頭孢替坦二鈉的體外抗菌活性研究

楊信怡 胡辛欣 婁人慧 劉京芳 李聰然 張偉新 宋坤改 母立新 陳慧貞 游雪甫*

（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 醫(yī)藥生物技術(shù)研究所，北京 100050）

頭孢替坦，別名雙硫唑甲氧頭孢菌素，為半合成頭霉素類衍生物，藥用形式為二鈉鹽，屬注射用二代頭孢菌素。頭孢替坦二鈉最早由日本山之內(nèi)制藥株式會社開發(fā)，20世紀(jì)80年代在日本上市，后授權(quán)瑞典阿斯利康在日本以外的國家上市，國際上注冊的商品名有Cefotan和Apatef等[1]。2007年，美國Abraxis制藥公司的頭孢替坦二鈉注射液（仿制藥）獲FDA批準(zhǔn)在美上市。目前，該品種在最新的日本藥局方16版和美國藥典34版中均有收錄，因在我國尚未上市，中國藥典無收錄。頭孢替坦二鈉分子量為619.59（C17H15N7Na2O8S4），血漿蛋白結(jié)合率高，半衰期長，抗菌譜廣，對革蘭陰性菌和厭氧菌抗菌活性強(qiáng)，對革蘭陽性菌作用較弱，對質(zhì)?；蛉旧w介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶十分穩(wěn)定[2]。隨著該品種專利到期，部分國內(nèi)制藥企業(yè)開始仿制并進(jìn)入臨床前評價(jià)階段。本研究以2008～2009年從北京地區(qū)各醫(yī)院分離的20種共663株臨床常見病原菌為對象，以四種頭孢菌素為對照藥，對一種國產(chǎn)頭孢替坦二鈉的體外抗菌活性進(jìn)行評價(jià)。

1 材料與方法

1.1 藥物及配制

頭孢替坦二鈉，批號YJ090701，重慶市慶余堂制藥有限公司生產(chǎn)。對照藥包括：頭孢美唑鈉（二代頭孢），批號JPA0401，日本第一三共普樂發(fā)株式會社生產(chǎn)；頭孢唑啉鈉（一代頭孢），批號K0905556，華北制藥股份有限公司生產(chǎn)；頭孢哌酮鈉（三代頭孢），批號0909062，麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠生產(chǎn)；鹽酸頭孢吡肟（四代頭孢），批號09050211，悅康藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。藥物配制時(shí)按各自實(shí)際活性藥物計(jì)算。

1.2 培養(yǎng)基和試劑

CAMH肉湯、腦心浸液培養(yǎng)基均為美國BD公司產(chǎn)品。MH瓊脂、營養(yǎng)肉湯、中國藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基均購自中國藥品生物制品檢定所。

1.3 細(xì)菌

受試菌株主要為實(shí)驗(yàn)室保存典型菌株及2008-2009年從北京地區(qū)醫(yī)院收集的20種共663株臨床分離菌（其中產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌株535株），革蘭陽性菌有：金黃色葡萄球菌37株（34株產(chǎn)酶，MSSA 21株、MRSA 16株）、表皮葡萄球菌35株（8株產(chǎn)酶，MSSE 18株、MRSE 17株）、化膿鏈球菌18株（均不產(chǎn)酶）、肺炎鏈球菌19株（均不產(chǎn)酶，耐青霉素肺炎鏈球菌PRSP 8株）、糞腸球菌18株（1株產(chǎn)酶）和屎腸球菌19株（均不產(chǎn)酶）。革蘭陰性菌有：大腸埃希菌55株（均產(chǎn)酶，產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌26株）、肺炎克雷伯桿菌56株（均產(chǎn)酶，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯桿菌26株）、銅綠假單胞菌37株（均產(chǎn)酶）、鮑曼不動桿菌37株（均產(chǎn)酶）、奇異變形桿菌37株（22株產(chǎn)酶）、普通變形桿菌37株（36株產(chǎn)酶）、陰溝腸桿菌37株（均產(chǎn)酶）、產(chǎn)氣腸桿菌37株（均產(chǎn)酶）、聚團(tuán)腸桿菌17株（16株產(chǎn)酶）、弗勞地枸櫞酸桿菌37株（均產(chǎn)酶）、異型枸櫞酸桿菌37株（36株產(chǎn)酶）、雷極普魯菲登桿菌19株（均產(chǎn)酶）、摩根摩根氏菌37株（33株產(chǎn)酶）和粘質(zhì)沙雷氏菌37株（均產(chǎn)酶）。細(xì)菌β-內(nèi)酰胺酶采用硝噻吩紙片鑒定，細(xì)菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）鑒定按照CLSI推薦方法進(jìn)行。

