小建中湯不同提取物對(duì)脾虛小鼠的影響

趙 稷

(佳木斯大學(xué)藥學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

小建中湯來(lái)源于張仲景所著《傷寒論》一書(shū),是溫中補(bǔ)虛、緩急止痛之方劑。全方由白芍 (炒 )、大棗、桂枝、甘草 (蜜炙)、生姜以及飴糖組成。用于治療中焦虛寒,氣血不足之證而兼?zhèn)碜C,以及治脾虛腹痛者。本方既有雙補(bǔ)陰陽(yáng)、調(diào)節(jié)脾胃的作用,又有調(diào)和營(yíng)衛(wèi)兼以解表功能。由于小建中湯療效確切,故應(yīng)用極為廣泛,臨床主要用于治療脾胃虛寒所致的脘腹攣痛、喜溫喜按或虛勞發(fā)熱等癥?，F(xiàn)代小建中湯的臨床應(yīng)用愈加廣泛,用小建中湯本身及根據(jù)不同病癥加味其它中藥不僅能夠治療消化道系統(tǒng)疾病[1～3],而且根據(jù)異病同治理論,對(duì)治療婦科疾病、男性不育、兒科病等多種病癥均有確切的療效[4]。本文欲揭示小建中湯治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ),分別提取其中不同的成分針對(duì)脾虛癥狀小鼠進(jìn)行初步分析。

1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小鼠由佳木斯大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供,試劑:乙醇為分析純,藥材:白芍(炒 )、桂枝、甘草 (蜜炙 )世一堂中藥飲片廠生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 小建中湯水提液及乙醇提取液制備

將各藥材粉碎成粗粉,按白芍(炒):桂枝:生姜:大棗:甘草 (蜜炙 )為 2：1：1：1：0.6的比例 ,精密稱定 50g藥材粗粉 ,加10倍量蒸餾水提取2h,過(guò)濾,濾渣再加 8倍量水提取一次,合并濾液,濃縮,加蜂蜜18g,混合均勻,得小建中湯水提取液,備用。取50g藥材粗粉,加10倍量70%乙醇回流提取2h,過(guò)濾,再加8倍量70%乙醇回流提取1次 ,合并濾液,減壓回收乙醇,得浸膏,加18g蜂蜜混勻,得小建中湯乙醇提取液,備用。取50g藥材粗粉加10倍量水,用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油5h,備用。

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、造模及給藥

小鼠 112只,雌 雄各半 ,體 重 22～26g,隨機(jī)分為 7組,分別為:正常對(duì)照組16只、模型組16只、小建中湯水提取液高劑量組16只、中劑量組 16只、醇提取液高劑量組16只、中劑量組16只,揮發(fā)油高劑量組 16只。除正常對(duì)照組外,其它各組均造飲食失節(jié)型脾虛模型(灌胃100%精煉豬脂0.4mL/10g,每日1次,連續(xù)9d),觀察精神狀態(tài)、運(yùn)動(dòng)狀況、皮毛色澤、飲食、排便和體重等方面的變化。

造脾虛模型成功后,正常對(duì)照組、模型組給予等體積的蒸餾水,其余各組分別給予對(duì)應(yīng)的藥物,每日灌胃1次,連續(xù)7d。其間密切觀察小鼠的外觀體征,并每日稱量體重。

2.3 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛小鼠胃排空、小腸推進(jìn)、脾及胸腺指數(shù)的影響[5,6]

每組各取小鼠8只,末次給藥后禁食24h,每只小鼠灌胃0.2mL 0.1%甲基橙水溶液,于 20min后處死,摘取胃,剪開(kāi),充分洗于10mL蒸餾水中,用5%的 NaHCO3溶液調(diào) pH至6～6.5,以 3000r/min離心 30min,取上清液 ,于 420nm處測(cè)定吸光度,計(jì)算小鼠胃中甲基橙殘留率。胃殘留率(%)=胃甲基橙光密度 /基數(shù)甲基橙光密度×100%。

