腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因多態(tài)性與散發(fā)性多發(fā)性硬化的關(guān)聯(lián)研究

季曉飛，董惠潔

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧大連 116011;2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科，遼寧大連 116027)

腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因多態(tài)性與散發(fā)性多發(fā)性硬化的關(guān)聯(lián)研究

季曉飛1，董惠潔2

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，遼寧大連 116011;2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科，遼寧大連 116027)

［目的］探討腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)基因多態(tài)性與中國(guó)北方漢族人群中的散發(fā)性多發(fā)性硬化癥的關(guān)聯(lián)。［方法］經(jīng)過(guò)HapMap和Haploview分析，選取tagSNP并通過(guò)PCR-RFLP方法，對(duì)50例非家族遺傳性多發(fā)性硬化患者和50例健康對(duì)照者的BDNF基因多態(tài)性分型進(jìn)行病例對(duì)照研究。［結(jié)果］中國(guó)北方漢族人群BDNF基因存在一個(gè)基因連鎖區(qū)域，選取rs6265、rs2049046和rs962369三個(gè)SNP作為tagSNP。在病例對(duì)照研究中，tagSNP分析及rs6265與rs2049046間的Haploview分析，P均＞0.05。［結(jié)論］腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因多態(tài)性與散發(fā)性多發(fā)性硬化無(wú)明顯關(guān)聯(lián)。

BDNF;多發(fā)性硬化;基因多態(tài)性

多發(fā)性硬化(MS)為遺傳相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性自身免疫性脫髓鞘疾病，中國(guó)北方人群發(fā)病率為5/10萬(wàn)。家系研究及雙生子研究表明其同卵雙生子發(fā)病一致率為15.9% ～31%［1］。目前有研究表明作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘組成細(xì)胞的少突膠質(zhì)細(xì)胞和起中樞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)支持的小膠質(zhì)細(xì)胞在多發(fā)性硬化的發(fā)病機(jī)制中起到關(guān)鍵作用［2-3］。小膠質(zhì)細(xì)胞在少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞受到自身免疫性攻擊后明顯增加BDNF的釋放，促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)及修復(fù)［4］。因此，BDNF的表達(dá)和功能異常有可能導(dǎo)致神經(jīng)髓鞘保護(hù)及修復(fù)降低，造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥性自身免疫損害，增加散發(fā)性多發(fā)性硬化癥的發(fā)病率。本研究通過(guò)對(duì)散發(fā)性多發(fā)性硬化患者和健康對(duì)照者的病例對(duì)照研究，探討B(tài)DNF基因多態(tài)性在散發(fā)性多發(fā)性硬化中的神經(jīng)保護(hù)及修復(fù)作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

病例組的散發(fā)性多發(fā)性硬化50例，均為2007年7月—2010年12月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院患者，無(wú)家族性多發(fā)性硬化癥遺傳病史，祖籍均為山東省或遼寧省漢族人群。多發(fā)性硬化符合2005年修正的McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)照組50例來(lái)自大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院健康職工及家屬，為性別、年齡、教育水平與病例組相匹配的與多發(fā)性硬化無(wú)關(guān)的健康人群(表1)。

表1 病例組與健康對(duì)照組的年齡及性別匹配Tab 1The age and sex between the MS and controls

1.2 標(biāo)本采集

采取受試者靜脈血2 mL，并通過(guò)基因組DNA試劑盒提取基因組DNA備用。

1.3 tagSNP 選擇

通過(guò) HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)(Http://www.hapmap.org)并通過(guò)Haploview ver.3.2軟件定義LD連鎖為D’＞0.80 和 r2＞0.80，通過(guò) LD 分析漢族人群所有BDNF的SNP選取tagSNP。Haplotype tagSNPs被定義為組合分型占到90%以上的Haplotype類型，其中單個(gè)SNP的最小點(diǎn)突變百分比＞5%。

1.4 基因多態(tài)性分析

通過(guò)PCR-RFLP分析BDNF的tagSNP，相關(guān)引物及限制性內(nèi)切酶見(jiàn)表2。

表2 tagSNP的引物及內(nèi)切酶Tab 2 the primers and enzymes of the tagSNPs

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

基因多態(tài)性分型后各 SNP均經(jīng)過(guò) Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)檢驗(yàn)。單個(gè)SNP關(guān)聯(lián)分析，檢驗(yàn)校正分析和關(guān)聯(lián)分析分別通過(guò)SPSS 11.0版本和 COCAPHASE 2.403 版本(http://portal.litbio.org/Registered/Option/unphased)進(jìn)行分析。通過(guò) SNPSpD 軟件(http://genepi.qimr.edu.au/general/daleN/SNPSpD/)進(jìn)行校正分析。顯著性差異統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)被定位0.05。

