鐵皮石斛鎮(zhèn)痛與抗炎作用研究

侯少貞，李煥彬，郭建茹，黃 松，賴小平

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東廣州510405）

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）為蘭科多年生草本氣生植物，是我國特有的名貴中藥［1］。其滋補功效卓著，素有“千金草”之稱，更被國際植物界稱為“植物界大熊貓”。李時珍在《本草綱目》中評價鐵皮石斛“除痹，下氣，補五臟虛勞羸瘦，強陰益精，久服，厚腸胃，補內(nèi)絕不足，平胃氣，長肌肉，益智除驚，輕身延年?！薄兜啦亍犯谚F皮石斛列為“中華九大仙草”之一。鐵皮石斛的生長環(huán)境要求嚴(yán)格，而近年來以鐵皮石斛為原料開發(fā)的保健產(chǎn)品日益走俏，使野生資源日趨稀少。鐵皮石斛化學(xué)成分多樣，主要含有生物堿、多糖、氨基酸等。許多藥理研究表明，鐵皮石斛具有明顯的抗氧化、抗腫瘤、降低血糖以及提高免疫力等藥理作用，在治療惡性腫瘤、胃腸道疾病、糖尿病、白內(nèi)障、關(guān)節(jié)炎、血栓閉塞性脈管炎及慢性咽炎等疾病有很好的療效［2］。目前，鐵皮石斛通過原球莖誘導(dǎo)、增殖、分化苗形成與生長、試管苗移栽等培養(yǎng)技術(shù)實現(xiàn)了人工栽培［3］。

臨床上，鐵皮石斛的服用方式主要為干品楓斗煎煮取汁服用，亦有醫(yī)家推薦采用鮮品榨汁取服。為進(jìn)一步評價新鮮（人工種植）鐵皮石斛汁的藥理作用，本試驗采用鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等試驗對其進(jìn)行考察。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 鐵皮石斛（鮮品），廣東永生源生物科技有限公司提供，批號：20101115；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號110733，規(guī)格：0.75 mg／片，劑量：0.75 mg／kg；吲哚美辛腸溶片，又名消炎痛，廣東華南藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號：080701，規(guī)格：25 mg／片。

1.1.2 主要試劑 二甲苯，天津市大茂化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號：110501，分析純；冰乙酸，天津市大茂化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號：20111101，分析純；沃凱牌伊文思藍(lán)，國藥集團化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品，批號：WC20110209，規(guī)格10 g／瓶。

1.1.3 主要儀器 秒表，試管架，熱板測痛儀，500 mL玻璃鐘罩，橡皮管，超聲霧化器，XZC－4型小動物自主活動測定儀，721型分光光度計，打孔器。

1.1.4 實驗動物 SPF級昆明小鼠及SD大鼠，均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK （粵 ）2008－0020。 憑 證 號：0043393、0062553、0062559。

1.2 方法

參照文獻(xiàn)［4］進(jìn)行。

1.2.1 鎮(zhèn)痛試驗

1.2.1.1 扭體鎮(zhèn)痛試驗 將小鼠隨機分為4組：空白對照組，消炎痛陽性藥組（5 mg／kg），石斛榨汁高劑量組（2 g生藥／kg），石斛榨汁低劑量組（0.5 g生藥／kg）；每組12只。小鼠按0.1 mL／10 g體重等容量灌胃，空白對照組以蒸餾水灌胃，消炎痛陽性組以消炎痛溶液灌胃，鐵皮石斛給藥組分別給予高、低濃度的榨汁液。1次／d，連續(xù)5 d。末次給藥后2 h，各組小鼠腹腔注射6 mL／L醋酸液0.2 mL／只，記錄15 min內(nèi)各組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。計算藥物鎮(zhèn)痛百分率。藥物鎮(zhèn)痛百分率＝（對照組平均扭體反應(yīng)次數(shù)－給藥組平均扭體反應(yīng)次數(shù)）／對照組平均扭體反應(yīng)次數(shù)×100%。

1.2.1.2 熱板鎮(zhèn)痛試驗 實驗動物的分組及給藥方法同1.2.1.1。分別于給藥前及末次給藥后30、45 min測定各組小鼠的熱板痛閾值。將各組小鼠置于55℃恒溫?zé)岚迳?，立即開始計時，以小鼠舔后足足底視為出現(xiàn)疼痛反應(yīng)并立即停止計時。所計時間為痛閾值。比較給組間不同時間點的痛閾值大小。

