冷藏溫度、基質(zhì)和時(shí)間對(duì)智利小植綏螨存活和生殖的影響

劉佰明， 張君明， 郭曉軍， 張 帆＊

（1.天津市植物保護(hù)研究所，天津 300112；2.北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)環(huán)境保護(hù)研究所，北京 100097）

智利小植綏螨（Phytoseiulus persimilis Athias－Henriot）（Acari：Phytoseidae）是專食性捕食螨［1］，對(duì)葉螨屬害螨具有很好的控制效果。目前，智利小植綏螨大量繁殖與釋放技術(shù)已經(jīng)取得了很大進(jìn)展［5－8］，其被廣泛用于設(shè)施蔬菜、園藝觀賞植物上的葉螨防治，取得了很好的效果［2－4］。隨著無公害設(shè)施農(nóng)業(yè)的發(fā)展，智利小植綏螨的商業(yè)化需求越來越大。但商品化捕食螨在被應(yīng)用前，要經(jīng)歷長短不一的貨架期，并且在儲(chǔ)運(yùn)過程中會(huì)遭受變溫、移動(dòng)等對(duì)捕食螨存活和繁殖不利的外界因素。所以捕食螨產(chǎn)品的冷藏技術(shù)，往往是制約智利小植綏螨商業(yè)化的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。冷藏基質(zhì)、冷藏時(shí)間和冷藏溫度等是影響冷藏效果的重要因子，特別是對(duì)冷藏基質(zhì)提出很高的要求，不僅要具有保濕、隔離作用，還需避免對(duì)捕食螨造成機(jī)械傷害。冷藏基質(zhì)同時(shí)作為商品捕食螨的應(yīng)用載體，應(yīng)考慮到價(jià)廉、便于獲得并利于在田間施用。較常規(guī)簡易的做法是將帶有捕食螨及葉螨的新鮮葉片直接冷藏，葉片作為冷藏載體可滿足捕食螨對(duì)水分的需求［10］，但是葉片容易腐爛，不宜長期儲(chǔ)運(yùn)。麥麩具有良好的保濕性，一些商業(yè)生產(chǎn)的捕食螨用之作為儲(chǔ)運(yùn)載體，但是麥麩在國際間的運(yùn)輸有時(shí)會(huì)受到限制［11］。因此急需選擇一種較為合適的冷藏智利小植綏螨的基質(zhì)。

蛭石是一種水合頁硅酸鹽顆粒狀礦物質(zhì)，具有較好的保濕性和輕質(zhì)性［12］，價(jià)廉易得，目前已廣泛用作天敵昆蟲大量繁殖、田間釋放的載體［13－15］。Shih［16］在自動(dòng)化大量繁殖溫氏鈍綏螨（Amblyseius womersleyi）的工藝中，將采收到的捕食螨中加入蛭石等貯存待用，但沒有詳細(xì)報(bào)道其冷藏方法及效果。Morewood［11］曾經(jīng)嘗試?yán)抿问鳛橹抢≈步楎睦洳剌d體，但是在其冷藏條件下有霉菌生長，結(jié)果不甚理想。因此有必要在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究應(yīng)用蛭石作為智利小植綏螨冷藏填充基質(zhì)的可行性。

本研究以蛭石作為冷藏基質(zhì)，評(píng)價(jià)其不同的使用方式、冷藏溫度和冷藏時(shí)間對(duì)智利小植綏螨存活和生殖的影響，為開發(fā)理想的商用智利小植綏螨冷藏技術(shù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及設(shè)備

智利小植綏螨和朱砂葉螨［Tetranychus cinna－barinus（Boisduval）］：自北京市農(nóng)林科學(xué)院天敵昆蟲實(shí)驗(yàn)室，以菜豆（Phaseolus vulgaris Linn.）苗－朱砂葉螨繁殖體系常年飼養(yǎng)種群，發(fā)育至成螨供試。

其他材料與設(shè)備：蛭石（市售，規(guī)格為1～3mm）、5mL離心管、海爾冷藏箱、RXZ－3000智能人工氣候箱、尼康SMZ1500型實(shí)體顯微鏡等。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與冷藏方法

冷藏基質(zhì)：設(shè)3個(gè)處理：（1）葉片＋葉螨：帶有朱砂葉螨的菜豆葉片，剪成1cm×3cm條狀；（2）蛭石＋葉螨：滅菌蛭石＋蒸餾水＋朱砂葉螨；（3）蛭石：滅菌蛭石＋蒸餾水。以上處理滅菌蛭石與蒸餾水按體積比2∶1比例混合。

