密毛番荔枝化學(xué)成分的研究

程寶琦，黃文華 ，余競(jìng)光，郭寶林，張 晶

1吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，長(zhǎng)春130118;2 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京100193

番荔枝科(Annonaceae)番荔枝屬(Annona)植物約有120 種，主要分布于美洲熱帶地區(qū)，少數(shù)分布于熱帶非洲，我國(guó)現(xiàn)有的6 種番荔枝屬植物均為從熱帶美洲引入栽培。本屬植物含有番荔枝內(nèi)酯(polyketides)、萜類、環(huán)肽及生物堿等多種成分，它們?cè)诳鼓[瘤、抗瘧、抗菌、免疫抑制、拒食及殺蟲(chóng)等方面具有較強(qiáng)的生物學(xué)活性［1-3］。密毛番荔枝(Annona densicoma Mart. )分布于南美洲亞馬遜熱帶雨林，當(dāng)?shù)厝朔Q之為graviola-brava［4］。前人從密毛番荔枝分離到8 個(gè)polyketides 成分，其莖皮的醇提取物及其所含番荔枝內(nèi)酯類成分體外試驗(yàn)對(duì)P388、A549、HT29 等多種細(xì)胞瘤株有很強(qiáng)的抑制活性［5-7］。為進(jìn)一步尋找其抗腫瘤的活性成分，我們對(duì)采自秘魯?shù)拿苊笾ηo枝進(jìn)行了化學(xué)成分研究，從中分得9 個(gè)化合物，包括黃酮、有機(jī)酸、生物堿、polyketides 類化合物等。其中化合物3 為首次從該屬植物中分離得到，化合物1、2、4、5、8、9 首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker Avance DRX-600 型超導(dǎo)核磁共振儀;Ultima-TOF(Micromass，UK)質(zhì)譜儀;中壓系統(tǒng)(艾杰爾公司);Buchi RE-121 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪公司);Fisher-Johns Melting Point Apparatus 熔點(diǎn)測(cè)定儀(溫度未校正);ZF-I 型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);薄層硅膠GF254、柱色譜硅膠(煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所);Sephadex LH-20(GE Healthcare 產(chǎn)品，北京綠百草科技有限公司分裝);YMCPack ODS-A 半制備液相色譜柱(日本YMC 公司);MCI GEL CHP 20P(日本三菱化工)。

植物材料密毛番荔枝(Annona densicoma Mart. )莖枝于1981 年采自秘魯，由美國(guó)農(nóng)業(yè)部經(jīng)濟(jì)植物實(shí)驗(yàn)室鑒定并保存憑證標(biāo)本［5］。

2 提取與分離

干燥的密毛番荔枝莖枝6.5 kg 粉碎，用95%乙醇滲漉及回流提取，合并提取液，減壓濃縮得浸膏221.06 g，水混懸后，分別用二氯甲烷、正丁醇萃取，回收溶劑得二氯甲烷浸膏70.40 g 和正丁醇浸膏29.75 g。取二氯甲烷浸膏70 g，用84 g(60～100目)硅膠拌樣，經(jīng)200～300 目硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)(v/v，95∶5;9∶1;8∶2;7∶3;6∶4)梯度洗脫，通過(guò)薄層層析檢測(cè)合并相同的部分，得到8 個(gè)組分(Fr.1～Fr.8)。Fr.2 上硅膠柱以氯仿-甲醇(v/v，98∶2)等度洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠(氯仿:甲醇=1∶1)和RP-18 柱分離得到化合物6(6 mg)，7(39 mg)和8(218mg);Fr.4 經(jīng)MCI 和Sephadex LH-20 凝膠反復(fù)柱層析得到化合物1(8 mg)、2(5 mg)、3(49 mg)和4(109 mg);Fr.5 經(jīng)MCI 柱層析和RP-18 柱制備得到化合物5(42 mg)，從Fr.6 部分得到化合物9(442mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色粉末(甲醇)，紫外365 nm 波長(zhǎng)下有藍(lán)綠色熒光，mp.311～312 ℃;ESI-MS (m/z):325［M + Na］+，303 ［M + H］+;1H NMR (DMSOd6，600 MHz)δ:6.18 (1H，d，J = 2.4 Hz，H-6)，6.40 (1H，d，J = 2.4 Hz，H-8)，6.88 (1H，d，J =8.4 Hz，H-5')，7.53 (1H，dd，J = 2.4，8.4 Hz，H-6')，7.67 (1H，d，J = 2.4 Hz，H-2')，12.48，10.79，9.59，9.34，9.29 (5H，s，5 ×OH)。13C NMR (DMSOd6，150 MHz)δ:147.68 (C-2)，135.70 (C-3)，175.82 (C-4)，160.69 (C-5)，98.15 (C-6)，163.86(C-7)，93.33 (C-8)，156.12 (C-9)，102.99 (C-10)，121.93 (C-1')，115.04 (C-2')，145.03 (C-3')，146.79 (C-4')，115.58 (C-5')，119.96 (C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道槲皮素(quercetin)光譜數(shù)據(jù)一致。

