川貝母品質(zhì)評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展

楊復(fù)森，武衛(wèi)紅

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南250002;2.山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，山東濟(jì)南250002)

川貝母來源于百合科植物川貝母(卷葉貝母)、暗紫貝母、甘肅貝母、梭砂貝母、太白貝母或瓦布貝母的干燥鱗莖，其中瓦布貝母和太白貝母為2010版《中國藥典》新收載的植物來源，按照性狀不同分別習(xí)稱“松貝”、“青貝”、“爐貝”和“栽培品”。川貝母臨床用藥歷史悠久、療效確切，具有清熱潤肺，化痰止咳之功效，常用于肺熱燥咳，干咳少痰，陰虛勞嗽，咳痰帶血等癥［1］。由于貝母屬植物分布廣泛，種間變異復(fù)雜且外形相似，給形態(tài)分類帶來極大麻煩，而正品川貝母資源匱乏，價(jià)格昂貴，難以滿足臨床的需要，因而市場上偽品較多，存在以次充好、以假亂真的問題，常有價(jià)格低廉的平貝、東貝和珠貝等摻入川貝入藥，光慈姑、唐菖蒲、麗江山慈菇等偽品充當(dāng)川貝使用［2］，造成川貝母藥材市場嚴(yán)重混亂，可見，加強(qiáng)川貝母的質(zhì)量控制意義重大。近年來，隨著各學(xué)科的相互滲透，對(duì)中藥材的品質(zhì)研究出現(xiàn)了眾多新技術(shù)和新方法，為中藥材整體質(zhì)量的評(píng)價(jià)提供了有力手段，本文就近年來對(duì)川貝母的定性定量質(zhì)量評(píng)價(jià)方法研究進(jìn)展做簡要綜述。

1 定性評(píng)價(jià)方法

1.1 傳統(tǒng)鑒別法 貝母類藥材及其混淆品、偽品在性狀上的不同點(diǎn)，常作為他們種與種之間的鑒別依據(jù)，楊惠蓮等［2～4］對(duì)貝母類藥材及其偽品、混用品從性狀、顯微鑒別的角度進(jìn)行了分析，為正確選用貝母類藥材提供了參考。但由于川貝母植物來源品種多，僅四川省就有14種4變種［5］，而且分布廣泛，各地環(huán)境條件又有所不同，栽培技術(shù)產(chǎn)地加工方法也不一，導(dǎo)致不同產(chǎn)地川貝母的外觀性狀及質(zhì)量都存在差異，增加了性狀鑒別的難度，因而該鑒別方法需要較豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。

1.2 薄層色譜法 中藥材的薄層色譜鑒別法是最常用的定性分析方法，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好。王曙等［6］以皂苷類成分為指標(biāo)，成功應(yīng)用薄層色譜法區(qū)別川貝母(卷葉貝母、梭砂貝母、暗紫貝母、甘肅貝母)與其他貝母(伊貝母、浙貝母和平貝母)，為川貝母的鑒別提供了依據(jù)。黃小鷗等［7］則以貝母甲素、貝母乙素和西貝堿為依據(jù)，建立了浙貝母、川貝母、湖北貝母、平貝母和伊貝母的薄層鑒別方法。陳杰等［8］以浙貝母堿和浙貝母次堿為對(duì)照品，采用薄層色譜法，準(zhǔn)確區(qū)別了川貝母與東貝母?？梢姡鶕?jù)貝母類藥材所含化學(xué)成分的不同，薄層色譜法可作為川貝母定性鑒別的依據(jù)。

1.3 高效液相色譜法 HPLC法具分離度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，一般常用于含量測定，但也可根據(jù)特征色譜峰和指紋圖譜的異同進(jìn)行定性分析。于海英等［9］采用三相靜態(tài)萃取技術(shù)制備樣品，對(duì)五種貝母(川貝、平貝、浙貝、伊貝、湖北貝母)的三個(gè)極性不同的萃取餾分分別進(jìn)行HPLC測定，三個(gè)餾分的色譜圖能夠充分顯示各種貝母的特征，進(jìn)一步利用相似度值作為貝母藥材鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)的依據(jù)。

1.4 熱分析法 熱分析法是在程序控制溫度下，精確記錄待測物質(zhì)理化性質(zhì)與溫度的關(guān)系，研究其受熱過程所發(fā)生的物理或化學(xué)變化，該法簡便快捷、結(jié)果直觀，常用于形態(tài)相似中藥材的鑒別，主要有差熱分析法、熱重法、差示掃描量熱法等。

