超聲下觀察芎芍膠囊對(duì)心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的作用1）

陳宇寧，嚴(yán) 萍，林久茂，葉 盈，陳美華

梗死后心功能的變化與多因素有關(guān)，其中很重要的是與新生毛細(xì)血管的數(shù)量關(guān)系密切［1］。以往的研究提示，新生毛細(xì)血管的數(shù)量與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）的表達(dá)呈正相關(guān)。本課題以能顯著促進(jìn)血管新生的芎芍膠囊、丹參顆粒為干預(yù)措施，采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈造成急性心肌梗死為缺血心肌實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，以超聲檢查的指標(biāo)代表心功能，研究心功能與促進(jìn)毛細(xì)血管增生因子間的關(guān)系，以比較芎芍膠囊與丹參顆粒促進(jìn)新生毛細(xì)血管的功效。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠32只，月齡3月～4月，體重（300±20）g。由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)步驟符合國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例。

1.1.2 主要試劑 芎芍膠囊由北京西苑醫(yī)院提供，丹參顆粒由福建省第二人民醫(yī)院提供。

1.1.3 主要設(shè)備 TKR－200C小動(dòng)物呼吸機(jī)由江西省特力麻醉呼吸設(shè)備公司提供；多功能生理記錄儀BL－420E型由成都泰盟儀器廠提供；GE SYSTEMⅤ超聲心動(dòng)圖儀及5MHz多平面經(jīng)食道超聲探頭由美國(guó)GE公司提供。

1.2 心肌梗死動(dòng)物模型的建立 大鼠腹腔注射氯胺酮和安定復(fù)合麻醉后，取仰臥位，術(shù)區(qū)備皮消毒，氣管插管，呼吸機(jī)輔助通氣（300mL／min）。取第2肋間水平橫切口，剪斷胸骨，切開心包，暴露主動(dòng)脈根部，鉗夾左前降支動(dòng)脈暫時(shí)阻斷血流30min后，松開鉗夾的左前降支動(dòng)脈，壓迫穿刺口止血，關(guān)胸復(fù)蘇。假手術(shù)組手術(shù)方法同上，但在冠狀動(dòng)脈下穿線后打一松結(jié)。為防止術(shù)后感染，每天肌肉注射青霉素4×105U／只，連續(xù)3d。

1.3 動(dòng)物分組與給藥 將32只大鼠分為假手術(shù)組（SO組）、模型組（AM組）、芎芍組（XS組）、丹參組（DS組），每組8只，分別用生理鹽水、芎芍膠囊、丹參灌胃給藥。

1.4 超聲心動(dòng)圖儀檢測(cè)心功能的變化 SO組、AM組、XS組和DS組，分別于術(shù)后6周行心臟超聲系列檢測(cè)。具體方法如下：動(dòng)物腹腔注射麻醉（方法同前）后，剔除胸部體毛，取仰臥位，應(yīng)用超聲心動(dòng)圖儀及5MHz多平面經(jīng)食道超聲探頭進(jìn)行體表經(jīng)胸M型及二維超聲心動(dòng)圖檢查，二維超聲掃查角度為15°～20°，深度2cm～3cm，以使幀數(shù)至少達(dá)到200Hz。調(diào)整多平面經(jīng)食道超聲探頭聲束方向，取得腱索水平左心室短軸切面圖像，應(yīng)用M型超聲心動(dòng)圖連續(xù)測(cè)量3個(gè)不同心動(dòng)周期左心室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）、舒張末期內(nèi)徑（LVEED）、左室后壁厚度（LVPWT）、左心室射血分?jǐn)?shù)（LVEF），取平均值。

1.5 小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達(dá) 用ELISA法檢測(cè)心肌組織中VEGF、bFGF的含量，操作步驟參照試劑盒說明進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用One－WayANNOVA分析，方差齊者用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者用Game－Howell檢驗(yàn)；兩組均數(shù)間比較采用成組t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組超聲心功能指標(biāo)比較（見表1）

表1 各組超聲心功能指標(biāo)比較（±s）

表1 各組超聲心功能指標(biāo)比較（±s）

組別 n LVEED（mm） LVESD（mm） LVEF（%）8 4.16±0.06 1.98±0.09 79.14±2.40 AM組 8 6.72±0.11 5.30±0.07 25.56±0.86 XS組 8 4.65±0.131） 3.19±0.241） 48.85±0.641）DS組 8 5.31±0.101）2） 3.83±0.111）2） 38.76±0.681）2）SO組與AM組比較，1）P＜0.01；與XS組比較，2）P＜0.01