1.2.2 抗炎試驗

1.2.2.1 小鼠耳腫脹試驗 實驗動物的分組及給藥方法同1.2.1.1。末次給藥后2 h，將二甲苯0.02 mL均勻涂于小鼠右耳，左耳不涂二甲苯作為對照。30 min后將小鼠頸部脫臼處死，用直徑為6 mm的打孔器分別在左、右兩耳同一部位打下圓耳片，稱重，求左、右耳片重量之差作為腫脹度。

1.2.2.2 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗 實驗動物的分組及給藥方法同1.2.1.1。末次給藥后2 h，各組小鼠尾靜脈注射伊文思藍(lán)溶液0.1 mL／10 g，立即腹腔注射6 mL／L醋酸0.2 mL／只。30 min后，頸椎脫臼處死小鼠，小心剪開腹腔，用5 mL生理鹽水沖洗腹腔數(shù)次，收集洗滌液，1 000 r／min離心5 min，取上清液于590 nm處測吸光度（OD值）。比較各組吸光度的大小。

1.2.2.3 肉芽腫試驗 將40只大鼠隨機分為4組，每組10只，分別為空白對照組、醋酸地塞米松陽性對照組（0.75 mg／kg），石斛榨汁高劑量組（2 g生藥／kg），石斛榨汁低劑量組（0.5 g生藥／kg）。將大鼠用乙醚淺表麻醉后，腹部去毛消毒。腹部切口，將兩個滅菌棉球（每個棉球重50 mg±1 mg，高壓滅菌），分別植入大鼠兩側(cè)腋窩皮下。手術(shù)后各組動物連續(xù)3 d天肌肉注射青霉素160單位／只以防感染。手術(shù)后第2天各組開始給藥，空白對照組、模型組以蒸餾水灌胃（10 mL／kg），給藥組分別給予相應(yīng)的藥物。每天給藥1次，連續(xù)7 d。第8天將大鼠頸椎脫臼處死，取出棉球（連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔出脂肪組織），在60℃烤箱放置12 h后稱重，減去棉球重量，即為肉芽腫凈重。比較各組肉芽腫重量的差別。

1.2.3 碳粒廓清試驗 將48只小鼠隨機分為4組，即空白對照組，參維靈陽性藥組（0.4 g／kg），石斛榨汁高劑量組（2 g生藥／kg），石斛榨汁低劑量組（0.5 g生藥／kg），每組12只。除正常組每天蒸餾水灌胃外，其余各組給予不同的藥液。連續(xù)給藥15 d，末次給藥30 min后，尾靜脈注射中華墨汁0.1 mL／10 g，注射不同時間（2 min、12 min）用吸管（預(yù)先用肝素溶液濕潤）分別從眶后靜脈叢取血20 μL，溶于2 mL的1 g／L Na2CO3溶液中搖勻，置721型分光光度計在波長650 nm下測吸光度（OD）；將小鼠處死，分別稱取脾臟，肝臟，胸腺和體重。計算胸腺指數(shù)，脾臟指數(shù)，廓清指數(shù)K。胸腺（脾臟）指數(shù)＝胸腺重量或脾臟重量（mg）／體重（10 g）×1 000，即 K＝（log OD1－logOD2）／（t2－t1）。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件分析系統(tǒng)對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)采用ˉX±SD表示。所有定量資料均經(jīng)過正態(tài)性檢驗，定量數(shù)據(jù)的組間差異性檢驗采用單因素方差分析 （One－Way ANOVA），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鎮(zhèn)痛試驗

2.1.1 扭體鎮(zhèn)痛試驗 由表1可知，各給藥組均能減少小鼠扭體次數(shù)，給藥組與對照組比較有顯著性差異（P＜0.01或P＜0.05），表明鐵皮石斛榨汁液能起到明顯的鎮(zhèn)痛作用。

表1 藥物對小鼠扭體次數(shù)的影響Table1 Effects of drugs on mouse writhing times

2.1.2 熱板鎮(zhèn)痛試驗 由表2可知，給藥前，各組小鼠的熱板痛閾值無顯著差異；給藥后，各給藥組的小鼠痛閾值均有提高，與對照組比較差異有顯著性（P＜0.01或P＜0.05），表明石斛榨汁液能起到明顯的鎮(zhèn)痛作用。

