長白山區(qū)野生毛茛總黃酮的含量測定

秦汝蘭，吳昌軍

（1.通化師范學(xué)院制藥與食品科學(xué)學(xué)院，吉林通化 134002;2.通化師范學(xué)院長白山藥用植物研究實驗室，吉林通化 134002）

毛茛（Ranunculus japonicus Thunb.）是多年生草本毛茛科（Ranunculaceae）毛茛屬（Ranunculus）植物，在長白山地區(qū)廣泛分布，全草入藥，味辛，性溫，具有利濕、消腫、止痛之功效，中醫(yī)臨床用于主治瘧疾、黃疸、偏頭痛、胃痛等疾?。?］.毛茛中含有內(nèi)酯類化合物、黃酮類化合物、皂苷類、生物堿等多種化學(xué)成分［2］.近年來，對毛茛的研究主要集中在皂苷類物質(zhì)分析.但是，對于毛茛中總黃酮的含量測定未見報道.因此，本文以蘆丁為對照品，采用分光光度法測定了長白山區(qū)野生毛茛的總黃酮含量，以期為更好的開發(fā)利用長白山區(qū)藥用植物毛茛提供一定的參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗材料、儀器與試劑

長白山區(qū)野生毛茛于2011年8月采自通化師范學(xué)院后，經(jīng)通化師范學(xué)院于俊林教授鑒定為毛茛科植物毛茛的干燥全草;TU－1901型雙波束紫外－可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;Sartorius－CP225D電子分析天平，北京賽多利斯儀器有限公司;KQ－200KDB超聲波清洗器，昆山市超聲波儀器有限公司;蘆丁對照品（含量測定用），購自中國藥品生物制品檢定所，批號:100080－200506;NaNO2，NaOH，Al（NO3）3，乙醇等試劑均為分析純.

1.2 試驗方法

（1）對照品溶液的制備［3］.精密稱取105℃干燥至恒重的蘆丁對照品5.8mg，置50mL容量瓶中，用75%乙醇溶解、搖勻、定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為0.116 mg/ml的對照品溶液，備用.

（2）供試品溶液的制備.取毛茛粉末約5g，精密稱定，置于索氏提取器中，加石油醚100ml回流提取2h，放冷，棄去石油醚液，將藥渣中石油醚揮干，藥渣加75%乙醇40ml超聲提取2次，每次30min，合并濾液，濃縮，定容于25ml的容量瓶中備用.

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制.精密量取蘆丁對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于 10ml刻度試管中制成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.分別加5%亞硝酸鈉0.4ml搖勻，靜置 6min，再加 5%硝酸鋁 0.4ml搖勻，靜置6min，最后加入5%氫氧化鈉試液4.0ml，用75%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min后以相應(yīng)的試劑為空白，將上述溶液在510nm波長處測定吸光度值.

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得到回歸方程Y=0.0108X+0.0194，r=0.9996.結(jié)果表明蘆丁在 11.60 ～58.00ug/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系.

2.2 精密度試驗

精密量取對照品溶液1ml，置10ml刻度試管中，按（3）項下方法操作，測定吸光度，結(jié)果 RSD為1.11%（n=5），表明該方法精密度良好.

2.3 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液1ml，按（3）項下方法操作，每隔10分鐘測定其吸光度值，結(jié)果吸光度在30min內(nèi)無明顯差異，RSD為1.26%（n=5），表明顯色后的供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.4 重復(fù)性試驗

稱取毛茛粉末約1g，5份，精密稱定，按照（2）項下方法制備供試品溶液，精密量取1.0 ml置于10ml刻度試管中，按照（3）項下方法操作，測定吸光度，結(jié)果RSD為1.08%（n=5），表明本方法重現(xiàn)性良好.

2.5 加樣回收率試驗

取已知含量的毛茛粉末約0.5g，加入蘆丁對照品約4mg，按（2）項下方法制備供試品溶液，5份，按（3）項下方法操作，測定吸收度值，結(jié)果表明加樣回收試驗良好（見表1）.

表1 加樣回收率試驗（n=5）

2.6 樣品含量測定

?。?）項下供試品溶液1ml，按（3）項下方法操作，平行3次，測出吸光度值，代入回歸方程，計算得到毛茛總黃酮含量為1.81%.

3 討論

本實驗曾對提取方法進(jìn)行了篩選，實驗結(jié)果表明，采用連續(xù)回流和超聲提取相結(jié)合的方法，效果最佳，既能去除一部分脂溶性色素的干擾，同時又能使毛茛中總黃酮提取的充分完全，其含量為1.81%.

近年來大量資料研究表明，黃酮類化合物具有降血脂、抗血栓、抗氧化等多種藥理作用，廣泛用于醫(yī)藥、食品等行業(yè).本實驗首次對長白山區(qū)野生毛茛中的總黃酮進(jìn)行了含量測定，為該藥材的進(jìn)一步開發(fā)利用奠定了堅實基礎(chǔ)，而且該方法簡單、易于操作、實驗結(jié)果可靠.

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［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.最新中藥大辭典［M］.第1冊.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2005.

［2］鄭威，周長新，張水利，等.毛茛化學(xué)成分的研究［J］.中國中藥雜志，2006，31（11）:892 －894.

［3］趙亮，劉恩荔，李青山，等.紫外分光光度法測定海紅果中總黃酮的含量［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，37（2）:169－171.