豬附紅細胞體病診斷及防控

Ludwig E.Hoelzle（德國霍恩海姆大學(xué) 教授）

豬附紅細胞體病診斷及防控

Ludwig E.Hoelzle（德國霍恩海姆大學(xué) 教授）

豬附紅細胞體病是由豬嗜血支原體（Mycoplasma suis）即豬附紅細胞體感染而引起的一種細菌性疾病。急性感染和慢性感染的癥狀有所不同。仔豬、臨產(chǎn)母豬和處于應(yīng)激狀態(tài)的育肥豬發(fā)生急性感染后，出現(xiàn)溶血性貧血，嚴重時危及生命。慢性感染主要表現(xiàn)為輕微貧血、繁殖障礙、免疫抑制，并易感染其他疾病?；疾∽胸i易出現(xiàn)貧血、輕度黃疸、瘦弱；育肥豬則生長遲緩、易感染呼吸系統(tǒng)疾病和腸道疾?。荒肛i則出現(xiàn)繁殖周期紊亂等?？傊?，急性感染和慢性感染都會降低豬的生產(chǎn)性能，使抗生素的使用增加，給養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。在當(dāng)今的養(yǎng)殖環(huán)境下，豬附紅細胞體病還會產(chǎn)生人畜共患問題。

1 附紅細胞體的病原學(xué)分析

豬附紅細胞體是一種直徑為0.3～3μm的多形細菌，基因呈環(huán)形雙鏈結(jié)構(gòu)。通過對豬附紅細胞體的兩個菌株（ki 3806和ilinois）進行全基因組分析，發(fā)現(xiàn)其基因組可達到70萬bp以上（圖1），而一般病毒的基因組在幾萬到十幾萬bp之間，而RNA病毒的基因組更小，只有幾千bp。對其進一步進行功能分析，還發(fā)現(xiàn)了一些毒力因子：一是亮氨酰氨肽酶，它與附紅細胞體在紅細胞中的存活有關(guān)；二是在金黃色葡萄球菌和化膿性鏈球菌中發(fā)現(xiàn)的一種毒力調(diào)節(jié)因子CVFA；三是RNAP，即一種可以提高轉(zhuǎn)錄特異性的RNA聚合酶，該蛋白在B型鏈球菌屬中可以通過阻止吞噬作用的進行從而引發(fā)敗血癥，附紅細胞體引起的敗血癥就可能因為RNAP是其毒力因子；四是鉀吸收系統(tǒng)TrKa，在一種嗜鹽弧菌中曾發(fā)現(xiàn)其具有抗血清的作用，既然附紅細胞體生活在宿主血清中，這種毒力因子可能會提高其抗血清作用。

豬附紅細胞體主要寄生在紅細胞表面（圖2），使紅細胞發(fā)生變形甚至遭到破壞。與寄生蟲的生長類似，附紅細胞體吸附在紅細胞表面，形成復(fù)合體。復(fù)合體含有兩種成分：一種是類似于磷酸甘油醛脫氫酶的一類蛋白即MSG，另一類是α烯醇化酶。此復(fù)合體容易與后續(xù)感染的病原菌（如大腸桿菌）結(jié)合，促進紅細胞裂解，使大腸桿菌變異體牢固地吸附在紅細胞上。

2 豬附紅細胞體病的流行病學(xué)特點

在德國，約40.3%的豬場發(fā)生過豬附紅細胞體病，場內(nèi)豬只的陽性檢出率可以達到13.9%。我國除了西藏以外，其他地區(qū)均發(fā)現(xiàn)過該病。2002年，國家流行病學(xué)中心檢測該病的發(fā)病率達到30%，死亡率為10%～20%。在德國，采用實時熒光定量PCR對359份野豬樣品進行分析，發(fā)現(xiàn)36份樣品為豬附紅細胞體陽性，感染的豬附紅細胞體可以分為兩種類型，一種是美國歐洲型illinois，一種是中國的廣東型。

3 豬附紅細胞體病的診斷方法

截至目前，還未建立附紅細胞體的體外培養(yǎng)系統(tǒng)。在分類學(xué)上，豬附紅細胞體與支原體類似，將其在支原體培養(yǎng)基以及改良的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，雖然可以生長，但量沒有增加，有時反而會下降。在電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，豬附紅細胞體能在紅細胞中生長是因為先形成復(fù)合體，再轉(zhuǎn)移到紅細胞中。但豬附紅細胞體在培養(yǎng)基中無法形成復(fù)合體，因此無法進行體外培養(yǎng)而獲得大量菌株，也就無法進行實驗室診斷。臨床診斷主要依賴于顯微鏡檢測，即將血細胞染色后在顯微鏡下進行觀察，此種方法需要血液中附紅細胞體的含量大于105個/mL，因此檢測的特異性和靈敏度都較差。

分子技術(shù)檢測比較靈敏，尤其是基于rpoB基因和MSG蛋白的16s rDNA的PCR擴增技術(shù)，其檢測限可以低至10GE，特異性和靈敏性都較高，是一種診斷動物感染附紅細胞體的有效方法。

豬感染附紅細胞體后在12周時IgG抗體濃度達到峰值（圖 3），因此可采用血清學(xué)方法 （如 ELISA）進行診斷。ELISA有全細胞ELISA和重組ELISA兩種。全細胞ELISA需要從感染附紅細胞體的豬中純化出抗原，而這些抗原各個批次之間差異較大，且需要在特定的實驗室進行。因此，全細胞ELISA不能在急性發(fā)病情況下使用，而且無法制定標準的血清學(xué)診斷程序，進而無法對豬附紅細胞體病進行定期診斷。大腸桿菌產(chǎn)生的重組蛋白HspA1和MSG1蛋白具有附紅細胞體抗原特性，用這兩種蛋白進行重組ELISA反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)與全細胞ELISA相比，HspA1和MSG1重組ELISA的檢測靈敏性高于或等于全細胞ELISA（94.0%和100.0%vs.94.0%），而三者之間的特異性相當(dāng)（100.0%和94.0%vs 96.0%）?？梢?，重組ELISA適用于定期檢測附紅細胞體病，以便進行致病學(xué)研究和大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查。

4 豬附紅細胞體病的防治方法

該病可以采用疫苗免疫進行防治。但疫苗技術(shù)現(xiàn)在還不成熟，即將MSG與大腸桿菌連接后，生產(chǎn)出亞單位疫苗注入豬的體內(nèi)，雖然在一定程度上可以減輕貧血癥的發(fā)生，但豬并未得到完全保護，易造成免疫失敗。

5 總結(jié)

豬附紅細胞體在全世界都有分布，在野豬身上也能分離到，易造成貧血癥。該病具有人畜共患病的危險，通過血液污染產(chǎn)品進行傳播。截至目前，不能用專門的宿主細胞進行培養(yǎng)，PCR檢測具有高度的敏感性和特異性。在防治措施上，可以用MSG制成的亞單位疫苗進行免疫，但不能提供完全的免疫保護。未來若能分析出豬附紅細胞體的完全蛋白質(zhì)序列，將有助于人類發(fā)明更有效的檢測技術(shù)，以便對該病進行診斷和預(yù)防。