芪柴護肝顆粒的制備與質(zhì)量控制

常吉梅 常娟

芪柴護肝湯由黃芪、柴胡、郁金、丹參、枸杞等十七味中藥組成，具有健脾益氣、養(yǎng)血活血、清熱解毒除濕的功效。臨床上用于治療慢性乙型肝炎，效果良好。為了進一步對芪柴護肝湯進行研究開發(fā)，我們將芪柴護肝湯制成芪柴護肝顆粒，下面報告芪柴護肝顆粒的制備和質(zhì)量控制方法研究。

1 材料

1.1 藥品與試劑 黃芪甲苷對照品(批號110781-200613)、原兒茶醛對照品(批號110810-200506)、柴胡對照藥材(批號120992-200605)、枸杞子對照藥材(批號121072-200505)均由中國藥品生物制品檢定所提供;硅膠G(青島海洋化工廠);芪柴護肝顆粒(自制，批號 20100412、20100521、20100616);陰性樣品(自制，按處方藥味除去被測藥材制備而成);試劑均為分析純。

1.2 儀器 ZF1型三用紫外分析儀(上海顧村電器廠)、TG328A型電光分析天平(上海醫(yī)用激光儀器廠)、TCQ250型超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)、薄層層析儀(100×100 mm，上海信儀玻璃儀器廠)。

2 處方與制備

2.1 處方組成 黃芪60 g醋柴胡36 g郁金36 g丹參60 g土茯苓48 g白花蛇舌草36 g虎杖36 g茯苓36 g半夏36 g陳皮36 g山藥36 g焦雞內(nèi)金36 g焦山楂36 g當(dāng)歸36 g白芍36枸杞子48炙甘草12 g。

2.2 制備

2.2.1 將丹參粉碎成粗顆粒，用80%的乙醇熱回流提取兩次(第1次加4倍量乙醇，回流提取3 h;第2次加3倍量乙醇，回流提取2 h)，濾過，合并2次濾液，減壓回收乙醇得浸膏備用。

2.2.2 其余藥與乙醇回流提取過的藥渣共同加水浸漬1 h，加熱提取2次(第1次加10倍量水，煎煮2 h;第2次加8倍量水，煎煮1.5 h)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至適量(1∶1.5)，放出，按10%的量加入5%101果汁澄清劑，攪勻，靜置冷藏24 h，虹吸上清液，再減壓濃縮至相對密度為1.32～1.35(80℃)的浸膏，與備用浸膏合并后加蔗糖粉及糊精，混勻，制成軟材，制顆粒，干燥，制成1 000 g，即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀 本品為黃棕色至棕褐色顆粒，氣微，味甜、微酸。3.2 鑒別

3.2.1 黃芪的鑒別 取本品40 g，研細，加甲醇100 ml，超聲提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 ml使溶解，用乙醚提取2次(20、20 ml)，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取3次(30、20、20 ml)，合并提取液，用正丁醇飽和的1%氫氧化鈉溶液洗滌3次(20、20、15 ml)，棄去堿液，繼用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液;另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成1 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。并將陰性樣品同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗［1］，吸取上述3種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶20∶11∶5)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約5 min。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同棕褐色斑點;置紫外光燈(365 nm)下檢視，顯相同的橙黃色斑點，陰性對照試驗證明無干擾。

3.2.2 柴胡的鑒別 取柴胡對照藥材1.5 g，照黃芪鑒別項下的方法制成柴胡對照藥材溶液。并將陰性樣品同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗［1］，吸取上述3溶液各4 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(7∶3∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱數(shù)分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置上顯兩個相同的粉紅色斑點，陰性對照試驗證明無干擾。

3.2.3 枸杞子的薄層鑒別 取本品30 g，研細，加水100 ml使溶解，加三氯甲烷搖提取2次，每次40 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材1 g，加水20 ml，煎煮10 min，濾過，濾液加三氯甲烷振搖提取2次，每次20 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為對照藥材溶液。并將陰性樣品同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗［1］，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中在與對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同的藍色熒光斑點(陰性對照無此斑點)。

3.2.4 丹參的薄層鑒別 取本品30 g加水100 ml使溶解，加鹽酸調(diào)pH值至2，加乙醚提取2次，每次30 ml，乙醚液蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取原兒茶醛對照品加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。并將陰性樣品同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法［1］，吸取上述3種溶液各3 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(12∶1∶0.4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵-1%鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的藍色斑點(陰性對照無此斑點)。

3.2.5 其他檢查應(yīng)符合《中國藥典》2005年版一部附錄顆粒劑項下有關(guān)的各項規(guī)定［1］。

4 討論

4.1 芪柴護肝顆粒主要以水為溶劑提取，所含成分以水溶性為主，故本實驗選用黃芪、柴胡、丹參、枸杞子所含的水溶性成分進行鑒別研究。研究證明柴胡有明顯的消炎、利膽和抗病毒功能［2］;黃芪有免疫調(diào)節(jié)、抗肝纖維化和抗病毒等方面的藥理作用［3］;丹參能減輕肝細胞損害和促進其修復(fù)［4］;枸杞多糖有良好的保護肝臟作用［5］;對它們的鑒別研究可確保該制劑的質(zhì)量及療效。

4.2 由于黃芪與柴胡所含有效成分黃芪甲苷、柴胡皂苷均為三萜皂苷，故我們選用同一種提取方法制備的供試品溶液，即可對兩種藥材分別進行TLC鑒別。在對黃芪進行試驗時，原展開劑為三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)，雖可將黃芪甲苷檢出，但Rf＞0.95，且斑點呈扁圓形，經(jīng)選用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶20∶11∶5)10℃以下放置的下層溶液為展開劑［6］，展開時溫度控制在30℃以下，濕度45% ～58%，所得斑點Rf值適中，圓而清晰。

以上方法對其多批樣品進行檢驗，具良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，陰性樣品對照試驗均證明其檢驗藥味的專屬性，用于該制劑的質(zhì)量控制是可行的。本品應(yīng)建立定量分析方法，測定主藥含量，更好地控制藥品質(zhì)量，但由于條件所限，定量分析方法有待于進一步探討和研究。

［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄 31-附錄 32.

［2］李文，周正宇，查贛，等.170種中草藥抗乙型肝炎病毒的實驗研究.世界華人消化雜志，1999，1:89.

［3］高倩，譚行華，袁冬生.黃芪在治療慢性乙型肝炎中的藥理作用.實用肝臟病雜志，2010，13(6):464.

［4］鄭曉賓.丹參防治實驗性急性肝損傷機理的研究.中國免疫學(xué)雜志，1997，13:157.

［5］邢雁霞，劉宏，劉斌鈺.等.枸杞多糖對小鼠實驗性肝損傷的實驗研究.社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2011，9(8):46.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩色圖集.廣州:廣東科技出版社，1993:66.