小菜蛾室內繼代飼養(yǎng)技術及冷藏條件優(yōu)化

朱九生，王 靜

（山西省農(nóng)業(yè)科學院，山西省農(nóng)藥重點實驗室，山西太原030031）

小菜蛾（Plutella xylostella L.）又名菜蛾，俗名二頭尖、吊絲蟲等，屬鱗翅目菜蛾科，是世界性十字花科蔬菜的重要害蟲之一。由于其世代周期短，抗藥性發(fā)展快，抗逆能力強且世代重疊，對其防治十分困難，目前，生產(chǎn)上均以農(nóng)藥防治為主[1-3]。為了篩選高效、低毒防治小菜蛾的新藥劑或新劑型，需要有大量發(fā)育整齊、蟲齡一致的蟲源，因此，小菜蛾人工飼養(yǎng)成為農(nóng)藥毒力測定的關鍵，同時也是小菜蛾生理學、病理學等研究的基礎。

目前，小菜蛾實驗室飼養(yǎng)常用的方法有蘿卜幼苗法[4]、蓮花白繁育法[5]、人工飼料法以及半合成人工飼料法[6]等，這些方法的主要缺點要么需要特定的工具，要么需要特殊的配方，操作起來比較復雜，一般的實驗室使用有一定的局限性。

本試驗在前人研究的基礎上，對小菜蛾室內飼養(yǎng)方面進行了探索，主要使小菜蛾產(chǎn)卵于產(chǎn)卵卡上，并將卵卡直接放在油菜苗上孵化和飼養(yǎng)，得到大量發(fā)育整齊的供試昆蟲。同時，在卵期和蛹期低溫冷藏對小菜蛾發(fā)育影響方面進行了全面而系統(tǒng)的研究，為小菜蛾的人工飼養(yǎng)提供了科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

油菜品種：四月慢油菜（Brassica chinensis），大河東種業(yè)有限公司制種，市售。

供試蟲源：小菜蛾，2010年9月采自太原市小店區(qū)東蒲村苤藍田里的老齡幼蟲，此種群已在室內連續(xù)飼養(yǎng)15代，期間未接觸任何農(nóng)藥。

1.2 試驗方法

1.2.1 飼養(yǎng)材料的培育 將油菜種子在自來水中浸泡3 h，再在96.8%多菌靈1 000倍液中浸泡1 h，撈出后用清水沖洗，晾干備用。在400 mm×300 mm×35 mm搪瓷盤中裝入蛭石（厚度不超過搪瓷盤高度的2/3），經(jīng)烘箱140℃烘烤2 h后，用噴壺噴淋營養(yǎng)液至飽和（10 mL全植物用營養(yǎng)液加500 mL水），然后將8～10 g已消毒過的小油菜種子均勻撒播在蛭石表層，上面再蓋一薄層蛭石，在溫度、濕度等參數(shù)設置好的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。種子發(fā)芽后，將菜苗置于室內，待實生苗長到約60 mm高、子葉已經(jīng)展開時，即可將小菜蛾卵卡放在菜苗上開始飼養(yǎng)試驗。

1.2.2 小菜蛾的人工飼養(yǎng) 卵的收集：將發(fā)育良好的小菜蛾蛹80～100頭放入直徑95 mm、高100 mm自制的產(chǎn)卵瓶中（瓶口留有縫隙和小孔，便于更換卵卡和滴加蜂蜜水），并將其置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4 d后小菜蛾開始羽化、交尾、產(chǎn)卵，隨后每天收集更換產(chǎn)卵卡，并滴加10%蜂蜜水，便于成蟲補充營養(yǎng)。收集到的卵卡可直接放到油菜苗上孵化，也可放到冰箱中冷藏保存?zhèn)溆?。產(chǎn)卵卡為綠色的吹塑紙，用油菜汁液浸泡后備用。

