冰凍紅細胞的特點、制備、保存及臨床應(yīng)用

王 惟

吉林省血液中心，吉林長春 130031

隨著成分輸血的開展，紅細胞的合理利用逐漸受到重視，國外以紅細胞利用率80%作為評價一個國家的醫(yī)療技術(shù)水平。20世紀(jì)60年代末70年代初，建立了冰凍紅細胞技術(shù)。在低溫冷凍的條件下，由于紅細胞的代謝活動幾乎停止而處于休眠狀態(tài)，使紅細胞能夠長期保存。冷凍速度較慢時，細胞外的水會結(jié)冰，加入甘油防凍劑后，細胞內(nèi)脫水和細胞容積減少。由于甘油滲透壓較高，進入體內(nèi)容易造成細胞溶血，因此紅細胞復(fù)蘇后，需要洗滌去甘油，此時細胞處于高滲狀態(tài)，必須用梯度洗滌的方法去除甘油和游離血紅蛋白[1]。經(jīng)過不斷改進，我國70年代在制備冰凍紅細胞工藝上已日益完善，開創(chuàng)了保存血液的另一種重要途徑。冰凍紅細胞最大的特點是可長達10年的保存期，解決了血液長期貯存、保障供血和對稀有血型輸血（Rh(D)陰性）以及自身輸血創(chuàng)造了條件，爭取了搶救時間，挽救了寶貴的生命，冷凍血是其它制劑所不能替代的制品[2]。為更好的提高冰凍紅細胞血液質(zhì)量，筆者在紅細胞制備、保存以及解凍洗滌過程中，積累了一些經(jīng)驗，對不同方法制備出的冰凍紅細胞甘油殘留量、游離血紅蛋白含量等指標(biāo)進行分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與耗材

57%甘油、9%氯化鈉溶液、三珠冷凍袋、無菌四聯(lián)袋、羥乙基淀粉溶液、0.9%生理鹽水。

1.2 制備方法

甘油化方法：將紅細胞或全血離心去上清，將紅細胞移至三珠袋中加甘油，動作需輕柔。200mL紅細胞加甘油160mL，控制速度先慢后快，25min左右加完。在室溫靜止30min送-80℃速凍保存。洗脫甘油：用濃度梯度法洗滌，分別用9%NaCl溶液與羥乙基淀粉溶液洗滌，再用0.9%NaCl溶液反復(fù)洗滌，成品為懸浮紅細胞供臨床應(yīng)用。在制備過程中加甘油后不同放置時間和洗脫時不同離心力對產(chǎn)品質(zhì)量有較大影響，按照這兩項條件不同將制備的產(chǎn)品分A組和B組。

1.3 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

上清血紅蛋白不超過1g/L；殘余甘油含量在10g/L；紅細胞回收率＞80%；體外溶血實驗≤50%[3]。

1.4 統(tǒng)法方法

2 結(jié)果

2.1 甘油化時紅細胞加甘油后不同放置時間，A組15min，B組30min，檢測甘油殘留量，見表1。

表1 不同放置時間的甘油殘留量（±s）

表1 不同放置時間的甘油殘留量（±s）

注： *兩組相比，P<0.05。

組別例數(shù) 甘油殘留量（g/L）A組B組88 7.85±0.65 4.49±0.92

2.2 在洗脫甘油過程中，適當(dāng)?shù)碾x心力既能很好地去除甘油，又能減少重離心對紅細胞的破壞，筆者采用不同離心力制備冰凍紅細胞后檢測冰凍紅細胞各項參數(shù)，做如下比較，A組2600轉(zhuǎn)/min,B組3300轉(zhuǎn)/min,見表 2。

表2 洗脫甘油過程中兩種離心力的對比（±s）

表2 洗脫甘油過程中兩種離心力的對比（±s）

組別上清游離蛋白（g/L）甘油殘留量（g/L）紅細胞回收率（%）溶血率（%）A組B組88例數(shù)P 0.39±0.15 0.79±0.006<0.05 4.56±1.73 8.4±0.75<0.05 4.1±2.41 79.1±2.32<0.05 34.3±0.93 44.7±3.82<0.05

3 討論

紅細胞甘油化前，保養(yǎng)液為ACD的血液制劑應(yīng)2d冰凍，保養(yǎng)液為CPDA-1的血液制劑在6d內(nèi)冰凍，這是保持冰凍紅細胞活性的基礎(chǔ)。目前，冰凍紅細胞所使用的防凍劑為滲透性甘油，由于甘油滲透壓較高，在加入甘油時一定要先控制速度，先20滴/min，3min后 40滴/min，5min后 60～70滴/min，25min左右加完即可。由慢到快，逐漸提高滴速，并使血液制劑的血袋始終保持震蕩狀態(tài)，血袋內(nèi)有玻璃珠，起攪拌作用。讓甘油緩慢均勻地和紅細胞混合，甘油加完后一定要靜止30min。加甘油前和加完甘油后都要排盡血袋內(nèi)空氣，如果血袋內(nèi)氣泡太多形成大的氣泡的過程中，小氣泡需不斷破裂，這樣對紅細胞是一種損害。解凍去甘油過程：①將冰凍的紅細胞制備成解凍去甘油紅細胞關(guān)鍵的第一步是在-80℃冰箱取出紅細胞后要迅速浸入37～40℃水浴中，水浴箱的水一定要浸沒血袋，不斷搖動，使血袋與水充分接觸，加速其融化，但不能用力擠壓血袋。減少紅細胞在溶化過程中的機械損傷，溶化好的血袋要在室溫靜止10min，讓紅細胞得到充分休息，增強細胞的抗破壞能力。②甘油化的紅細胞的內(nèi)環(huán)境是高滲的，為防止紅細胞遭到人為破壞，一般采用梯度洗滌法，先用高滲鹽水9%NaCl使甘油從紅細胞內(nèi)逐漸釋放出來，逐漸降低滲液的濃度，這一洗滌過程重點是高滲鹽水的速度一定要緩慢些，30滴/min逐漸提高滴速。7min加完即可，而且每次加完洗液后一定要平衡5～10min后再離心。③注意選擇適當(dāng)降離心力，對冰凍紅細胞能達到各種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起到絕對性作用，通過比較我們發(fā)現(xiàn)2600轉(zhuǎn)/min離心的制品各項指標(biāo)較好。④臨床應(yīng)用：經(jīng)過洗滌紅細胞由于去除了絕大部分白細胞、血小板和血漿蛋白，減少了輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。對于血液病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、腎功能異常以及心功能不全的患者，輸用更為有利。冷凍血由于去除了細胞代謝產(chǎn)物、抗凝劑及可能的病原體，即使大量輸注也可避免酸中毒、高鉀血癥以及減少傳染病的傳播，能很好滿足臨床特殊需要并且安全有效[4]。

[1] 邱艷.全血成分血質(zhì)量要求與血液標(biāo)準(zhǔn)化[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002：72-73.

[2] 王培華.輸血技術(shù)學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：70-73.

[3] 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).全血及成分血質(zhì)量要求GB18469-2001.

[4] 安萬新，于衛(wèi)建.輸血技術(shù)學(xué)[M].科學(xué)技術(shù)文獻出版社，2010：167.