PSE-GC法同時測定餅干中兩種抗氧化劑

林太鳳，張淑芬，王惠琴，鄭大威

（1.北京工業(yè)大學生命科學與生物工程學院，北京100124；2.北京市飲料及食品添加劑質量監(jiān)督檢驗站，北京100124）

PSE-GC法同時測定餅干中兩種抗氧化劑

林太鳳1，2，張淑芬1，2，王惠琴1，2，鄭大威1，2

（1.北京工業(yè)大學生命科學與生物工程學院，北京100124；2.北京市飲料及食品添加劑質量監(jiān)督檢驗站，北京100124）

建立測定餅干中的2種抗氧化劑叔丁基對羥基茴香醚（BHA）和二丁基羥基甲苯（BHT）的加壓溶劑萃取-氣相色譜法（PSE-GC法）。采用PSE法進行樣品萃取，萃取液經中性氧化鋁凈化后，進行GC分析。PSE-GC法測定餅干中BHT和BHA的相對標準偏差（RSD）為0.5%～3.1%，并且在2.0 μg/mL～200.0 μg/mL范圍內色譜峰面積與組分濃度均有很好的線性相關性（r≥0.9994），檢出限為 0.5 μg/mL，回收率為 94.68%～96.80%。PSE-GC 法簡便、快速、效率高，方法的重現(xiàn)性、線性相關性以及檢出限理想，適用于餅干中BHT和BHA含量的同時快速檢測。

加速溶劑萃??；氣相色譜；抗氧化劑；餅干

Abstract:To establish a new method for determining tow antioxidants butylated hydroxyanisole (BHA)and butylated-hydroxytoluene(BHT)in food using pressurized solvent extraction(PSE)and HPLC.The sample was extracted by PSE and the extract was analyzed by GC after clear-up with neutral aluminium oxide.The recoveries of this method ranged from 94.68%to 96.80%with RSDs ranged from 0.5%to 3.1%.The developed method was linear over the range 2.0 μg/mL-200.0 μg/mL with correlation coefficients(r≥0.9994)and the detection limit of the method was 0.5 μg/mL.this method is simple,fast,affective,and has good repetition.It can be used for the simultaneous determination of BHA,BHT in biscuit.

Key words：pressurized solvent extraction;GC;antioxidant;biscuit

叔丁基對羥基茴香醚與二丁基羥基甲苯是2種具有持久抗氧化能力并廣泛用于油脂類食品中的添加劑。目前國標方法對BHA及BHT檢測的前處理方法比較繁瑣費時，無法應對突發(fā)事件的快速檢測?？焖賶毫θ軇┹腿》ň哂锌焖佟⑤腿⌒矢?、重復性和精密度好等特性，已在藥物分析[1-4]、環(huán)境分析[5-9]、食品質量安全控制[10-13]等都有了廣泛的應用，氣相色譜分析法輔以PSE能很好實現(xiàn)抗氧化劑的快速檢測。本文對PSE-GC法快速檢測餅干中的兩種抗氧化劑（BHA和BHT）進行了研究。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑1.1.1 儀器

6890N型氣相色譜儀（附氫火焰離子化檢測器F ID）：美國Agilent公司；快速壓力溶劑萃取系統(tǒng)：美國應用分離公司；DryVap全自動定量濃縮系統(tǒng)：美國Horizon公司。

1.1.2 試劑

BHA標準品：德國Aμgsburg公司；BHT標準品：美國Supelco公司；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、中性氧化鋁（分析純）：以上所用試劑均為國產試劑。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

氣相色譜柱為HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm,Aglient）。程序升溫：初溫為130℃，以10℃/min的升溫速率升至200℃。進樣口溫度和檢測器溫度分別為250℃和270℃；載氣為N2，流速為1.2 mL/min，分流比為 10∶1，進樣量為 1 μL。