質(zhì)控菌選用金黃色葡萄球菌ATCC29213、肺炎鏈球菌ATCC49619、糞腸球菌ATCC29212、大腸埃希菌ATCC25922、ATCC35218（產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶）、肺炎克雷伯桿菌ATCC700603（產(chǎn)ESBLs）、銅綠假單胞菌ATCC27853。質(zhì)控菌MIC均在CLSI參考范圍內(nèi)。

1.4 儀器

多點(diǎn)接種器為英國Denley公司產(chǎn)品；自動分裝器為美國Oxford公司產(chǎn)品；二氧化碳培養(yǎng)箱為美國Forma公司產(chǎn)品；超低溫冰箱為日本Sanyo公司產(chǎn)品；IKA MS2型液體渦漩混合器為廣州儀科實(shí)驗(yàn)室技術(shù)公司產(chǎn)品。

1.5 最低抑菌濃度（MIC）測定

參照CLSI推薦方法，采用平皿二倍稀釋法和多點(diǎn)接種器進(jìn)行MIC測定[3]。藥物用CAMH肉湯二倍稀釋成各種所需濃度，分別加適量到平皿中，MH瓊脂培養(yǎng)基溶化后定量注入含藥液的平皿內(nèi)混勻，藥物的終濃度分別為0.03，0.06，0.125，0.25…128 μg/mL，肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌的培養(yǎng)基中含5%脫纖維羊血。受試菌用營養(yǎng)肉湯或腦心浸液隔夜增菌，試驗(yàn)時(shí)，菌液適當(dāng)稀釋，多點(diǎn)接種器接種試驗(yàn)菌（接種量為104 CFU/點(diǎn)）于含藥瓊脂表面，干燥后置35℃恒溫培養(yǎng)18～24h后觀察結(jié)果，無菌落生長的平皿中所含藥物的最小濃度即為MIC。

表1 頭孢替坦二鈉及其對照藥對663株臨床分離菌的MIC測定(μg/mL)

續(xù)表1

2 結(jié) 果

試驗(yàn)結(jié)果表明，頭孢替坦二鈉為廣譜抗菌活性，對663株臨床分離菌具有不同程度的抗菌作用，對517株革蘭陰性菌普遍具有較強(qiáng)的抗菌作用，對146株革蘭陽性菌的抗菌活性較弱。對耐甲氧西林葡萄球菌抗菌活性弱，而對產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌抗菌作用較強(qiáng)，結(jié)果見表1～表3。

頭孢替坦二鈉對37株金黃色葡萄球菌的抗菌活性較弱，MIC50、MIC90值分別為8μg/mL、＞128μg/mL，抗菌活性弱于四種對照藥。頭孢替坦二鈉對21株MSSA有一定抗菌作用，MIC50、MIC90值均為8μg/mL，弱于四種對照藥；對16株MRSA的抗菌作用弱，MIC50、MIC90值均＞128 μg/mL。

頭孢替坦二鈉對35株表皮葡萄球菌的抗菌活性較弱，MIC50、MIC90值分別為32μg/mL、64μg/mL，對18株MSSE和17株MRSE的MIC50、MIC90值分別為16μg/mL、32μg/mL和32μg/mL、128μg/mL，抗菌活性弱于四種對照藥。

頭孢替坦二鈉對18株化膿鏈球菌、19株肺炎鏈球菌有一定抗菌作用，MIC50值均為4μg/mL，抗菌活性弱于四種對照藥。頭孢替坦二鈉對18株糞腸球菌、19株屎腸球菌的抗菌活性弱，MIC50、MIC90值均＞128μg/mL。

頭孢替坦二鈉對55株大腸埃希菌、56株肺炎克雷伯桿菌的抗菌作用強(qiáng)，MIC50、MIC90值均為0.125μg/mL、4μg/mL，抗菌活性優(yōu)于四種對照藥。頭孢替坦二鈉對26株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和26株產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯桿菌也有較好抗菌作用，MIC50、MIC90值分別為1.4μg/mL和0.5μg/mL、8μg/mL，抗菌活性強(qiáng)于四種對照藥。

頭孢替坦二鈉對37株奇異變形桿菌的抗菌活性強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為0.06μg/mL、0.25μg/mL，抗菌活性強(qiáng)于鹽酸頭孢吡肟和頭孢美唑鈉，明顯優(yōu)于頭孢唑啉鈉和頭孢哌酮鈉；頭孢替坦二鈉對37株普通變形桿菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為0.125μg/mL、2μg/mL，抗菌活性稍弱于鹽酸頭孢吡肟，優(yōu)或遠(yuǎn)優(yōu)于另三種對照藥。 頭孢替坦二鈉對37株陰溝腸桿菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為8μg/mL、128μg/mL，抗菌活性弱于頭孢哌酮鈉和鹽酸頭孢吡肟，明顯優(yōu)于頭孢美唑鈉和頭孢唑啉鈉。

