雙水相法提取血橙渣中黃酮類化合物的研究

卓 莉，阮尚全，鄧紅英

（1.內(nèi)江師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，四川 內(nèi)江 641112；2.四川省高等學(xué)校 果類廢棄物資源化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 內(nèi)江 641112）

雙水相法提取血橙渣中黃酮類化合物的研究

卓 莉1,2，阮尚全1,2，鄧紅英1

（1.內(nèi)江師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，四川 內(nèi)江 641112；2.四川省高等學(xué)校 果類廢棄物資源化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 內(nèi)江 641112）

探討雙水相法提取血橙渣中黃酮類化合物的最佳工藝條件.采用單因素實(shí)驗(yàn)研究了乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間、料液比對(duì)提取率的影響.結(jié)果表明：乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%，溫度為50℃，時(shí)間30m i n，料液比1:25時(shí)提取效果最好，提取率可達(dá)到0.40%.精密度實(shí)驗(yàn)R S D=4.0%.雙水相提取血橙渣中黃酮類化合物方法簡(jiǎn)單，為血橙的深加工提供了一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù).

雙水相法；提??；血橙；黃酮類化合物

血橙（C i t r u s s i n e n s i s）是一個(gè)混種的植物，新鮮的血橙是紅色或橙色[1]，營(yíng)養(yǎng)豐富，含有豐富的維生素E，p胡蘿卜素，花青素苷和黃酮類化合物等多酚類物質(zhì).

黃酮類化合物（f l a v o n o i d s）是經(jīng)植物光合作用產(chǎn)生的一大類化合物[2-3]，主要是指以2-苯基色原酮為基核的化合物，主要有黃酮、黃酮醇、二氫黃酮醇等，以及它們的衍生物[4].黃酮具有廣泛的生理活性,因此黃酮類化合物被廣泛關(guān)注.傳統(tǒng)的類黃酮化合物提取方法有溶劑浸提法，水提取法等[5].雙水相體系萃取技術(shù)是一種高效而溫和的分離新技術(shù).

榨汁或食用后的柑桔類廢棄物大概占柑橘總重的30%，如若丟棄處理，既污染了環(huán)境，又浪費(fèi)了資源.目前用雙水相體系提取血橙渣中黃酮類化合物的研究未見報(bào)道.為了更好的開發(fā)利用內(nèi)江血橙，本實(shí)驗(yàn)采用水雙相法提取血橙渣中的總黃酮.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

儀器：A E 240電子分析天平（中國(guó)梅特勒一托利多儀器公司），T-6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì)（北京譜析通用儀器責(zé)任有限公司）.

試劑：無(wú)水乙醇，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉（所用試劑均為分析純），蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液（稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.0200 g，用30%乙醇定容至100 m L容量瓶）.

1.2 材料

血橙(購(gòu)于內(nèi)江資中)；樣品的制備：將血橙渣在50℃烘干后研磨成粉末.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 吸光度的測(cè)定

將一定量待測(cè)液加入25 m L比色管中，加5%亞硝酸鈉溶液1.00 m L，加10%硝酸鋁溶液1.00 m L，6 m i n后加氫氧化鈉試液6.00 m L，搖勻靜置6 m i n，再加30%乙醇定容，放置15 m i n后在510 n m波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算黃酮類化合物的提取率.

1.3.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響

稱取2.0000 g血橙渣粉5份，分別加入體積分?jǐn)?shù)為30%、40%、50%、60%、70%的乙醇溶液40 m L，在硫酸銨為21 g，溫度60℃的條件下回流提取30 m i n后抽濾，濾液用30%乙醇定容至100 m L.分別移取4.00 m L提取液于25 m L比色管中，按實(shí)驗(yàn)方法1.3.1測(cè)定吸光度.

1.3.3 提取溫度的影響

稱取2.0000 g血橙渣粉5份，分別加入體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇溶液40 m L，在硫酸銨用量為21 g，分別在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃，回流提取30 m i n后抽濾，濾液用30%乙醇定容至100 m L.分別精密移取2.00 m L提取液于25 m L比色管中，按實(shí)驗(yàn)方法1.3.1測(cè)定吸光度.

1.3.4 提取時(shí)間的影響

稱取2.0000 g血橙渣粉5份，分別加入體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇溶液40 m L，硫酸銨21 g，在溫度50℃，分別回流提取10 m i n、20 m i n、30 m i n、40 m i n、50 m i n后抽濾，將濾液用30%乙醇定容至100 m L.分別移取4.00 m L提取液于25 m L比色管中，按實(shí)驗(yàn)方法1.3.1測(cè)定吸光度.

1.3.5 料液比的影響

稱取2.0000 g血橙渣粉5份，分別加入體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇溶液20 m L、30 m L、40 m L、50 m L、60 m L，在溫度50℃，加入21 g硫酸銨下回流提取30 m i n后抽濾，將濾液用30%乙醇溶液定容至100 m L.分別移取4.00 m L提取液于25 m L比色管中，按實(shí)驗(yàn)方法1.3.1測(cè)定吸光度.