程存貴等［10］采用差熱分析法，分別就川貝母類(包括川貝母、暗紫貝母、甘肅貝母及棱砂貝母)、伊貝母類(新疆貝母與伊犁貝母)、浙貝母類(大貝、珠貝、象貝、東貝)及不同貝母間(平貝、川貝、伊貝、浙貝、湖北貝母)、還有川貝母與偽品間(皖貝母、米貝母、彭澤貝母、一輪貝母、土貝母、老鴉瓣)、不同產(chǎn)地的一輪貝母的差熱圖譜進(jìn)行了比較，研究表明:同是貝母類藥材，其差熱圖譜曲線不同，而與偽品之間的區(qū)別更大，以此作為不同來源不同品種貝母類藥材的鑒別依據(jù)。王書軍等［11］采用熱重/差熱分析方法對(duì)9種貝母類中藥材粉末的熱重/差熱圖譜進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)貝母類藥材由于來源不同，地理環(huán)境和氣候的差異，熱分析圖譜之間差異較大。該作者還運(yùn)用差示掃描量熱儀對(duì)9種貝母中淀粉的凝膠化性質(zhì)進(jìn)行研究［12］，通過比較發(fā)現(xiàn)，浙貝和湖北貝母較為接近，青貝、松貝和爐貝較為接近，岷貝卻與前三者差別明顯，而新疆貝母和伊犁貝母存在明顯的差異，以此對(duì)貝母類中藥材進(jìn)行分類和鑒別。

1.5 紅外光譜法 紅外光譜法利用中藥材中化合物的特征吸收峰作為定性分析的依據(jù)，王波等［13］利用紅外光譜法從光譜圖中找出青貝、松貝、爐貝、平貝、東貝、浙貝的差異，吸收峰中最大差異是由飽和碳?xì)滏I在2 000～500 cm－1區(qū)域的不對(duì)稱伸縮振動(dòng)產(chǎn)生，得出青貝、松貝、爐貝峰型一致，各類貝母紅外圖譜差異較大。周群等［14］采用紅外光譜法和二維相關(guān)紅外分析技術(shù)分析鑒別了川貝、平貝、浙貝和伊貝，可依據(jù)各種貝母化學(xué)成分的差異及熱微擾所引起藥用植物結(jié)構(gòu)變化的規(guī)律進(jìn)行區(qū)分和鑒別。程存歸等［15］則利用傅里葉變換光譜法(FT－IR法)直接鑒別分析川貝、珠貝和小東貝，其紅外光譜差別較大，認(rèn)為可以采用FTIR法測定同屬不同種的川貝母、浙貝母和東貝母。

1.6 近紅外光譜法 近紅外光譜法(NIR)是近年來發(fā)展迅速，備受世界各國廣為關(guān)注的一種分析方法。高越等［16］對(duì)爐貝、松貝、青貝、浙貝、伊貝、平貝、東貝及湖北貝母等10種貝母藥材，進(jìn)行近紅外漫反射光譜掃描并采用聚類分析、褶合變換－可視化－相似系數(shù)分析等方法進(jìn)行藥材鑒別，結(jié)果顯示平貝、伊貝與川貝更相似，而湖北貝母與浙貝更相似，這與現(xiàn)代藥理研究的結(jié)果也基本一致。鄧波等［17］采用近紅外漫反射光譜法，選取不同范圍內(nèi)的近紅外光譜數(shù)據(jù)，對(duì)川貝、浙貝及平貝共48個(gè)樣品進(jìn)行了主成分分析，結(jié)果顯示該法可以較好地表征樣品的類別關(guān)系，能夠用于貝母類藥材的鑒別。胡鋼亮等［18］應(yīng)用近紅外漫反射光譜技術(shù)，建立了快速檢測川貝母中浙貝母摻入量的新方法，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，RSD為 0.81%。

1.7 其他方法 除上述方法外，X射線衍射分析技術(shù)、電噴霧離子阱質(zhì)譜技術(shù)、生物技術(shù)等方法也在川貝母的品質(zhì)分析中得到初步應(yīng)用。王書軍等［19］采用X衍射分析技術(shù)測定川貝、浙貝、平貝、伊貝和湖北貝母的衍射圖譜，結(jié)果顯示五種貝母的淀粉類型和結(jié)晶度存在差異，有效地區(qū)分了五種貝母類藥材。韓鳳梅等［20］應(yīng)用電噴霧離子阱質(zhì)譜特征圖譜的方法對(duì)川貝、浙貝、平貝、伊貝與湖北貝母5種貝母中的生物堿進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示，5種貝母對(duì)照藥材的總生物堿提取液的一級(jí)電噴霧質(zhì)譜圖譜中，主要分子離子峰基本相同，但因貝母種類不同其相對(duì)豐度差異較大，可借此區(qū)分不同貝母類藥材。李玉鋒等［21］從生物技術(shù)的角度運(yùn)用RAPD(Random amplified polymorphic DNA)技術(shù)分析8種貝母的基因組DNA多態(tài)性并構(gòu)建樹狀聚類圖，結(jié)果表明相同產(chǎn)地的川貝親緣關(guān)系最近，瓦布貝母、濃蜜貝母也與川貝較近，但不同產(chǎn)地的浙貝、平貝、伊貝與川貝的遺傳距離較遠(yuǎn)，得出地理分布距離越小，貝母的遺傳差異越小，反之越大的結(jié)論。

2 定量評(píng)價(jià)方法

一般認(rèn)為川貝母化學(xué)成分主要為生物堿部分和非生物堿部分，其中生物堿部分是其主要檢測指標(biāo)成分，據(jù)報(bào)道非生物堿部分核苷、皂苷等水溶性成分也與川貝的臨床作用有關(guān)［22］，但近年來對(duì)非生物堿部分的定量分析研究很少，2010版《中國藥典》中對(duì)川貝的定量分析依然是測定總生物堿含量［1］。目前對(duì)川貝母的定量分析方法主要有兩相滴定法、比色法、高效液相色譜法等。