本試驗(yàn)在（8±1）℃和（4±1）℃兩個(gè)冷藏溫度下，用葉片＋葉螨、蛭石＋葉螨、蛭石3種冷藏基質(zhì)冷藏智利小植綏螨，每溫度每基質(zhì)分別冷藏5、10、15、20、25、30、35、40d。本試驗(yàn)計(jì)48個(gè)處理，每處理5次重復(fù)，每重復(fù)用1個(gè)裝有約2mL冷藏基質(zhì)的5mL塑料離心管，裝入10頭由同期卵發(fā)育來的智利小植綏螨4日齡雌成螨。

1.3 冷藏后的總效果檢查

將離心管中的捕食螨連同冷藏基質(zhì)倒在白紙上，用0號(hào)毛筆輕柔地從基質(zhì)中挑出捕食螨，輕輕觸碰，在10min內(nèi)不活動(dòng)的捕食螨視為死亡，記錄捕食螨存活數(shù)量。將冷藏后存活的智利小植綏螨懷卵雌成螨單頭置于盛有1cm×3cm帶有朱砂葉螨葉條的離心管中，置于溫度26℃，相對(duì)濕度80%，光照L∥D＝16h∥8h條件的人工氣候箱中培養(yǎng)。每隔24h檢查智利小植綏螨產(chǎn)卵數(shù)量，在顯微鏡下用肉眼較易區(qū)分兩種螨類的卵：智利小植綏螨的卵橢圓形、長約0.3mm，初產(chǎn)時(shí)呈半透明略帶橙色，隨著發(fā)育進(jìn)程橙色加深；朱砂葉螨的卵為正圓形，直徑約0.13mm，初產(chǎn)乳白色，后期呈乳黃色。每次檢查后更換葉條，連續(xù)記錄一周。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

溫度、基質(zhì)和冷藏時(shí)間對(duì)智利小植綏螨存活率和產(chǎn)卵量的影響采用多因素方差分析（ANOVA）。數(shù)據(jù)在分析前進(jìn)行方差齊性和正態(tài)性檢驗(yàn)，存活率數(shù)據(jù)在分析前采用平方根反正弦變換。當(dāng)主效應(yīng)影響顯著時(shí)，采用Tukey測驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。以上數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度、基質(zhì)和冷藏時(shí)間對(duì)智利小植綏螨存活率的影響

溫度（F1，192＝6.357，p＝0.013）、基質(zhì)（F2，192＝40.760，p＜0.001）和冷藏時(shí)間（F7，192＝74.590，p＜0.001）對(duì)智利小植綏螨存活率均有顯著影響（表1）。同 時(shí)，溫度 和冷藏 時(shí)間 （F7，192＝5.949，p＜0.001）及 基 質(zhì) 和 冷 藏 時(shí) 間 （F14，192＝3.116，p＜0.001）互作都達(dá)到顯著差異（表1）。

表1 溫度、基質(zhì)和冷藏時(shí)間對(duì)智利小植綏螨存活率影響的差異顯著性比較

由表2可見，在4℃條件下冷藏35～40d和在8℃條件下冷藏25～40d時(shí)，智利小植綏螨在“葉片＋葉螨”基質(zhì)中的存活率均顯著低于“蛭石＋葉螨”和“蛭石”兩種基質(zhì)，而后兩種基質(zhì)間無顯著差異。在4℃和8℃條件下的其他冷藏時(shí)間段內(nèi)，智利小植綏螨存活率在3種基質(zhì)間均無顯著差異。在每個(gè)溫度及每種基質(zhì)內(nèi)，智利小植綏螨冷藏存活率均隨冷藏時(shí)間的延長呈下降趨勢。冷藏5～15 d時(shí)，在8℃條件下每種基質(zhì)中智利小植綏螨的存活率均大于或等于4℃，而冷藏20～40d時(shí)相反。

2.2 溫度、基質(zhì)和冷藏時(shí)間對(duì)智利小植綏螨產(chǎn)卵量的影響

由表3可見，溫度（F1，183＝4.320，p＝0.039）和冷藏時(shí)間（F5，183＝2.406，p＝0.038）對(duì)智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量均有顯著影響，但基質(zhì)（F2，183＝0.753，p＝0.473）對(duì)智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量沒有顯著影響。同時(shí)，溫度和冷藏時(shí)間（F5，183＝9.331，p＜0.001）及溫度、基質(zhì)和冷藏時(shí)間（F10，183＝2.08，p＝0.028）互作均達(dá)顯著差異。