1.3.6 提取率的計(jì)算

根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的回歸方程得出提取液中黃酮類化合物的濃度，通過下式計(jì)算得出血橙渣中黃酮類化合物的提取率：

黃酮類化合物提取率=（提取出的黃酮類化合物的質(zhì)量／樣品質(zhì)量）×100%

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 m L分別置于25 m L比色管中，按實(shí)驗(yàn)方法1.3.1測(cè)定吸光度.以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C/μg?m l-1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=0.0146 C-0.0053，相關(guān)系數(shù)r=0.9996.結(jié)果表明蘆丁溶液濃度8.00-48.00 μg/m L之間與吸光度值呈良好的線性關(guān)系.

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響

按實(shí)驗(yàn)方法1.3.2考察乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)血橙渣中黃酮類化合物提取率的影響，結(jié)果見表1.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，當(dāng)乙醇的體積分?jǐn)?shù)低于60%時(shí)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，提取率顯著增加，當(dāng)乙醇的體積分?jǐn)?shù)增加到50%-60%時(shí)，提取率比較平緩，乙醇體積分?jǐn)?shù)增加到60%時(shí)，黃酮類化合物的提取率達(dá)到最高，而超過60%以后，黃酮得率反而降低，可確定當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)提取效果最好.

表1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)提取率的影響

2.2.2 提取溫度的影響

按實(shí)驗(yàn)方法1.3.3考察提取溫度對(duì)血橙渣中黃酮類化合物提取率的影響，結(jié)果見表2.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明：提取率隨溫度的增加先升高后下降，在50℃時(shí)提取率最高.

表2 溫度對(duì)血橙渣中總黃酮提取率的影響

2.2.3 提取時(shí)間的影響

按照實(shí)驗(yàn)方法1.3.4考察提取時(shí)間對(duì)血橙渣中黃酮類化合物提取率的影響，結(jié)果見圖4.結(jié)果表明：最佳提取時(shí)間為30 m i n，這可能是因?yàn)樘崛r(shí)間過短，黃酮類化合物沒有被完全提取，時(shí)間過長(zhǎng)黃酮類化合物因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間受熱，發(fā)生分解或被氧化[16].

表3 提取時(shí)間對(duì)血橙渣中總黃酮提取率的影響

按照實(shí)驗(yàn)方法1.3.5考察料液比對(duì)血橙渣中總黃酮提取率的影響，結(jié)果見表4.隨著料液比增加時(shí)，提取劑體積大，提取率反而降低，而料液比太小，提取不完全.本實(shí)驗(yàn)在料液比為1∶25時(shí)提取率最高.

表4 料液比對(duì)提取率的影響

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)2.2的結(jié)果，分別稱取2.0000 g血橙渣粉末5份，加入60%乙醇溶液50 m L，加21 g硫酸銨，在50℃下回流提取30 m i n，抽濾后，濾液用30%乙醇定容，移取4.00 m L提取液至25 m L的比色管中，并按實(shí)驗(yàn)方法1.3.1測(cè)定其吸光度后計(jì)算黃酮類化合物的提取率.根據(jù)提取率計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差.結(jié)果如表5所示：

表5 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表5可知，雙水相法提取血橙渣中黃酮類化合物的提取率為0.40%，S D為0.02，R S D為4.0%，說明該實(shí)驗(yàn)方法精密度高.

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)研究雙水相體系提取血橙渣中的黃酮類化合物，對(duì)影響提取率的因素：乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間、料液比用單因素實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了分析，確定最優(yōu)提取條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、提取溫度50℃、提取時(shí)間30 m i n、料液比1:25，提取率可達(dá)到0.40%.該方法的研究對(duì)于血橙的綜合利用具有一定意義.

〔1〕陳日橋.開發(fā)血橙市場(chǎng)前景廣闊[J].農(nóng)技服務(wù)，2002（08）：1-2.

〔2〕陳業(yè)高.植物化學(xué)成分[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004.223-240.

〔3〕張睿，雅琴，時(shí)陽(yáng).黃酮類化合物提取工藝研究[J].食品與機(jī)械，2003（1)：21.

〔4〕葉文峰.天然黃酮類化合物及其在食品中的應(yīng)用.宜春師專學(xué)報(bào)[J].2000，22（5)：42-46.

〔5〕歐陽(yáng)平，張高勇，康保安.總黃酮的新興提取技術(shù)原理、應(yīng)用及前景[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003（6）：563-566.

〔6〕王順明，季長(zhǎng)路，任晶晶.超聲波協(xié)同雙水相體系提取芫荽總黃酮的研究 [J].安徽工程科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，24（3）：29-30.

O 622.4；O 652.62

A

1673-260 X（2012）09-0017-02

四川省教育廳青年基金項(xiàng)目（11ZB022），內(nèi)江師范學(xué)院自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（12NJZ02）