2 結(jié) 果

2.1 TagSNP 確定

經(jīng)過(guò)Haploview分析中國(guó)北方漢民族人群BDNF基因存在一個(gè)連鎖區(qū)域，rs6265和rs2049046作為連鎖中的tagSNPs，rs962369作為非連鎖中的tag-SNP被進(jìn)行基因多態(tài)性分析(圖1)。

圖1 BDNF基因連鎖區(qū)域及tagSNP選擇Fig 1 The tagSNPs and the block in BDNF gene polymorphism

2.2 相關(guān)性分析

基因多態(tài)性在多發(fā)性硬化和健康對(duì)照組人群中的分型結(jié)果列于表3中。分型結(jié)果均通過(guò)Hardy-Weinberg equilibrium檢驗(yàn)為 P＞0.05，在單一 SNP分析及Haplotype分析中，多發(fā)性硬化病例組與對(duì)照組等位基因的分布無(wú)差別(P＞0.05)。

表3 多發(fā)性硬化與健康對(duì)照組基因多態(tài)性分型結(jié)果Tab 3 the genotype results between MS and controls

3 討 論

通過(guò)單SNP及Haplotype分析，在本研究中BDNF基因多態(tài)性與散發(fā)性多發(fā)性硬化無(wú)明顯相關(guān)。

腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后經(jīng)激活后釋放，促進(jìn)神經(jīng)元及其軸突的修復(fù)及再生，在離體實(shí)驗(yàn)中少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷后小膠質(zhì)細(xì)胞釋放BDNF明顯增加［5］，同時(shí)在多發(fā)性硬化患者的腦脊液及血清生化分析中BDNF的含量與患者的肢體功能恢復(fù)程度呈正相關(guān)［6］，這些研究結(jié)果都提示了BDNF在神經(jīng)元損失后修復(fù)過(guò)程中的重要性。但是在本研究中健康對(duì)照組與多發(fā)性硬化組在BDNF基因多態(tài)性并無(wú)明顯差異，提示BDNF在多發(fā)性硬化神經(jīng)元損害之前并無(wú)強(qiáng)化性的神經(jīng)元保護(hù)作用。在歐洲白種人群的研究中也提示了BDNF的Val66Met與多發(fā)性硬化的發(fā)生無(wú)明顯相關(guān)性［7-8］。

另外，本研究收集到多發(fā)性硬化病例均為散發(fā)性病例，無(wú)多發(fā)性硬化家族史，結(jié)合國(guó)內(nèi)關(guān)于多發(fā)性硬化的研究，均提示多發(fā)性硬化可能為多基因及環(huán)境因素所致疾病，因此，在今后的研究中有必要從更多候補(bǔ)基因及環(huán)境等外部因素對(duì)該疾病進(jìn)行進(jìn)一步研究。

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Relationship between brain-deried neurotrophic factor gene polymorphism and sporadic multiple sclerosis

JI Xiao-fei1，DONG Hui-jie2
(1.Department of Neurology，the First Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116011，China;2.Department of Cardiology，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To explore the relationship between brain-deried neurotrophic factor(BDNF)gene polymorphism in the Han population in north of China and sporadic multiple sclerosis.［Methods］The tagSNPs were selected by Hap-Map and Haploview.Fifty sporadic multiple sclerosis and 50 controls were analysis by PCR-RFLP.［Results］There was one block in BDNF gene polymorphism of Han population in north China.The rs6265，rs2049046 and rs962369 were selected as tagSNP.The tagSNP and Haploview analysis showed there is no significant association between the multiple sclerosis and controls(P＞0.05).［Conclusion］There is no relationship between BDNF gene polymorphism and sporadic multiple sclerosis.

Key words:BDNF;multiple sclerosis;gene polymorphism

R741.02

A

1671-7295(2012)05-0481-03

2012-04-12;

2012-08-31

季曉飛(1979-)，男，遼寧莊河人，主治醫(yī)師，博士。E-mail:jixiaofei11@hotmail.com

董惠潔，主治醫(yī)師。E-mail:donghuijie4@hotmail.com