1.2.2 標準曲線的制備

精確稱取BHA、BHT標準物各0.1000 g，用甲醇溶解并定容至100.00 mL，此為BHA與BHT的混合標準溶液，各組分質量濃度均1.0 mg/mL。然后分別定量吸取BHA和BHT混合標準溶液，采用甲醇逐級稀釋的方式，得到 2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL的混合標準工作液。然后分別吸取1 μL樣品進行GC色譜分析，并以BHA和BHT的質量濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線并進行線性回歸。

1.2.3 樣品處理

準確稱取10 g（精確至0.01 g）粉碎后的餅干樣品于22 mL萃取釜中進行萃取。按設定的萃取條件進行PSE萃取。萃取液濃縮至1 mL左右，用甲醇-乙腈溶液（1∶1）定容至5.00 mL，作為樣品溶液。吸取1.0 mL樣品溶液，加入0.5 g中性氧化鋁，振蕩，靜置，吸取上清液經0.22 μm微孔濾膜過濾，進行GC分析。

1.2.4 PSE萃取條件

萃取溫度：90℃；萃取壓力：120 bar；萃取時間：5 min；萃取釜：22 mL；循環(huán)次數(shù)：3 次；氮氣吹掃：1 min；萃取溶劑：甲醇：乙腈=1∶1。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

圖1為在給定的色譜條件下的標準樣品色譜圖。

圖1 標準溶液色譜圖Fig.1 Chromatogram of standard solution

從圖1可以看出組分BHA和BHT具有較好的分離度，并在5 min內就能完成一次樣品分析，具有較高的分析效率。

2.2 標準曲線和檢出限

將系列標準工作液注入氣相色譜儀進行測定，以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標繪制標準曲線，信噪比（S/N）為3對應的BHA和BHT的濃度為檢出限。結果表明 BHA 和 BHT 在 2.0 μg/mL～200.0 μg/mL濃度范圍內均有很好的線性相關性，回歸方程、相關系數(shù)和檢出限見表1。

表1 BHA與BHT的回歸方程、相關系數(shù)及檢出限Table 1 Regression equations and correlation coefficients and detect limit

2.3 萃取液凈化方法的選取

采用PSE萃取方法萃取BHA和BHT的同時，會有少量油脂被萃取出來，如果樣品液經過濃縮后直接進入氣相色譜儀中，容易污染色譜柱，影響色譜柱的使用壽命。在國家標準方法[14]中采用過柱方法對樣品溶液進行進化，但是這種方法的比較復雜且耗時較長，采用中性三氧化二鋁直接凈化樣品，同樣能達到很好的油脂去除效果，很好地保護色譜系統(tǒng)。

2.4 加標回收率分析

在本實驗的分析條件下，分3個添加水平2平行進行回收率試驗，加入量及回收率結果見表2。

方法的回收率為 BHA 94.32%～97.10%、BHT 94.92%～97.20%。對每個樣品連續(xù)進樣6次進行精確度測試實驗，RSD在0.5%～3.1%范圍內，由此可見方法的回收率高，相對標準偏差小，重現(xiàn)性好。

表2 BHA和BHT的回收率試驗結果Table 2 Recoveries for BHA and BHT at three levels

2.5 市售樣品的測定

按實驗建立的方法對兩種市售樣品進行檢測，這2種食品檢測出了BHA和BHT，但單項和總量均未超過《中華人民共和國食品添加劑使用衛(wèi)生標準》的規(guī)定量[14]，結果見表 3。

表3 餅干中BHA和BHT的測定結果Table 3 Analytical results of BHA and BHT in biscuit

3 結論

采用PSE方法對餅干中的2種抗氧化劑BHA和BHT進行提取，萃取液經中性氧化鋁凈化后，利用GC進行分析測定，從而建立了餅干中兩種抗氧化劑的PSE-GC新方法。比較國家標準方法[15]，采用PSE萃取食品中的BHA和BHT，大大縮短了樣品前處理所需時間，還可以進行批量檢測。此外，采用中性氧化鋁對萃取液直接進行凈化，同樣能達到去除萃取液中油脂，提高測定效率的目的。該方法簡便快速、效率高，方法的重現(xiàn)性、線性相關性以及檢出限理想，能滿足目前食品安全快速檢測的要求。

