雞禽流感（H5＋H9）二價滅活疫苗免疫程序探討

朱剛毅，劉寶有，陶正澤，邢四仙，王兆美，張明芬，李盛達(dá)

（云南省江川縣畜牧局，云南 江川 652600）

在每年春秋兩季的重大動物疫病免疫抗體監(jiān)測中，我們發(fā)現(xiàn)，少部分蛋雞場的商品蛋雞一個飼養(yǎng)周期只注射過2次禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗，但在商品蛋雞淘汰時（540日齡左右）采血檢測禽流感H5亞型和H9亞型病毒免疫抗體效價，抗體合格率（≥5log2）還在90%以上。目前商品蛋雞場疫苗防疫種類繁多，如果單用禽流感H5、H9單價滅活疫苗免疫商品蛋雞，一個飼養(yǎng)周期禽流感疫苗就得注射6～8針。對此，我們用禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗分別對兩組商品蛋雞1次性免疫和2次性免疫注射后，定期采血進(jìn)行HI抗體效價跟蹤檢測；并對只做2次禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗的一個商品蛋雞場的三批蛋雞作了禽流感免疫抗體效價和禽流感病毒抗原快速檢測的調(diào)查。旨在探索一種簡便、安全有效的蛋雞禽流感的預(yù)防免疫程序。報告如下。

1 材料與方法

1.1 禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗（H5N1Re-5+H9N2Re-2株） 由農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的某禽流感生產(chǎn)廠家生產(chǎn)。H5亞型和H9亞型禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原及陽性、陰性血清，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。禽流感病毒抗原快速檢測試劑盒：BioN-ote，lnc生產(chǎn)，羅曼動物保健有限公司經(jīng)銷。

1.2 試驗雞分組 1日齡的海藍(lán)褐商品蛋雞600只。分為A、B兩組，A組為1次性免疫組；B組為2次性免疫組，每組300只，由某商品雞場在相同環(huán)境中飼養(yǎng)。

1.3 免疫預(yù)防方法 15日齡A、B兩組每只雞頸部皮下注射禽流感H5+H9滅活疫苗0.3mL。B組至96日齡每只雞再注射禽流感H5+H9滅活疫苗0.5mL。其他疫苗按常規(guī)免疫方法進(jìn)行。

1.4 血清樣品采集 采血日齡為A組：8、12、21、29、36、66、97、127、150；B 組 8、12、21、29、36、66、97、127、150、181、211、241、271、301、331、361、391、421、451、481、511、541。每組試驗雞隨機(jī)抽樣30只，每只雞用1次性2.5mL塑料注射器翅膀下靜脈采血1.5mL，分離血清，冷凍保存?zhèn)錂z。

1.5 抗體效價檢測 按《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)-高致病性禽流感診斷技術(shù)》GB／T18936-2003）規(guī)定的操作規(guī)范進(jìn)行血凝試驗、血凝抑制試驗（HAHI）檢測H5亞型和H9亞型禽流感抗體效價［4］，每組求取抗體效價平均值，繪制坐標(biāo)圖（見圖1）。A組測致平均抗體效價＜5log2，B組測致541日齡（老雞淘汰）。試驗結(jié)束。

1.6 被調(diào)查商品蛋雞場的調(diào)查方法 在某一商品蛋雞場選擇了3批商品蛋雞，禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗只免疫過2次，首免時間為14～17日齡，二免時間為90～110日齡；每批為每批為3000～5000只，商品蛋雞淘汰前（520～540日齡）每批隨機(jī)抽樣30只，每只雞用1次性2.5mL塑料注射器翅膀下靜脈采血1.5mL，分離血清，冷凍保存?zhèn)錂z禽流感免疫抗體效價。每只雞采血后用禽流感病毒抗原快速檢測試劑盒中的樣品采集拭子插入雞喉頭擦拭幾次后，抽出采集拭子放入樣品管，與樣品管中的液體充分混合，一只樣品管液混合5只雞的采集拭子；再用1次性滴管吸取樣品管中混合好的上層樣品液，滴入4～5滴樣品到試紙條樣品孔，室溫水平放置試紙條20～30min內(nèi)，判定結(jié)果。禽流感病毒抗原的判定標(biāo)準(zhǔn)為 ：陽性：試紙在C區(qū)和T區(qū)位置出現(xiàn)平行的紫紅色（或紅色）線；陰性：試紙只在C區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色（或紅色）線；無效：試紙不出現(xiàn)任何線。

