被動凝集定量檢測法在早期肺炎支原體感染診斷中的應(yīng)用

劉學(xué)政，董虹，雷選斌

（荊州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北荊州434000）

被動凝集定量檢測法在早期肺炎支原體感染診斷中的應(yīng)用

劉學(xué)政，董虹，雷選斌

（荊州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北荊州434000）

目的探討被動凝集法在早期肺炎支原體感染診斷中的應(yīng)用。方法采用被動凝集法及ELISA法檢測門診及住院696例疑似肺炎支原體感染患者血清中肺炎支原體抗體并進(jìn)行對比分析。結(jié)果696例疑似肺炎支原體感染患者血清中（1:40）陰性501例，（1:80）陽性141例，（1:160）陽性39例，（≥1:320）陽性15例；陽性共195例，總陽性率為28.0%（195/696）。結(jié)論被動凝集法試驗(yàn)結(jié)果為(1:160)～（≥1:320）高效價滴度時，可為早期肺炎支原體感染的臨床診斷提供有價值依據(jù)。

被動凝集法；早期感染；抗肺炎支原體抗體；IgM

肺炎支原體(Mycoplasma pneumonia，MP)是一種介于病毒和細(xì)菌之間，能自行繁殖的最小原核生物，它無細(xì)胞壁、不易染色，是引起小兒呼吸道疾病的常見病原體之一，亦可導(dǎo)致心、腦、腎、肝、胃腸道、血液等肺外各種器官損害，因此準(zhǔn)確檢測MP抗體是診斷和成功治療支原體肺炎的關(guān)鍵。本研究采用被動凝集法及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法同時檢測MP抗體并進(jìn)行對比分析，探討被動凝集法在早期肺炎支原體感染診斷中的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集本院2011年1～4月門診及住院696例有明顯呼吸道癥狀及X線胸片示肺部呈不同程度炎癥表現(xiàn)的疑似肺炎支原體感染患者血清。

1.2 試劑本試驗(yàn)采用(日本)富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)的賽樂迪亞-麥克Ⅱ試劑盒(被動凝集法)及歐蒙(德國)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司生產(chǎn)的(ELISA法)抗肺炎支原體抗體試劑盒。

1.3 檢測方法被動凝集定量檢測法：該方法為檢測MP總抗體(IgG+IgM+IgA)。具體操作：向反應(yīng)板(12×8)第1孔加入100μl，第2～12孔各加入25μl血清稀釋液，第1孔加入25μl待檢血清，后從第1～12孔進(jìn)行對倍稀釋，第2孔加入25μl未致敏因子，第3～12孔各加入25μl致敏因子，第3～12孔最終稀釋倍數(shù)(1:40)、(1:80)…(1:20 480)，充分混勻后反應(yīng)板加蓋，室溫(15℃～30℃)放置3 h，觀察讀取凝集反應(yīng)圖像。ELISA法嚴(yán)格按照試劑說明書操作，見表1。

1.4 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

表1 被動凝集法檢測肺炎支原體結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 被動凝集法陰性：1:40；陽性：≥1:80。

1.4.2 ELISA法以標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值作為未感染人群參考范圍的上限(臨界值)。檢測結(jié)果低于臨界值的樣本為陰性，高于臨界值的樣本為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件和t檢驗(yàn)對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 被動凝集法檢測結(jié)果696例疑似肺炎支原體感染患者血清中(1:40)陰性501例，(1:80)陽性141例，(1:160)陽性39例，(≥1:320)陽性15例；陽性共195例，總陽性率為28.0%(195/696)。

2.2 ELISA法檢測結(jié)果696例疑似肺炎支原體感染患者血清中MP-IgM陰性共636例，陽性共60例，總陽性率為8.6%(60/696)。

2.3 被動凝集法和ELISA法檢測結(jié)果比較被動凝集法501例(1:40)樣本中ELISA法IgM陰性499例，陽性2例；141例(1:80)樣本中IgM陰性130例、陽性11例；39例(1:160)樣本中IgM陰性6例，陽性33例(84.6%)；15例(≥1:320)樣本中IgM陰性1例，陽性14例(93.3%)。被動凝集法試驗(yàn)結(jié)果為(1:160)～(≥1: 320)時，與ELISA檢測MP-IgM陽性總符合率為89.0%，兩者呈顯著相關(guān)(P＜0.01，表2)。