化合物2 淡黃色針晶(氯仿-甲醇)，紫外365 nm 波長(zhǎng)下有藍(lán)色熒光，mp.262～263 ℃;ESI-MS(m/z):311 ［M + Na］+，289 ［M + H］+;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:2.68 (1H，dd，J = 15.6，3.6 Hz，H-3a)，3.15 (1H，dd，J = 15.6，14.4 Hz，H-3b)，5.36 (1H，dd，J = 14.4，3.6 Hz，H-2)，5.87(2H，d，J = 2.4 Hz，H-6，8)，6.74 (2H，s，H-5'，6')，6.87 (1H，s，H-2);13C NMR (CD3OD，150 MHz)δ:196.74 (C-4)，167.45 (C-7)，163.95 (C-5)，163.37 (C-9)，146.19 (C-4')，145.67 (C-3')，129.95 (C-1')，118.40 (C-6')，115.82 (C-5')，114.81 (C-2')，102.22 (C-10)，96.26 (C-6)，95.47(C-8)，78.91 (C-2)，42.55 (C-3)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道圣草酚(eriodictyol)光譜數(shù)據(jù)一致。

化合物3 白色針狀結(jié)晶(甲醇)，mp.197 ℃;EI-MS (m/z):154 ［M］+;1H NMR (DMSO-d6，600 MHz)δ:6.78(1H，d，J = 7.8 Hz，H-5)，7.28 (1H，dd，J = 2.4，7.8 Hz，H-6)，7.33 (1H，d，J = 1.8 Hz，H-2);13C NMR(DMSO-d6，150 MHz)δ:115.20(C-5)，116.60 (C-2)，121.71 (C-1)，121.95 (C-6)，144.92 (C-3)，150.04 (C-4)，167.36 (C-7)。與文獻(xiàn)［10］報(bào)道的波譜學(xué)數(shù)據(jù)相一致，故鑒定為原兒茶酸(protocatechuic acid)。

化合物4 白色片狀晶體，mp.208～209 ℃;EIMS (m/z):198［M］+;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:7.20 (2H，s，H-2，6)，3.80 (6H，s，2 × OCH3)，9.19 (1H，s，COOH);13C NMR (CD3OD，150 MHz)δ:120.37 (C-1)，106.87 (C-2)，147.42 (C-3)，140.20 (C-4)，147.42 (C-5)，106.87 (C-6)，167.20 (COOH)，55.97 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道的波譜學(xué)數(shù)據(jù)一致，故鑒定為丁香酸(syringic acid)。

化合物5 白色粉末，mp.261～262 ℃;ESI-MS(m/z):284［M+H］+;1H NMR (CD3OD，600 MHz)δ:2.74 (2H，t，J = 7.2 Hz，H-2')，3.45 (2H，t，J =7.2 Hz，H-1')，6.38 (1H，d，J = 16.2 Hz，H-2)，6.71 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-5')，6.72 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-7')，6.78 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-6)，6.79 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-8)，7.05 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-4')，7.06(1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-8')，7.39 (1H，dd，J =1.8，6.6 Hz，H-5)，7.39 (1H，dd，J = 1.8，6.6 Hz，H-9)，7.44 (1H，d，J = 15.6 Hz，H-3)。13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:169.45 (C-1)，118.66 (C-2)，141.96 (C-3)，127.94 (C-4)，130.92 (C-5，C-9)，116.92 (C-6，C-8)，160.71 (C-7)，42.73 (C-1')，36.01 (C-2')，131.53 (C-3')，130.74 (C-4'，C-8')，116.47 (C-5'，C-7')，157.12 (C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12，13］報(bào)道的化合物的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故確定為N-p-hydroxy-cis-coumaroyltyramine。