每組取小鼠8只 ,于次日末次給藥(所有藥物均含50%碳素墨汁)后30min,脫頸椎處死,解剖 ,測(cè)量幽門(mén)至色素最前端的距離及幽門(mén)至回盲部的距離,按下式計(jì)算小腸推進(jìn)率:小腸推進(jìn)率=色素推進(jìn)長(zhǎng)度 /小腸全長(zhǎng)×100%。

脫頸椎處死后,摘取脾臟、胸腺 ,生理鹽水洗滌,晾干 ,稱重,按以下公式計(jì)算臟器指數(shù):臟器指數(shù)=臟器重量(mg)/體重 (g)。

3 結(jié)果

3.1 小建中湯水提液及醇提液提取

按 2.1方法進(jìn)行提取,水提液提取率為 14.15%,醇提液提取率為32.14%,揮發(fā)油提取率為0.30%。

3.2 小鼠一般狀況

除正常對(duì)照組外,其它各組小鼠大多均在第4、5天即開(kāi)始出現(xiàn)糞便松軟膨大、不成形,甚至便溏,毛發(fā)枯槁、疏散、畏寒,成群蜷縮;第6天后出現(xiàn)消瘦,體重減輕,肛周污穢,部分動(dòng)物出現(xiàn)脫肛,四肢無(wú)力,成匍匐狀,動(dòng)作、反應(yīng)遲鈍,有的甚至行動(dòng)歪斜 ,拱背,第7天 ,小鼠體重已經(jīng)明顯下降,且逐天降低,提示造模成功。給予藥物后(除揮發(fā)油組外 ),各給藥組小鼠自第5天起,狀況逐漸恢復(fù) ,表現(xiàn)為脫肛情況明顯改善,活動(dòng)增多,反應(yīng)敏捷,皮毛漸漸恢復(fù)正常光澤,很少出現(xiàn)成群蜷縮;而模型組及揮發(fā)油組癥狀未見(jiàn)明顯改善。

3.3 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛證小鼠體重的影響

各給藥組 (除揮發(fā)油組外)小鼠體重明顯恢復(fù),與模型組比較有顯著差異,小建中湯醇提液高、中劑量組小鼠體重稍較水提取液高、中劑量組明顯,揮發(fā)油組沒(méi)影響,結(jié)果見(jiàn)表1。

3.4 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛小鼠胃排空、腸推進(jìn)率、脾及胸腺指數(shù)的影響

小建中湯水提液高、中劑量組及醇提液高、中劑量組均可明顯降低脾虛證小鼠胃內(nèi)色素殘留率,促進(jìn)胃排空,與模型組相比較 ,差異顯著;水提液較醇提液效果明顯,揮發(fā)油組未見(jiàn)改善。水提液高、中劑量組及醇提液高、中劑量組均可明顯增加小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng),與模型組比較,差異顯著,醇提液高、中劑量組較水提液組效果明顯;揮發(fā)油效果較差。水提液高、中劑量組及醇提液高、中劑量組均可明顯增加脾虛證小鼠胸腺、脾的重量,提高胸腺指數(shù)及脾指數(shù),且湯醇提液高劑量組效果最好,揮發(fā)油組對(duì)胸腺指數(shù)有提高,結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛證小鼠體重的影響(±s)

表1 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛證小鼠體重的影響(±s)

與正常對(duì)照組比較:#P＜0.05,##P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05,**P＜0.01。

組 別體 重造模前(g) 造模后(g) 給藥后(g)正常對(duì)照組 24.67± 6.33 27.25± 0.52 29.26± 0.71**模型對(duì)照 25.37± 1.58 21.13± 0.36## 20.25± 1.08##水提液 (高 ) 25.00± 1.01 22.60± 0.89## 24.78± 0.45**水提液 (中 ) 24.87± 0.88 22.19± 0.64 24.57± 0.76**醇提液 (高 ) 25.80± 1.81 21.84± 0.66## 24.22± 0.11**醇提液 (中 ) 25.03± 1.06 21.63± 0.15## 25.99± 1.01**揮發(fā)油組 24.92± 0.33 21.00± 0.77 20.80± 0.95