幼蟲飼養(yǎng)：將卵卡放到培植好的菜苗上，并將菜苗置于光照培養(yǎng)箱中，2.5～3.5 d大部分卵孵化，初孵幼蟲即在菜苗上取食，幼蟲取食子葉和部分莖稈。幼蟲共有4個齡期，初孵幼蟲蟲體較小，食量小，隨著幼蟲生長，食量增加；一般幼蟲孵化約4 d，大多幼蟲進入三齡期則可將幼蟲從菜苗上抖落下來進行生物制劑的標準化測試。如果留種用，則適當延長幼蟲在菜苗上的取食時間1～2 d，后將幼蟲抖落下來，在養(yǎng)蟲缸內用新鮮無毒油菜葉飼養(yǎng)至化蛹。收集到的蛹可直接放到產(chǎn)卵瓶中羽化產(chǎn)卵，也可放到冰箱中冷藏保存?zhèn)溆谩ＭǔＲ槐P油菜苗可放卵1 000粒左右。

1.2.3 卵低溫冷藏試驗 收集12 h內所產(chǎn)的卵。將卵卡在體視鏡下計數(shù)，放入培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿底部墊一層濾紙，并滴加少量蒸餾水保濕，隨后置于冰箱冷藏室中保存。冷藏室溫度4～5℃，冷藏時間設置為 0，5，10，15，20，25 d。冷藏期間，每5d往培養(yǎng)皿中的濾紙上滴加少量蒸餾水1次。到冷藏時間，從冰箱冷藏室中取出卵卡，放在培植好的油菜苗上，并將其置于光照培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)，每天早晚各鏡檢卵1次，記錄未孵化卵粒數(shù)，孵化結束后計算卵歷期和孵化率。待7～8 d后，將蟲子全部從油菜苗上抖落下來，記錄所有幼蟲數(shù)量，并放入大號養(yǎng)蟲缸中，添加無毒新鮮的油菜葉飼養(yǎng)至化蛹，計算化蛹率并稱量蛹質量，同時觀察蛹的羽化情況，計算羽化率。每處理重復4次，每重復60～80粒卵。

1.2.4 蛹低溫冷藏試驗 收集48 h內所化的蛹，并將其放入培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)皿底部墊一層濾紙，并滴加少量蒸餾水保濕，隨后置于冰箱冷藏室中保存。冷藏室溫度4～5℃，冷藏時間設置為0，5，10，15，20，25 d。到冷藏時間，將蛹從冰箱中取出，單頭分裝于玻璃試管，編號，放入光照培養(yǎng)箱中羽化。每天早晚各觀察1次，記錄羽化和雌、雄情況。羽化開始后，將當天羽化的成蟲配對，放入玻璃試管中，每管1對，放入產(chǎn)卵卡，管口用棉塞封緊（棉塞上黏有蜂蜜水小棉球1個），編號，放入光照培養(yǎng)箱中產(chǎn)卵。每天收集和更換卵卡，記錄卵量，同時觀察記錄雌、雄成蟲死亡情況。重復4次，每處理60頭蛹。

1.2.5 成蟲產(chǎn)卵動態(tài)調查 將蛹在光照培養(yǎng)箱中羽化、配對，調查72頭雌成蟲產(chǎn)卵量。調查方法同1.2.4。

1.3 小菜蛾繁育和菜苗培植條件

小菜蛾繁育和菜苗培植在光照培養(yǎng)箱中進行，溫度為（25±1）℃、相對濕度為60%～75%、光周期為14 L∶10 D。

1.4 數(shù)據(jù)分析

不同處理的蛹質量、壽命和產(chǎn)卵量等指標均用SPSS11.5軟件進行方差分析，并采用Duncan新復極差法進行平均數(shù)的多重比較（0.05水平）?；悸?、羽化率等數(shù)據(jù)先進行反正弦轉換，再采用上述方法進行分析。