[1]陳軍輝,楊佰娟,李文龍,等.加速溶劑萃取技術在中藥有效成分分析中的應用[J].色譜,2007,25(5)：628-632

[2]楊運云,黃深惠,馮鋒,等.加速溶劑萃取/HPLC-MS對毛冬青藥材中Ilexgenin A與Ilexsaponin A1含量的測定[J].分析測試學報,2009,28(8)：966-969

[3]張玉,吳慧明,余建偉,等.加速溶劑萃取技術提取柑橘皮中總黃酮的工藝研究[J].食品科技,2007,32(11)：213-215

[4]李文龍,陳軍輝,殷月芬,等.加速溶劑萃取-高效液相色譜-電噴霧飛行時間質譜聯(lián)用分析蓮子心中生物堿[J].分析化學,2008,36(1)：885-888

[5]張敏,李軼,陳東雨.加速溶劑萃取技術在土壤樣品分析中應用的研究進展[J].土壤通報,2010,41(3)：757-760

[6]陳金花,宋春生,張建華,等.乙酸乙酯加速溶劑萃取-高效液相色譜法測定土壤中的多環(huán)芳烴[J].福建分析測試,2010,19(1)：19-23

[7]胡正君,史亞利,蔡亞岐.加速溶劑萃取氣相色譜質譜法測定污泥、底泥及土壤樣品中的合成麝香[J].分析化學,2010,38(6)：79-82

[8]石麗明,劉美美,王曉華,等.提取土壤中正構烷烴的方法研究[J].巖礦測試,2010,29(2)：104-108

[9]Test Methods for Evaluating Solid Waste,Method 3545[S].USEPA SW-846,3rd,ed,UpdateⅢ,US GPO,Wash-ington D C,1995

[10]Adou K,Bontoyan W,Sweeny P J.Multiresidue method for the analysis of pesticide residue in fruits and vegetables by ASE and capillary GC[J].Jofagricultureandfoodchemistry,2001(49)：4153-4160

[11]陳溪,劉瑩,黃大亮,等.加速溶劑萃取(ASE)-全自動凝膠凈化/在線定量濃縮聯(lián)用儀(GPC/EVA)-氣相色譜(GC)法測定植物源性食品中有機氯、菊酯類農藥殘留量[J].分析試驗室,2010,29(S1)：334-337

[12]王耀,胡浩光,謝翠美,等.加速溶劑萃取-凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜測定咸魚中的敵敵畏[J].食品科學,2010,31(14)：268-271[13]張?zhí)矣?用ASE快速溶劑萃取茶葉中六六六、DDT的殘留[J].食品研究與開發(fā),2004,25(2)：115-117

[14]GB 2760-2007中華人民共和國食品添加劑使用衛(wèi)生標準[S].

[15]GB/T5009.30-2003食品中叔丁基羥基茴香醚(BHA)和2,6-二叔丁基羥基甲苯(BHT)的測定[S].北京：中國標準出版社,2004：241-249

Determination of Two Antioxitants in Biscuit by Pressurized Solvent Extraction and GC

LIN Tai-feng1,2,ZHANG Shu-fen1,2,WANG Hui-qin1,2,ZHENG Da-wei1,2
（1.College of Life Science and Bio-engineering,Beijing University of Technology,Beijing 100124,China;2.Quality Supervision and Inspection Station of Beverages and Food Additives of Beijing,Beijing 100124,China）

2011-12-11

林太鳳（1978—），男（漢），助理研究員，碩士研究生，主要從事食品質量與安全分析研究。