表4結(jié)果表明，在4℃條件下，智利小植綏螨冷藏后1周產(chǎn)卵量隨冷藏時(shí)間的延長而下降。冷藏5d和10d后的智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量高于冷藏15d及以后的產(chǎn)卵量。而其他冷藏時(shí)間段內(nèi)的智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量之間沒有差異。在8℃條件下，智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量先隨冷藏時(shí)間延長而上升，冷藏20d后智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量又隨冷藏時(shí)間延長而下降。冷藏10d和15d后智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量高于其他冷藏時(shí)間段產(chǎn)卵量。另外，除了10d和15d處理，在4℃條件下智利小植綏螨冷藏后1周產(chǎn)卵量要高于8℃，特別是在冷藏20d后。

表2 溫度、基質(zhì)和冷藏時(shí)間對(duì)智利小植綏螨存活率影響1）

表3 不同處理對(duì)智利小植綏螨產(chǎn)卵量影響的差異顯著性

表4 不同處理對(duì)智利小植綏螨單雌一周產(chǎn)卵量影響1）

3 討論

Morewood［11］認(rèn)為冷藏期間供給獵物（食物）能進(jìn)一步提高捕食螨的存活率。本研究在蛭石中添加獵物（朱砂葉螨）作為冷藏基質(zhì)，較之單純的蛭石基質(zhì)智利小植綏螨存活率和產(chǎn)卵量都沒有顯著提高。因此，本著操作簡單、經(jīng)濟(jì)適用的角度，單純的蛭石可以作為一種良好的冷藏智利小植綏螨的基質(zhì)。本研究表明，用帶有葉螨的葉片冷藏智利小植綏螨時(shí)，隨冷藏時(shí)間延長，智利小植綏螨存活率逐漸下降，可能因?yàn)樾迈r植物葉片短期容易腐爛，不宜長期冷藏。而用蛭石和蛭石葉螨基質(zhì)長期冷藏智利小植綏螨時(shí)，雌成螨的存活率都較高，同時(shí)對(duì)冷藏后雌螨產(chǎn)卵量均無顯著影響。這可能與蛭石具有良好的保濕以及輕質(zhì)的礦物質(zhì)特性有關(guān)。

冷藏溫度和時(shí)間對(duì)智利小植綏螨冷藏后的存活率有顯著影響。如果需要長期冷藏（超過30d），宜用4℃冷藏，較低的溫度可能更有利于延緩代謝。本試驗(yàn)在4℃下用蛭石冷藏智利小植綏螨10d的存活率（78%）與 Morewood［11］用蛭石在6℃下冷藏10d后的存活率（75%～85%）相當(dāng)。在4℃和8℃下冷藏30d的存活率分別為60%和54%，較Morewood在5℃或8℃下存放4周后的存活率（0～19%）顯著提高?？赡芘cMorewood的冷藏媒介中產(chǎn)生了霉菌［11］有關(guān)，因此冷藏前對(duì)基質(zhì)進(jìn)行滅菌至關(guān)重要。

冷藏溫度和時(shí)間對(duì)智利小植綏螨冷藏后1周產(chǎn)卵量均有顯著影響。除冷藏10d和15d處理，在4℃條件下智利小植綏螨冷藏后1周產(chǎn)卵量要高于8℃，特別是在冷藏20d后，這可能與較低的溫度更有利于智利小植綏螨延緩代謝有關(guān)。在4℃條件下，智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量隨冷藏時(shí)間的延長而下降，可能與低溫脅迫有關(guān)，低溫脅迫時(shí)間越長，智利小植綏螨產(chǎn)卵量越低。但在8℃條件下，智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量先隨冷藏時(shí)間延長而上升，冷藏20d后智利小植綏螨1周產(chǎn)卵量又隨冷藏時(shí)間延長而下降。在8℃條件下，智利小植綏螨在開始面對(duì)低溫時(shí)，先有一個(gè)適應(yīng)期，導(dǎo)致低溫冷藏5d產(chǎn)卵量不高。當(dāng)智利小植綏螨適應(yīng)性增強(qiáng)后，其產(chǎn)卵量又有所增高。因此，從產(chǎn)卵量角度考慮，當(dāng)需要短期和長期冷藏智利小植綏螨時(shí)，建議在4℃條件下冷藏為好。

綜上所述，蛭石可以作為一種較為理想的智利小植綏螨冷藏基質(zhì)，但是要注意冷藏前基質(zhì)滅菌和控濕等相關(guān)配套措施的應(yīng)用。值得注意的是，濕度對(duì)于智利小植綏螨的冷藏也是一個(gè)至關(guān)重要的因子［17］，還需進(jìn)一步研究。探討捕食螨冷藏前預(yù)處理技術(shù)和以蛭石為基礎(chǔ)的復(fù)合填充基質(zhì)等，以提高冷藏后智利小植綏螨的存活、生殖和捕食等指標(biāo)，也是非常有意義的工作。

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