無菌塑料瓶無菌檢驗方法的驗證

閆冰，宋新剛，李尊江

（哈藥集團生物疫苗有限公司， 黑龍江哈爾濱 150069）

無菌塑料瓶無菌檢驗方法的驗證

閆冰，宋新剛，李尊江

（哈藥集團生物疫苗有限公司， 黑龍江哈爾濱 150069）

無菌塑料瓶是獸用滅活疫苗的主要內包裝材料，滅活疫苗為非最終滅菌的產(chǎn)品，所以要求用于內包裝材料的塑料瓶在使用前達到無菌。對無菌塑料瓶進行無菌檢驗，是保證產(chǎn)品質量的必要的條件?！吨袊F藥典》2005年版要求在對制品進行“無菌檢驗”及“微生物限度檢驗”時，應進行方法學驗證，以確認試驗中供試品應選擇藥典中所收載的何種供試液制備方法、保種測定方法，保證“無菌檢查”或“微生物限度檢查”方法的科學性和檢驗結果的準確性。

一、樣品與儀器

1.樣品。無菌塑料瓶，規(guī)格為100 ml/瓶，生產(chǎn)批號為091134。

2.試驗用菌種。金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC9027）、生孢梭菌（ATCC11437）、白色念珠菌（ATCC10231）、黑曲菌（ATCC16404）。所有菌株均來自中國獸藥監(jiān)察所。

3.稀釋液。0.9%氯化鈉溶液，經(jīng)121℃30分鐘高壓滅菌。

4.培養(yǎng)基。硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（50 ml/瓶）、葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（50 ml/瓶），均為本公司自制，經(jīng)無菌檢驗及培養(yǎng)基靈敏度試驗合格。

5.儀器設備。薄膜過濾器6套，振蕩儀、生化培養(yǎng)箱。

二、方法與結果

1.方法。

（1）取樣量：每個過濾器取三支塑料瓶，分別加入標示量1/2的氯化鈉無菌水溶液。

（2）每個過濾器取三支塑料瓶，分別加入標示量1/2的氯化鈉無菌水溶液，輕輕振搖涮洗內壁，按薄膜過濾法過濾，取出濾膜分成兩份，分別接種于硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基和葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)，作為供試管。

（3）取3支無菌塑料瓶，分別加入50 ml的氯化鈉溶液，輕輕振搖涮洗內壁，按薄膜過濾法過濾，在最后一瓶塑料瓶涮洗液中加入小于100CFU的金黃色葡萄球菌，過濾。取出濾膜，加入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；作為試驗管1。

（4）按上法操作，按薄膜過濾法過濾，在最后一瓶塑料瓶涮洗液中加入小于100CFU的銅綠假單胞菌，過濾。取出濾膜，加入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；作為試驗管2。

（5）按上法操作，按薄膜過濾法過濾，在最后一瓶塑料瓶涮洗液中加入小于100CFU的生孢梭菌，過濾。取出濾膜，加入硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；作為試驗管3。

（6）按上法操作，按薄膜過濾法過濾，在最后一瓶塑料瓶涮洗液中加入小于100CFU的白色念珠菌，過濾。取出濾膜，加入葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)；作為試驗管4。

（7）按上法操作，按薄膜過濾法過濾，在最后一瓶塑料瓶涮洗液中加入小于100CFU的黑曲菌，過濾。取出濾膜，加入葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基中培養(yǎng)；作為試驗管5。

（8）取硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基3瓶和葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基2瓶，分別加入以上小于100CFU的試驗菌，培養(yǎng)，作為陽性對照管。

（9）取硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基和葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基各一瓶，作為陰性對照。

（10）以上各試驗瓶均按規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5 d，觀察試驗菌的生長情況。

2.方法驗證試驗結果 （見表1）。試驗管5管中的各試驗菌均生長良好，顯示塑料瓶采取的滅菌方法對無菌檢查結果的判斷沒有影響，供試管各管在規(guī)定溫度培養(yǎng)14 d逐日觀察，供試品管均澄清，陽性對照管生長良好，判供試品符合規(guī)定。塑料瓶為產(chǎn)品內包材，本身無抑菌作用，通過方法確認塑料的滅菌方法對無菌檢驗結果的判斷沒有影響，故按實驗方法建立的方法驗試驗，可作為無菌塑料瓶的無菌檢查，但陽性試驗菌只選擇金葡萄球菌即可。

表1 方法驗證試驗結果

三、討論

無菌塑料瓶在獸藥生產(chǎn)領域使用非常廣泛，建立無菌塑料瓶的無菌檢驗方法，是獸藥產(chǎn)品質量的前提保證。薄膜過濾法作為無菌檢查中的一種方法，具有準確、方便、快捷的優(yōu)點，是無菌檢查時所采用的一種重要方法，尤其對樣品液體量較大的樣本，更有其優(yōu)越性，所以該無菌檢查方法驗證對保證結果的可信度和準確性具有重要意義。

（略）