2.1 兩相滴定法 馬利瓊等［23］采用兩相滴定法測定了17個(gè)不同產(chǎn)地的川貝母、暗紫貝母、棱砂貝母和甘肅貝母中總生物堿的含量，其中川貝母含量較高，暗紫貝母偏低，為川貝母的含量限定提供了參考;王曙等［24］則利用該法比較了川貝與浙貝、伊貝、平貝在總生物堿含量上的差異;杜建紅等［25］用該法測定了瓦布貝母的野生松貝及家種松貝、家種青貝中總生物堿的含量，結(jié)果表明家種品高于野生品。但由于滴定法干擾因素較多，現(xiàn)較少應(yīng)用于川貝母的含量測定中。

2.2 酸性染料比色法 酸性染料比色法是測定生物堿類成分最常用的方法之一，它是川貝母測定總生物堿的法定方法?；驹硎巧飰A陽離子與酸性燃料形成的陰離子定量結(jié)合成絡(luò)合物，用有機(jī)溶劑提取后，在一定的波長下測其吸收度，由此計(jì)算生物堿的含量。上官一平［26，27］等基于溴甲酚綠與貝母素甲能夠定量結(jié)合，探索建立了川貝母中貝母甲素的含量測定方法，方法準(zhǔn)確、快速。

2.3 高效液相色譜法 劉晶等［28］以貝母辛為評(píng)價(jià)指標(biāo)運(yùn)用HPLC法測定了其在2010版《中國藥典》新收載的太白貝母和瓦布貝母中的含量，結(jié)果顯示所測含量均高于曾報(bào)道過的其他基源的川貝母含量，成功評(píng)價(jià)了川貝母新資源指標(biāo)成分的含量。余華等［29］根據(jù)33批不同產(chǎn)地或來源的川貝中貝母辛的含量結(jié)果，確定貝母辛的含量限度，并建立了川貝母中貝母辛的定量分析方法，可以更為科學(xué)地反映川貝母的內(nèi)在質(zhì)量。

3 綜合評(píng)價(jià)方法—指紋圖譜法

中藥指紋圖譜是被國內(nèi)外廣泛接受的中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)模式，與傳統(tǒng)的方法相比，在評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的穩(wěn)定性和一致性上具有其獨(dú)特的優(yōu)越性。不僅可以通過指紋圖譜的特征性有效地鑒別樣品的真?zhèn)?，而且可以通過特征峰的面積和比例控制樣品的質(zhì)量。

王聰［30］等為了比較8種植物來源貝母(包括川貝母、太白貝母，暗紫貝母、梭砂貝母、瓦布貝母、浙貝母、伊貝母和平貝母)的指紋特征，以西貝堿為對(duì)照品，研究了川貝母的HPLC指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)川貝母類及與其他貝母類指紋特征的區(qū)別，可以用于川貝母的理化鑒別。李斌［31］等建立了5種貝母(川貝、浙貝、伊貝、平貝、湖北貝母)的弱極性成分HPLC指紋圖譜，標(biāo)定了16個(gè)共有指紋峰及各自的特有峰，由相似度值表明，5種貝母弱極性成分的指紋圖譜存在一定的差異，為5種貝母的鑒別和質(zhì)量控制提供了可靠的方法。

4 小結(jié)與展望

綜上所述，川貝母的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法發(fā)展迅速，近年來取得了很大進(jìn)展，對(duì)有效控制川貝母質(zhì)量發(fā)揮了重要作用。但各方法均有其不足之處，如傳統(tǒng)定性鑒別法主觀性較強(qiáng)且對(duì)操作人員的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)要求較高;熱分析法的影響因素多、對(duì)儀器的要求較高;X射線衍射分析技術(shù)儀器尚未普及、植物中的淀粉等成分的結(jié)晶度低干擾大;RAPD技術(shù)優(yōu)勢明顯，但重現(xiàn)性不好、費(fèi)用較高;紅外光譜法、高效液相色譜法預(yù)處理工作煩瑣，需要投入較多的時(shí)間和精力;比色法中顯色液的PH值對(duì)結(jié)果影響大，且酸性染料對(duì)樣品的前處理要求高;而中藥指紋圖譜的重現(xiàn)性是一直制約其廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵因素。因此，建立一種能夠快速便捷并從整體上反映川貝母質(zhì)量的品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，對(duì)于川貝母及其他中藥材的質(zhì)量保證以及在流通領(lǐng)域中打擊假冒偽劣商品均有重大意義，近紅外光譜技術(shù)顯現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢，有利于中藥現(xiàn)代化、國際化的實(shí)現(xiàn)。

另外，目前對(duì)川貝母的研究主要集中于生物堿部分，而其水溶性成分腺苷的研究甚少，川貝母的傳統(tǒng)用法是水煎，所以對(duì)水溶性成分的評(píng)價(jià)研究應(yīng)具有一定的意義。

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