表2 被動凝集法和ELISA法檢測結(jié)果比較（例）

2.4 藥物治療696份樣本中60例ELISA法MP-IgM陽性患者經(jīng)臨床以青霉素、頭孢類抗生素治療無效而改用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素時療效顯著。

3 討論

支原體肺炎又稱原發(fā)性非典型肺炎，主要靠呼吸道飛沫傳播，全年均可發(fā)病，以秋冬季為高峰，是學(xué)齡兒童及青年常見的一種肺炎[1]。近年來肺炎支原體感染患病率呈日益上升且有局部流行的趨勢，臨床表現(xiàn)早期僅有咳嗽或伴不規(guī)則發(fā)熱等呼吸道感染癥狀，隨著咳嗽加重，可出現(xiàn)肺部和肺外癥狀[2]，據(jù)統(tǒng)計，支原體肺炎占小兒肺炎的比率在不斷上升，由2006年的10.5%～22.4%升至31.8%[3]，在我國社區(qū)獲得性肺炎(CAP)中占據(jù)著重要地位。由于MP無細(xì)胞壁，單一青霉素或頭孢類抗生素治療無效，并對一般治療肺炎、上呼吸道感染的藥物有耐藥性，臨床首選治療藥物為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(阿奇霉素、紅霉素、羅紅霉素等)[4-5]，所以一定要及時進(jìn)行相關(guān)MP抗體檢測，盡快明確診斷，選擇相應(yīng)的抗生素[6-7]。

目前臨床上常用MP-IgM抗體檢測作為MP感染的早期診斷指標(biāo)，現(xiàn)大部分臨床實(shí)驗(yàn)室采用被動凝集法或ELISA法檢測MP抗體[8]。ELISA法作為一種比較成熟的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，但操作相對復(fù)雜，且需特殊儀器設(shè)備。被動凝集法作為輔助診斷MP感染的試驗(yàn)，操作簡單快捷、結(jié)果判定直觀且無需特殊儀器設(shè)備，但由于該方法為檢測MP總抗體，陽性結(jié)果時無法判斷MP感染者血清中升高的抗體具體類型，無法確定患者屬早期感染和(或)既往感染從而影響臨床對其進(jìn)行及時有效的治療。本研究通過兩種方法同時檢測696例疑似肺炎支原體感染患者血清中MP抗體，結(jié)果顯示被動凝集法共檢測出陽性195例，總陽性率為28.0%；ELISA共檢測出MP-IgM陽性60例，總陽性率為8.6%。其中被動凝集法檢測501例陰性樣本中ELISA法檢測MP-IgM陽性為2例，可能是由于一些患者體者抗體含量極低，導(dǎo)致被動凝集法未能檢出[9]。被動凝集法檢測141例(1:80)陽性樣本中ELISA法檢測MP-IgM陽性為11例，提示大多數(shù)患者樣本中升高的MP抗體類型可能為IgG和(或)IgA，疑為既往感染。而被動凝集法檢測39例(1:160)和15例(≥1:320)樣本中ELISA法檢測MP-IgM陽性分別為33例和14例，陽性符合率分別為84.6%和93.3%，顯示被動凝集法試驗(yàn)結(jié)果滴度越高，ELISA法MP-IgM陽性檢出率越高，且兩種檢測方法總符合率達(dá)89.0%，結(jié)果極具相關(guān)性(P＜0.01)，提示此兩類樣本中升高的MP抗體類型主要為IgM，且經(jīng)臨床大環(huán)類酯類抗生素治療，療效顯著[10]，基本上可診斷為肺炎支原體感染早期。故被動凝集法雖檢測MP總抗體，但當(dāng)結(jié)果為高效價滴度(1:160)～(≥1:320)時可為臨床對肺炎支原體感染的早期診斷提供有力依據(jù)，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，以避免肺炎支原體感染的大流行和嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)生。

綜上所述，應(yīng)用被動凝集法檢測MP抗體呈高效價滴度時對疑似肺炎支原體感染患者的早期診斷和臨床治療策略具有重要意義。

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1003—6350（2012）02—097—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.02.042

2011-08-20)

劉學(xué)政（1973—），男，湖北省荊州市人，主管檢驗(yàn)技師。