壺瓶棗總黃酮抗氧化性研究

王迎進(jìn)，閆瑾璠，趙雅琴，張書書，蘆婧

（忻州師范學(xué)院生化分析技術(shù)研究所，山西忻州 034000）

壺瓶棗（Zizyphus jujuba cv.Huping）為鼠李科（Rhamnaceae）棗屬植物果實。主要產(chǎn)于山西太谷、榆次、平遙、交城、清徐等地。壺瓶棗含有大量的黃酮類、有機酸、三萜類、環(huán)磷酸腺苷、維生素、微量元素等[1-2]。研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物有抗炎、抗病毒、利膽、強心、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等作用[3-4]。因而，黃酮類化合物以其營養(yǎng)及保健作用引人矚目。近年來，有關(guān)棗類黃酮提取工藝和抗氧化性的研究屢見報道[4-5]，然而關(guān)于壺瓶棗黃酮抗氧化性方面的研究卻鮮見報道。本研究采用超聲強化提取的方法，提取了壺瓶棗黃酮，研究了壺瓶棗黃酮對羥基、超氧陰離子、DPPH 3種不同自由基的清除能力，旨在為壺瓶棗黃酮的進(jìn)一步研究和開發(fā)奠定一些基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 材料

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707；壺瓶棗：產(chǎn)地山西省，太谷縣；實驗用水為蒸餾水，其它試劑均為分析純。

1.2 儀器

752型紫外光柵分光光度計：上海精密科學(xué)儀器有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；SHZ-D（III）型循環(huán)水式真空泵：河南豫華儀器有限公司；HH-S型恒溫水浴鍋：陜西太康生物科技有限公司。

2 方法

2.1 黃酮含量的測定方法

2.1.1 對照品溶液的制備

精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解，定容于50mL容量瓶中，制得濃度為0.20mg/mL的對照品溶液。

2.1.2 最大吸收峰的確定

精確吸取蘆丁對照品溶液2 mL，加5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min，加10%氫氧化鈉溶液4.0 mL，用蒸餾水定容至10 mL，搖勻，放置15 min，于400 nm～600 nm波長處掃描，結(jié)果在510 nm處有最大吸收。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確吸取0.20 mg/mL蘆丁對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，按照 2.1.2 實驗方法在 510 nm 處測定其吸光度值。以吸收度為縱坐標(biāo)，對照品溶液的濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，得線性回歸方程：Y=11.357X－0.002 9，r2=0.999 4。

2.1.4 黃酮的提取

壺瓶棗經(jīng)去核，干燥，粉碎，過篩（60目）后得壺瓶棗粉。準(zhǔn)確稱取壺瓶棗粉50 g，加入250 mL石油醚于70℃回流脫脂兩次，每次3 h，真空干燥。稱取脫脂后棗粉20.00g，按料液比1∶20加入70%乙醇浸泡30min，超聲功率105 W，提取溫度70℃下超聲提取0.5 h，過濾后得濾液和濾渣。濾渣再按上述方法提取2次，濃縮，定容至100 mL容量瓶，作為試樣液。

2.1.5 黃酮含量測定

取試樣液2.5 mL于10 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋到刻度，分別移取1 mL稀釋后試液于5個比色管中，按照2.1.2所述方法在510 nm處測定其吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得壺瓶棗黃酮含量為0.264%。

2.2 自由基的生成及清除率的測定

2.2.1 羥自由基的生成及清除率的測定

按文獻(xiàn)[6]方法測定。

2.2.2 超氧陰離子自由基的生成及清除率的測定

按文獻(xiàn)[7]方法測定。

2.2.3 DPPH·自由基的生成及清除率的測定

按文獻(xiàn)[8]方法測定。

3 結(jié)果與討論

3.1 壺瓶棗黃酮對羥自由基的清除作用

壺瓶棗黃酮對羥自由基的清除效果見圖1。

由圖1可知，隨著壺瓶棗黃酮濃度的增加，其對·OH自由基的清除率從19.85%逐漸增加到94.91%，說明壺瓶棗黃酮具有很強的·OH清除能力，并且量效關(guān)系明顯。壺瓶棗黃酮試液和VC的IC50值分別為0.0072mg/mL和0.051mg/mL，當(dāng)樣品濃度為0.04mg/mL時，羥基自由基的清除率達(dá)到了88.98%。遠(yuǎn)高于同濃度VC的38.63%。

圖1 壺瓶棗黃酮對羥自由基的清除作用Fig.1 The hydroxyl radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

3.2 壺瓶棗黃酮對超氧陰離子自由基的清除作用

壺瓶棗黃酮對超氧陰離子自由基的清除效果見圖2（反應(yīng)4 min時）。

圖2 壺瓶棗黃酮對超氧陰離子自由基的清除作用Fig.2 The O2-·free radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

由圖2可知，壺瓶棗黃酮對O2－·有較強的清除能力，當(dāng)樣品濃度為0.02 mg/mL時，羥基自由基的清除率達(dá)到了84.94%。在較低濃度0.002 5 mg/mL～0.03 mg/mL范圍內(nèi)，壺瓶棗黃酮對O2－·的清除率從20.05%增加到96.44%。壺瓶棗黃酮試液和VC的IC50分別為0.009 1 mg/mL和0.006 4 mg/mL，壺瓶棗黃酮試液清除能力略小于VC。

3.3 壺瓶棗黃酮對DPPH·自由基的清除作用

壺瓶棗黃酮對DPPH·自由基的清除效果見圖3。

由圖3可知，壺瓶棗黃酮對DPPH·具有很明顯的清除作用，清除率隨著濃度的增加而增大。清除能力與同濃度下的VC相當(dāng)。壺瓶棗黃酮試液和VC的IC50分別為0.001 6 mg/mL和0.001 4 mg/mL。

4 結(jié)論

圖3 壺瓶棗黃酮對DPPH·自由基的清除作用Fig.3 The DPPH·free radical scavenging capacity of flavonoids from Zizyphus jujuba cv.Huping

研究表明，壺瓶棗黃酮對·OH、O2－·和 DPPH·均具有明顯的清除作用，而且對3種自由基的清除率與黃酮提取液的濃度存在明顯的量效關(guān)系。壺瓶棗黃酮提取液對·OH、O2－·和 DPPH·3 種自由基 IC50值分別為0.007 2、0.009 1、0.001 6 mg/mL。對 3 種自由基清除能力總體強弱趨勢是 DPPH·＞·OH＞O2－·。

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