化合物6 白色蠟狀物，mp.52～53 ℃;ESI-MS(m/z):597［M + H］+，619 ［M + Na］+，分子式為C35H64O7;1H NMR (CDCl3，600 MHz)δ:0.88 (3H，t，J = 6.6 Hz，H-32)，1.42 (3H，d，J = 6.6Hz，H-35)，1.66 (2H，m，H-17，18)，1.97 (2H，m，H-17，18)，2.40(1H，m，H-3a)，2.51 (1H，brd，J = 15.6 Hz，H-3b)，3.39 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-15)，3.40 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-20)，3.58 (1H，m，H-10)，3.79 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-16)，3.80 (1H，dt，J = 12.0，6.6 Hz，H-19)，3.84 (1H，m，H-4)，5.05 (1H，qd，J = 6.9，1.2Hz，H-34)，7.18 (1H，d，J = 1.2Hz，H-33)。13C NMR (CDCl3，150MHz)δ:174.46 (C-1)，131.35 (C-2)，32.11(C-3)，70.12 (C-4)，37.45 (C-5)，71.97 (C-10)，74.18 (C-15)，82.77 (C-16)，82.86 (C-19)，74.28(C-20)，22.87 (C-31)，14.07 (C-32)，152.05 (C-33)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14，15］報(bào)道相一致，為annonacin。

化合物7 白色蠟狀固體，mp.73～75 ℃;ESIMS (m/z):595［M+H］+，617［M+Na］+，633［M+K］+，分子式為C35H62O7;1H NMR (CDCl3，600 MHz)δ:0.87 (3H，t，J = 6.6 Hz，H-32)，1.42(3H，d，J = 7.2 Hz，H-35)，1.67 (2H，m，H-17，18)，1.98 (2H，m，H-17，18)，2.40(2H，t，J = 7.2 Hz H-11)，2.41(2H，t，J = 7.2 Hz H-9)，2.41(1H，m，H-3a)，2.51 (1H，brd，J = 14.4 Hz，H-3b)，3.40 (1H，m，H-15)，3.40 (1H，m，H-20)，3.77(1H，dd，J = 12.6，6.6 Hz，H-16)，3.79 (1H，dd，J= 12.6，6.6 Hz，H-19)，3.83 (1H，m，H-4)，5.05(1H，qd，J = 6.6，1.2Hz，H-34)，7.18 (1H，d，J =1.2Hz，H-33)。13C NMR (CDCl3，150 MHz)δ:175.19 (C-1)，131.72 (C-2)，32.50 (C-3)，70.41(C-4)，37.70 (C-5)，43.17 (C-9)，211.91 (C-10)，43.27 (C-11)，74.35 (C-15)，83.14 (C-16)，83.28(C-19)，74.65 (C-20)，23.26 (C-31)，14.69 (C-32)，152.46 (C-33)。根據(jù)以上1H NMR 和13C NMR的數(shù)據(jù)確定為已知化合物annonacin-10-one［6，15］。

化合物8 白色結(jié)晶(甲醇)，mp.141 ℃。與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，混合熔點(diǎn)不下降，經(jīng)TLC 檢識(shí)與β-谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品顯色行為及Rf值一致，故化合物8 鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物9 白色粉末(甲醇)，mp.287 -289 ℃，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽(yáng)性，Molisch 反應(yīng)陽(yáng)性，與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，混合熔點(diǎn)不下降，經(jīng)TLC檢識(shí)與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)品顯色行為及Rf值一致［16］，故化合物9 鑒定為胡蘿卜苷(daucosterol)。

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