2。

2.5 陰性供試品溶液的制備 按處方比例，除去黃柏藥材，相同制備方法制得陰性供試品溶液。進(jìn)樣，記錄，結(jié)果其他藥材對鹽酸小檗堿含量測定無干擾。液相圖譜見圖3。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品8.94 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。得濃度為0.1788 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，分別精密吸取上述溶液1 ml，2 ml，4 ml，6 ml，10 ml，置100 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。分別取10 μl注入液相色譜儀，記錄相應(yīng)的峰面積。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=35.949X －15.135，r=0.9998。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在 17.88 ～178.8 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液(35.76 μg/ml)10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得峰面積，計(jì)算 RSD為0.22%(n=6)。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品(批號(hào):090615)內(nèi)容物0.1 g，精密稱定，按正文含量測定項(xiàng)下黃柏的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液 10 μl，分別第 0、1、2、3、6、12 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，測定峰面積，計(jì)算RSD為1.66%(n=6)。結(jié)果表明鹽酸小檗堿峰面積在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品(批號(hào):090615)內(nèi)容物0.1 g，精密稱定5份，按正文含量測定項(xiàng)下黃柏的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為17.01 mg/g，RSD 為 0.31%(n=5)。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的本品內(nèi)容物(批號(hào):090615;含量:17.01 mg/g)0.05 g，精密稱定 5 份，分別精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液(36.8 μg/ml，50%甲醇溶解)25 ml及50%甲醇25 ml，超聲處理30 min，放冷，稱重，50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，進(jìn)樣，測定。結(jié)果鹽酸小檗堿平均加樣回收率為99.74%，RSD為0.96%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.11 樣品含量測定 取5批前列安通膠囊，按正文含量測定項(xiàng)下黃柏的供試品溶液制備方法制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中鹽酸小檗堿的含量測定結(jié)果(n=5)

3 討論

3.1 提取方法的選擇 分別采用甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇、水，超聲、回流的不同方法對樣品進(jìn)行提取考察，以選擇合適的提取方法，結(jié)果幾種提取方法中以50%甲醇超聲提取效果最佳，方法簡便可靠。

3.2 流動(dòng)相的選擇 參考中國藥典標(biāo)準(zhǔn)[3]對乙腈-磷酸的不同比例進(jìn)行考察，結(jié)果表明乙腈–0.5‰磷酸水溶液(27:73)對樣品的分離效果最佳，保留時(shí)間適宜。

3.3 結(jié)果評價(jià) 試驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所采用測定方法測定鹽酸小檗堿，重現(xiàn)性良好，回收率較高，且在該色譜條件下，鹽酸小檗堿進(jìn)樣精密度良好，故該法結(jié)論可靠，可作為前列安通膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]甄麗萍，張 波.薄層掃描法測定胃消渴膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2004，17(5):321-322.

[2]陳曉軍，曹新榮，郭五保，等.HPLC測定胃舒泰膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2005，20(6):251-252.

[3]中國藥典二部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:640.