2 結果與分析

2.1 飼喂小油菜苗的小菜蛾各蟲態(tài)歷期及發(fā)育狀況

在溫度（25±1）℃、相對濕度60%～75%、光周期14 L∶10 D的條件下，采用小油菜苗飼養(yǎng)小菜蛾的室內試驗結果表明，小菜蛾卵期為2.9 d，幼蟲期為7.0 d，預蛹期為1.0 d，蛹期為4.2 d，產(chǎn)卵前期為1.0 d，雌成蟲壽命為22.0 d。小菜蛾的世代歷期為14.0～18.5 d。小菜蛾雌雄性比為1∶1.19，單頭雌蟲產(chǎn)卵量為135.1粒，孵化率為87.1%，化蛹率為75.3%，蛹質量為5.4 mg/頭，羽化率為94.0%。在室內已飼養(yǎng)小菜蛾15代，種群未出現(xiàn)退化現(xiàn)象，說明室內用油菜苗飼養(yǎng)小菜蛾是可行的，能夠保證小菜蛾的正常發(fā)育和繁殖。采用此方法飼養(yǎng)小菜蛾，一年可繁殖20代左右。

2.2 小菜蛾的產(chǎn)卵動態(tài)

對72頭雌成蟲每日產(chǎn)卵量進行統(tǒng)計分析，結果表明，單頭雌成蟲平均產(chǎn)卵量為135.1粒，最高的可達322粒，但也有相當數(shù)量的成蟲（約占15%）在觀察期20 d內沒有產(chǎn)卵。有約45%的雌成蟲在羽化當天或羽化后1～5 d開始產(chǎn)卵，有約40%的雌成蟲羽化后6～10 d開始產(chǎn)卵，其余的10 d后開始產(chǎn)卵。

產(chǎn)卵動態(tài)結果（圖1）顯示，產(chǎn)卵高峰在成蟲羽化后第3天，羽化后第4～9天產(chǎn)卵量仍維持在較高水平，第10天產(chǎn)卵量開始緩慢下降，至第15天后產(chǎn)卵量下降明顯。統(tǒng)計結果表明，前5 d產(chǎn)卵量占總量的30.6%，前10 d產(chǎn)卵量占總量的66.2%。由于10 d后所產(chǎn)的卵孵化率相對較低，因此，可以在小菜蛾成蟲羽化后10 d內收集大部分的卵供試驗用。

2.3 卵期低溫冷藏不同時間對小菜蛾生長發(fā)育的影響

測定結果（表1）表明，低溫冷藏時間對小菜蛾卵發(fā)育有一定的影響。卵期冷藏處理（4～5℃）后，隨著冷藏時間的延長，距孵化天數(shù)變短，冷藏10 d開始與對照組之間呈顯著差異，但各處理的卵均在2.2～2.9 d內孵化。總體而言，孵化率隨冷藏時間的延長有下降的趨勢。冷藏5～10 d的卵孵化率在83.2%～86.4%之間，而冷藏15～20 d的卵孵化率下降到78.7%～79.6%，卵冷藏到25 d時，其孵化率降至69.1%，顯著低于對照組?；悸?、蛹質量和羽化率隨冷藏時間的延長整體也均呈下降（冷藏15 d的羽化率除外）的趨勢，但冷藏5～15 d內，這3種指標與對照組之間均無顯著差異。因此，對小菜蛾留種而言，低溫冷藏（4～5℃）貯備蟲卵的時間應控制在15 d以內，否則會影響小菜蛾的蛹質量和羽化率；而對繁殖試蟲而言，低溫冷藏時間可適當延長至20 d。