頭孢替坦二鈉對17株聚團(tuán)腸桿菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為2μg/mL、＞128μg/mL，抗菌活性與鹽酸頭孢吡肟相近，優(yōu)于另三種對照藥。

頭孢替坦二鈉對37株弗勞地枸櫞酸桿菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為0.25μg/mL、128μg/mL，抗菌活性稍弱于鹽酸頭孢吡肟，優(yōu)于另三種對照藥。

頭孢替坦二鈉對37株異型枸櫞酸桿菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為0.5μg/mL、128μg/mL，抗菌活性稍弱于鹽酸頭孢吡肟，強(qiáng)于另三種對照藥。

頭孢替坦二鈉對19株雷極普魯菲登桿菌的抗菌活較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為2μg/mL、32μg/mL，抗菌活性優(yōu)于鹽酸頭孢吡肟和頭孢美唑鈉，明顯優(yōu)于頭孢哌酮鈉和頭孢唑啉鈉。

表2 頭孢替坦二鈉及其對照藥對甲氧西林敏感/耐藥葡萄球菌的MIC測定(μg/mL)

頭孢替坦二鈉對37株摩根摩根氏菌抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為2μg/mL、64μg/mL，抗菌活性和頭孢哌酮鈉相近，強(qiáng)于頭孢唑啉鈉和頭孢美唑鈉，弱于鹽酸頭孢吡肟。

頭孢替坦二鈉對37株粘質(zhì)沙雷氏菌的抗菌活性較強(qiáng)，MIC50、MIC90值分別為1μg/mL、32μg/mL，抗菌活性稍弱于鹽酸頭孢吡肟，優(yōu)于另三種對照藥。

頭孢替坦二鈉對37株銅綠假單胞菌、37株鮑曼不動桿菌、37株產(chǎn)氣腸桿菌的抗菌活性弱，MIC50、MIC90值均＞128μg/mL。

3 討 論

與已有報(bào)道相似，MIC數(shù)據(jù)顯示頭孢替坦二鈉對革蘭陰性菌的抗菌作用較強(qiáng)，對革蘭陽性菌的抗菌作用較弱[1]。革蘭陰性菌中，頭孢替坦二鈉除對銅綠假單胞菌、產(chǎn)氣腸桿菌和鮑曼不動桿菌抗菌活性較弱外，對其余受試革蘭陰性菌均具有較高的抗菌活性。不同細(xì)菌的MIC分布情況，可一定程度上為該藥今后的臨床抗感染選擇提供參考。

與對照藥比較，頭孢替坦二鈉對多數(shù)受試革蘭陰性菌的抗菌活性優(yōu)于對照的一、二、三代頭孢，但稍弱于四代頭孢鹽酸頭孢吡肟，其抗革蘭陰性菌的總體表現(xiàn)在受試的頭孢菌素中頗為突出。頭孢替坦二鈉對革蘭陽性菌的體外抗菌活性總體較弱，弱于4種對照藥。對于MRSA和MRSE，因耐藥機(jī)制由β-內(nèi)酰胺類低親和力的PBP2a介導(dǎo)，所以受試的五種頭孢菌素均無明顯抗菌活性[4]。

總之，本研究中，頭孢替坦二鈉對各種產(chǎn)ESBLs 革蘭陰性菌的良好抗菌活性令人印象深刻，值得進(jìn)一步評價(jià)其體外、體內(nèi)抗菌效應(yīng)，期為我國臨床抗感染領(lǐng)域提供又一種用藥選擇。

[1] Ward A,Richards DM.Cefotetan.A review of its antibacterial activity,pharmacokinetic properties and therapeutic use[J].Drugs.1985,30 (5)：382-426.

[2] Sirot D.Extended-spectrum plasmid-mediated beta-lactamases[J].J Antimicrob Chemother,1995,36 (Suppl A)：19-34.

[3] CLSI.Methodsfor Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That Grow Aerobically： Approved Standard M7-A7.Wayne,Pennsylvania 19087-1898 USA[R].2007.

[4] Truesdell SE,Zurenko GE,Laborde AL.Interaction of cephalosporins with penicillin-binding proteins of methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J].J Antimicrob Chemother,1989,23 (Suppl D)：13-19.