表2 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛小鼠的胃排空功能、胸腺及脾指數(shù)的影響(±s)

表2 小建中湯不同提取物對(duì)脾虛小鼠的胃排空功能、胸腺及脾指數(shù)的影響(±s)

與正常對(duì)照組比較:#P＜0.05,##P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05,**P＜0.01。

組 別 甲基橙殘留率% 腸推進(jìn)率% 脾指數(shù)(mg/g) 胸腺指數(shù)(mg/g)空白對(duì)照組 24.18± 4.64 85.34± 12.65 0.1460± 0.0164 0.0133± 0.0030模型對(duì)照組 33.97± 2.15## 52.91± 16.56## 0.1356± 0.0031## 0.0103± 0.0041##水提液 (高 ) 27.69± 1.05* 73.41± 9.731** 0.1488± 0.0240* 0.0122± 0.0023**水提液 (中 ) 26.13± 2.14** 70.16± 8.23** 0.1481± 0.0138** 0.0120± 0.0032*醇提液 (高 ) 31.35± 3.54** 82.43± 2.59** 0.1643± 0.0218** 0.0124± 0.0019**醇提液 (中 ) 30.18± 2.56** 79.57± 8.92** 0.1517± 0.0193* 0.0117± 0.0037*揮發(fā)油組 33.90± 3.19 54.99± 13.71 0.1399± 0.0426 0.0115± 0.0028*

4 討論

小建中湯揮發(fā)油成分單獨(dú)使用對(duì)脾虛小鼠作用不明顯,但目前市面上的小建中組方都是揮發(fā)油成分與水提成分共同應(yīng)用的,不能說(shuō)明揮發(fā)油成分沒(méi)有療效。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,除對(duì)小鼠胃排空方面醇提成分較水提成分稍差意外,其他方面醇提成分都優(yōu)于水提成分,說(shuō)明醇提成分對(duì)治療飲食失節(jié)型脾虛模型小鼠效果更好。

蜂蜜具有滋潤(rùn)滑腸的作用,常作為緩瀉劑,其功能主治為補(bǔ)中、潤(rùn)燥、止痛、解毒。常用于脘腹虛痛、腸燥便秘、治療習(xí)慣性便秘、老年人和孕婦便秘,以及結(jié)腸炎、胃和十二指腸潰瘍、兒童痢疾等疾病。而飴糖有甘溫補(bǔ)中,調(diào)養(yǎng)脾胃,緩急止痛作用。又根據(jù)《藥征》認(rèn)為蜂蜜在功能主治方面與飴糖相似,都能夠緩解諸多癥狀,由于無(wú)法購(gòu)買到飴糖,所以用蜂蜜代替飴糖。

脾虛證會(huì)出現(xiàn)胃脘痛、腹痛、泄瀉、嘔吐、反胃、痰飲、水腫、便血等癥狀,其中胃脘痛、嘔吐、反胃、便血屬于胃功能異常;腹痛、泄瀉、便血屬于腸功能異常。所以本實(shí)驗(yàn)選擇測(cè)定胃腸功能的指標(biāo)作為脾虛證的指標(biāo),并同時(shí)選擇一般癥狀及糞便、體重變化等指標(biāo)進(jìn)行考察。

脾虛模型建立的方法有:大黃型脾虛造型法、番瀉葉型脾虛造型法、利舍平型脾虛造型法、飲食失節(jié)型脾虛證造型法、四氯化碳致肝郁型脾虛造型法。其中應(yīng)用大黃型脾虛造型法和番瀉葉型脾虛造型法建造模型不單是脾虛也會(huì)造成腎虛;應(yīng)用利舍平型脾虛造型法建造模型出現(xiàn)脾虛的同時(shí)也會(huì)影響神經(jīng)系統(tǒng)的功能;應(yīng)用四氯化碳致肝郁型脾虛造型法建造脾虛模型,不僅僅是脾虛也會(huì)造成肝的損傷,影響造血功能;所以應(yīng)用飲食調(diào)節(jié)建造模型是最佳方案。

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