2.2 抗炎試驗

2.2.1 小鼠耳腫脹試驗 由表3可知，各給藥組有明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓急性炎癥腫脹，與空白組比較差異有顯著性（P＜0.01或P＜0.05），表明鐵皮石斛具有明顯的抗炎作用。

表2 藥物對熱板法小鼠痛閾值的影響Table2 Effects of drugs on the mouse pain threshold of hot plate method in mice

表3 藥物對小鼠耳腫脹度的影響Table3 Effects of drugs on mouse ear swelling

2.2.2 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗 由表4可知，與空白組比較，陽性藥組與石斛榨汁高劑量組的腹腔滲出物OD值較小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示鐵皮石斛具有抗炎作用，能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增大。

2.2.3 大鼠肉芽腫試驗 由表5可知，陽性藥、石斛高劑量的肉芽腫重量顯著低于空白組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。提示鐵皮石斛能夠抑制棉球肉芽腫亞急性炎癥的作用。

2.3 碳粒廓清試驗

由表6可見，與空白組比較，各給藥組的胸腺指數(shù)均顯著提高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）；各給藥組的吞噬指數(shù)K值亦有升高，差異均有顯著性（P＜0.05）。結(jié)果提示鐵皮石斛能夠提高動物的免疫器官重量及提高吞噬細(xì)胞的吞噬功能。

表4 藥物對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響Table4 Effects of drugs on mouse peritoneal capillary permeability

表5 藥物對大鼠肉芽腫的影響Table5 Effects of drugs to rat granuloma

表6 藥物對小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響Table6 Effects of drugs to the thymus index and spleen index of mice

3 討論

鐵皮石斛具有增強免疫、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、降血糖和養(yǎng)陰生津等多種生物活性［5］，這主要與其含有多糖、芪類、生物堿、氨基酸和微量元素等多種成分有關(guān)。石斛生物總堿能夠頡頏脂多糖所引起的炎癥反應(yīng)［6］。石斛免疫調(diào)節(jié)劑則主要是多糖成分發(fā)揮［7］。

基于石斛具有延年益壽的作用，衰老是免疫系統(tǒng)逐漸衰退的過程，也是慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展過程［8］。因此，本研究中主要通過鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等指標(biāo)首先考察鐵皮石斛的藥效特點。結(jié)果顯示，鐵皮石斛榨汁液對醋酸、熱板誘導(dǎo)的疼痛模型均有顯著的鎮(zhèn)痛作用；對二甲苯、醋酸誘導(dǎo)的急性炎癥模型及棉球肉芽腫亞急性炎癥模型均有明顯的抗炎作用；能夠顯著提高動物免疫功能，表現(xiàn)為對免疫器官——胸腺的重量及提高吞噬細(xì)胞對血中異物的清除速率。本研究結(jié)果為人工種植鐵皮石斛在保健方面的應(yīng)用提供試驗依據(jù)。

［1］高 正，楊兵勛，陳立鉆.鐵皮石斛的應(yīng)用進(jìn)展［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25（8）：693－695.

［2］徐 瓊，陳素紅，呂圭源.3種不同石斛的化學(xué)成分及相關(guān)藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6（4）：115－118.

［3］李銘宗.鐵皮石斛的生物學(xué)特性和人工栽培［J］.福建熱作科技，1999，24（1）：29－31.

［4］李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.2版.上海：上?？萍汲霭嫔?，2006.

［5］李 玲，鄧曉蘭，趙興兵，等.鐵皮石斛化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.腫瘤藥學(xué)，2011，1（2）：90－93.

［6］張俊青，吳 芹，龔其海，等.石京山金釵石斛生物總堿對脂多糖激活星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子的影響［J］.中國藥理學(xué)通報，2011，27（6）：824－827.

［7］張紅玉，戴關(guān)海，馬 翠，等.鐵皮石斛多糖對S180肉瘤小鼠免疫功能的影響［J］.浙江中醫(yī)雜志，2009（5）：380－381.

［8］周暄宣，鮑沈平，楊 倩，等.衰老本質(zhì)和其研究進(jìn)展［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16（25）：20－21.