糖尿病大鼠血、尿TGF－β1的相關(guān)性及糖腎安對(duì)其表達(dá)的影響

王鎂，吳兆利，鄭曙琴，王哲，伊桐凝，南春紅，岳志軍

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032;2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes mellitus，DM)最主要的慢性并發(fā)癥之一，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β1(Transforming growth factor－beta1，TGF－β1)是DN復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的核心因子，是腎臟損傷的關(guān)鍵致病因子，有研究表明TGF－β1高表達(dá)與DN腎纖維化進(jìn)程有關(guān)［1］。

1 材料和方法

方法:雄性Wistar大鼠按照55mg/Kg腹腔注射2%STZ溶液，72h后眶靜脈取血測(cè)血糖≥16.7mmol/L者納入實(shí)驗(yàn)。將成模大鼠隨機(jī)分3組，另設(shè)空白對(duì)照組，中藥組予糖腎安煎劑(黃芪、茯苓、白術(shù)、丹參、山茱萸等組成)灌胃，9.0ml/kg/d;西藥組予厄貝沙坦(賽諾菲安萬(wàn)特提供)蒸餾水溶液0.3 ml/kg/d，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組予等容積蒸餾水;每日1次，共8周。8周末用金屬代謝籠準(zhǔn)確收集24h尿液標(biāo)本，取4ml離心后保存，待測(cè)尿 mALB、TGF－β1水平;用20%烏拉坦腹腔麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血離心分離血清，測(cè)定血糖、TGF－β1水平，血尿TGF－β1采用雙抗體夾心ELISA法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;經(jīng)左心室注入4℃預(yù)冷生理鹽水反復(fù)灌洗后至腎臟轉(zhuǎn)為蒼白色，取部分腎皮質(zhì)置于多聚甲醛固定液中24h后，制作石蠟標(biāo)本、切片，進(jìn)行HE染色和PAS染色。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 各組血、尿TGF－β1、尿mALB水平的變化

8周后各組血、尿TGF－β1和mALB水平的變化見(jiàn)表1，模型組大鼠血、尿TGF－β1、mALB明顯高于正常組(P＜0.01)，中藥組、西藥組明顯低于模型組(P＜0.01)，與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

表1 各組血、尿TGF－β1、mALB比較(s)

表1 各組血、尿TGF－β1、mALB比較(s)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

空白對(duì)照組8 77.4 ±3.1 76.1 ±6.3 72.2 ±8.2模型組 9 97.3 ±14.0＊＊ 104.2 ±12.5＊＊ 102.4 ±13.7＊＊中藥組 9 82.4 ±7.7△△ 86.4 ±13.1△△ 83.3 ±11.5△△西藥組 7 84.4 ±9.7△△ 81.8 ±16.5△△ 81.4±9.4△△

3.2 血TGF－β1與尿TGF－β1的相關(guān)分析

各組血TGF－β1與尿TGF－β1進(jìn)行相關(guān)分析結(jié)果均呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組血TGF－β1與尿TGF－β1的相關(guān)分析

3.3 糖腎安對(duì)糖尿病大鼠腎臟組織的病理學(xué)影響

3.3.1 HE 染色

正常大鼠腎臟結(jié)構(gòu)清楚，細(xì)胞核呈藍(lán)色，胞漿呈粉紅色。模型組腎小球毛細(xì)血管壁狹窄甚至閉塞，并可見(jiàn)部分腎小管上皮細(xì)胞空泡變性。中藥組、西藥組腎小球毛細(xì)血管壁狹窄甚至閉塞較模型組減輕，見(jiàn)圖1。

3.3.2 腎臟組織PAS染色

正常組腎小球結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)明顯的腎小球系膜增生及基底膜增厚，模型組腎小球基底膜成分明顯增加，而中藥組、西藥組的基底膜成分較模型組明顯降低，見(jiàn)圖2。

圖2 各組腎臟組織PAS染色(PAS，400×)結(jié)果

4 討論

DN的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，各種細(xì)胞因子影響著腎小球血液動(dòng)力學(xué)、細(xì)胞外基質(zhì)代謝、細(xì)胞增殖和肥大，其中TGF－β1可能是各種內(nèi)源性和外源性刺激引起正常腎組織纖維化發(fā)生的主要細(xì)胞因子［2］。它能選擇性的增加ECM的合成，減少ECM的降解。在DN狀態(tài)下，TGF－β1及其受體水平在腎臟局部增高，從而促進(jìn)其基因表達(dá)水平升高［3］，使腎小球基底膜的通透性增強(qiáng)，尿蛋白排泄明顯增高。

糖腎安由黃芪、茯苓、白術(shù)、丹參、山茱萸等組成。已有臨床研究表明，糖腎安能降低DN患者尿蛋白排泄量，改善乏力水腫等癥狀，還具有抗氧化應(yīng)激作用［4－5］。方中黃芪可以減輕腎小球基底膜病變，抑制腎臟肥大，從而減少尿蛋白排出，亦可部分糾正糖尿病早期的腎臟高灌注、高濾過(guò)，對(duì)腎臟具有保護(hù)作用［6］。丹參對(duì)糖尿病早期腎病患者血漿內(nèi)皮素(ET－1)、Ⅳ型膠原(CⅣ)和24h尿白蛋白排泄率水平均有不同程度降低?？梢种艵T－1產(chǎn)生和CⅣ的合成［7］。在糖化終產(chǎn)物(AGEs)培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞加入山茱萸提取物環(huán)烯醚萜總苷后細(xì)胞異常增殖明顯減少，細(xì)胞形態(tài)趨于正常［8］。

本實(shí)驗(yàn)證明，糖尿病大鼠8周后血尿TGF－β1水平比正常組明顯升高，尿mALB水平明顯升高。血、尿液TGF－β1與尿微量白蛋白具有相關(guān)性，糖腎安有效地降低了尿mALB和血尿TGF－β1的水平。減少糖尿病大鼠尿mALB，減輕了腎小球病理學(xué)改變，其對(duì)DN的防治作用可能與抑制TGF－β1的表達(dá)，預(yù)防纖維化發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，糖腎安能減輕腎小球毛細(xì)血管壁的狹窄和閉塞，以及腎小球系膜的增生及基底膜增厚。

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