表1 卵期低溫冷藏不同時間對小菜蛾生長發(fā)育的影響

2.4 蛹期低溫冷藏不同時間對成蟲羽化及繁殖的影響

從表2可以看出，蛹低溫冷藏（4～5℃）處理后，隨著冷藏時間的延長，距羽化的天數(shù)變短，冷藏15 d開始與對照組之間呈顯著差異，但各處理的蛹均在2.9～4.2 d內羽化?？傮w而言，羽化率隨冷藏時間的延長有下降的趨勢。冷藏5～15 d的蛹羽化率在91.7%～96.7%之間；冷藏20 d的蛹羽化率下降到85.0%；而冷藏到25 d時，其羽化率降至81.5%，顯著低于對照組。雌蛾壽命和產(chǎn)卵量隨冷藏時間的延長有下降（冷藏15 d的產(chǎn)卵量除外）的趨勢，冷藏5～15 d內，雌蛾壽命和產(chǎn)卵量與對照組之間均無顯著差異，冷藏20～25 d，這2種指標與對照組之間差異顯著。說明，實驗室低溫冷藏（4～5℃）蛹，應控制 在15 d內為宜。

表2 蛹期低溫冷藏不同時間對小菜蛾羽化及繁殖的影響

3 小結與討論

試驗結果表明，小油菜苗是小菜蛾室內大量繁殖的理想材料。它具有發(fā)芽快、出苗整齊、苗持續(xù)時間長的特點。用小油菜苗飼養(yǎng)的小菜蛾，各蟲態(tài)發(fā)育良好，其產(chǎn)卵量、孵化率和化蛹率較高，雌雄性比接近自然種群，且繁育的幼蟲蟲體健壯，歷期整齊，可隨時提供大量的蟲齡一致的試蟲，供殺蟲劑生物測定或其他研究使用。在小油菜苗的培育過程中，種子和培養(yǎng)基質的消毒是獲得壯苗的關鍵，同時在管理過程中要合理控制基質的水分，否則易造成菜苗的腐爛或徒長倒伏。小油菜的播種及培育時間可根據(jù)試驗進度的要求隨時進行調整。

目前，小菜蛾的室內人工飼養(yǎng)方法大多是讓成蟲在培植好的菜苗上或菜葉上產(chǎn)卵[4-9]，雖然符合昆蟲的產(chǎn)卵天性，但產(chǎn)卵量計數(shù)困難，且不易冷藏，同時每天更換菜苗時成蟲逃逸現(xiàn)象比較嚴重。而本研究設計的產(chǎn)卵瓶，在瓶口留有縫隙和小孔，并在瓶內固定有接納蜂蜜水的棉條，便于每天更換卵卡和給成蟲補充營養(yǎng)，同時也杜絕了成蟲逃逸現(xiàn)象的發(fā)生，操作簡單，實用性強。產(chǎn)卵卡用油菜汁液浸泡后增加了其產(chǎn)卵誘集效果。更換下來的卵卡，可在體視鏡下檢查記錄卵的數(shù)量后直接放到小油菜苗上孵化飼養(yǎng)，也可放在冰箱冷藏室中貯存?zhèn)溆谩１狙芯糠椒ㄔ谟紫x進入4齡期后，將其從菜苗上抖落到養(yǎng)蟲缸中，用新鮮無毒油菜葉片飼養(yǎng)至化蛹，大大簡化了收蛹操作難度。收集到的蛹可直接放到產(chǎn)卵瓶中羽化產(chǎn)卵，也可在冰箱冷藏室中貯存?zhèn)溆谩?/p>

為了獲得大量蟲齡基本一致的蟲源，可通過低溫冷藏方式貯備足量的卵、蛹，讓其統(tǒng)一或成批孵化或羽化[10]。對于過量或暫時不用的卵、蛹，也可通過低溫冷藏方式保存?zhèn)溆?。本試驗結果顯示，在低溫4～5℃條件下，對小菜蛾留種而言，貯備蟲卵的時間應控制在15 d以內，否則會影響小菜蛾的其他生物學指標；而對繁殖試蟲而言，蟲卵的低溫冷藏時間可適當延長至20 d。在同樣的條件下，實驗室低溫冷藏蛹的時間應控制在15 d內為宜。在卵或蛹冷藏過程中，注意每隔5 d往濾紙上滴加適量蒸餾水，以保持冷藏環(huán)境濕潤，否則會縮短卵或蛹的冷藏時間。

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