2.2 各組小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達(dá)（見表2）

表2 各組小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達(dá)（±s）

表2 各組小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達(dá)（±s）

組別 n VEGF bFGF AM組8 49.37±3.08 12.97±1.32 XS組 8 100.16±2.441） 21.57±6.661）DS組 8 48.50±6.971）2） 13.00±1.901）2）與AM組比較，1）P＜0.01；與XS組比較，2）P＜0.01

2.3 相關(guān)性分析 VEGF、bFGF與LVEF呈正相關(guān)（r值分別為0.813、0.589，P＜0.01）。

3 討 論

AMI的心肌修復(fù)過程與血管狀態(tài)密切相關(guān)，梗死區(qū)內(nèi)是否有血管迅速生成和（或）殘留血管的重新開放對(duì)心肌梗死的預(yù)后有十分重要的作用。促進(jìn)缺血區(qū)血管新生是一種具有吸引力的新穎的治療策略，即通過刺激心肌缺血區(qū)小血管生長(zhǎng)和側(cè)支循環(huán)的形成，實(shí)現(xiàn)心肌缺血區(qū)的“自我搭橋”。因此，血管新生已成為一種旁路生物學(xué)策略。這對(duì)相當(dāng)數(shù)量的彌漫性冠脈病變以及難以接受傳統(tǒng)血管重建治療的患者，可能成為一種極具吸引力的治療模式［2］。

VEGF是一個(gè)密切相關(guān)的生長(zhǎng)因子家族的總稱，它可由內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生。VEGF是迄今為止發(fā)現(xiàn)的唯一特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的生長(zhǎng)因子，由于內(nèi)皮細(xì)胞增殖是血管形成的重要部分，故VEGF可在新生血管的形成過程中發(fā)揮重要作用［3］。bFGF是一種強(qiáng)的血管源性生長(zhǎng)因子，可刺激成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)［4］。目前，VEGF、bFGF對(duì)血管新生調(diào)控的研究備受矚目，兩者對(duì)促進(jìn)血管新生具有協(xié)同作用。多項(xiàng)研究表明，某些中藥制劑，能通過提高缺血區(qū)域局部的VEGF、bFGF的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)新生血管生成，改善心功能［5］。

以往的研究認(rèn)為丹參是有著確切活血化瘀功效，能促進(jìn)梗死區(qū)小血管新生，從而改善心功能［6］。這在本實(shí)驗(yàn)中也觀察到了相應(yīng)的效果，丹參組較假手術(shù)組LVEED、LVESD、LVEF有明顯的改善。芎芍膠囊在以往的研究發(fā)現(xiàn)能促進(jìn)血管新生因子的表達(dá)［7］。而本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，芎芍膠囊較丹參對(duì)心功能改善更明顯。而且芎芍膠囊促進(jìn)缺血區(qū)域局部的VEGF、bFGF的表達(dá)較丹參組明顯。芎芍膠囊較丹參更有效促進(jìn)促進(jìn)缺血區(qū)域局部血管增生。

本研究在促進(jìn)血管新生因子的具體機(jī)制方面，特別是各因子的上下游關(guān)系還未能剖析，期待將來的研究進(jìn)一步闡明。

［1］王智慧，李智博，朱洪權(quán)，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在冠心病患者的表達(dá)及對(duì)心功能的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009 13（1）：72－74.

［2］羅怡軍，劉廠輝，曾艷輝，等.同種異體骨髓干細(xì)胞移植聯(lián)合VEGF干預(yù)對(duì)心肌梗死后左室功能的影響［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9（8）：1490－1492.

［3］Lee SH，Wolf PL，Escudero R，etal.Early expression of angiogenes is factors in acute myocardial ischemia and infarction［J］.N Engl J Med，2000，342（9）：626－633.

［4］Iwai Kanai E，Hasegawa K，F(xiàn)ujita M，etal.Basic fibroblast growth factor protects cardiac myocytes from iNOS mediated apoptosis［J］.J Cell Physiol，2002，190（1）：54－62.

［5］王承龍，史大卓，殷惠軍，等.西洋參莖葉總皂苷對(duì)急性心肌梗死大鼠心肌VEGF、bFGF表達(dá)及血管新生的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，27（4）：331－334.

［6］陳巖，楊關(guān)林，張哲，等.丹參注射液對(duì)心肌梗死后梗死區(qū)及周圍區(qū)血管再生的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2009，27（5）：976－977.

［7］林久茂，莊群川，許艷芳，等.芎芍膠囊對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌血管新生因子的影響［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，4（6）：390－392.