2 結(jié)果

2.1 A組（1次性免疫組）禽流感H5+H9滅活疫苗免疫7d后禽流感抗體效價開始回升，免疫后15日H5、H9抗體效價平均值分別為6.07log2、6.05 log2，21日 H5、H9抗體效價平均值分別為7.32 log2、7.79log2，達(dá)峰值；H5、H9免疫后112日抗體效價平均值分別為6.21log2、6.62log2（≥5log2），抗體合格率100%，往后逐漸下降 ，到免疫后135日，H5、H9抗體效價平均值分別只有3.64log2、3.81log2（＜5log2）。H5、H9亞型HI抗體消長規(guī)律同步，離散度較?。ㄒ妶D1）。

2.2 B組（二次性免疫組）禽流感H5+H9滅活疫苗二免（96日齡）前禽流感H5+H9抗體效價平均值以A組相近，二免后第30天達(dá)峰值 ，分別為11.05log2和11.62log2，持續(xù)1個月后緩慢下降。二免后445d（541日齡），禽流感H5+H9抗體效價平均值分別為6.51log2、6.8log2（≥5log2），免疫合格率86.7%。H5+H9亞型HI抗體消長規(guī)律同步，離散度稍大（見圖2）。

2.3 A、B兩組首免前的8日齡雛雞禽流感H5+H9母源抗體效價平均值維持在7.35log2～7.82 log2之間。12日齡母源抗體效價平均值則下降致3.01log2～3.72log2（＜5log2）。

2.4 被調(diào)查商品蛋雞場的蛋雞禽流感調(diào)查結(jié)果（見表1）。

表1 商品蛋雞場的蛋雞禽流感調(diào)查結(jié)果

3 討論

3.1 用禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗免疫商品蛋雞，產(chǎn)蛋前免疫未見到明顯的不良反應(yīng)，免疫效果確實有效。15日齡1次性免疫組免疫后112d，檢測禽流感病毒H5、H9亞型HI抗體效價平均值都在6log2以上（＞5log2），免疫合格率100%，到免疫后135日，H5、H9抗體效價平均值在5log2以下（＜5log2），免疫保護(hù)期只能維持4個月左右［3］，與使用說明書和吳艷濤等報道相似。

3.2 15日齡、96日齡二次性免疫組二免后445d（541日齡），檢測禽流感病毒H5、H9亞型HI抗體效價平均值仍在6log2以上，免疫合格率86.7%，免疫保護(hù)時間比1次性免疫組延長11個月，免疫保護(hù)期則延至541日齡。從做過2次禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗的3批商品蛋雞抽檢的101份樣品結(jié)果看，一是禽流感病毒H5、H9亞型抗原檢測都是陰性，整個飼養(yǎng)周期未發(fā)生過禽流感疫情；二是禽流感病毒H5、H9亞型免疫HI抗體效價平均值尚在6log2至7log2之間，免疫抗體合格率在85%左右；試驗結(jié)果與調(diào)查結(jié)果基本一致。商品蛋雞一個飼養(yǎng)周期一般為一年半，筆者認(rèn)為，實際工作中只需用禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗，在14～17日齡和96～115日齡時，給商品蛋雞2次頸部皮下注射，就可有效地預(yù)防商品蛋雞禽流感病毒H5亞型和H9亞型的感染。

3.3 從結(jié)果坐標(biāo)圖分析 A、B兩組試驗雞禽流感H5亞型和H9亞型HI抗體消長規(guī)律，都在疫苗免疫1周后上升，免疫后21～30d達(dá)峰值［1-2］。但B組抗體效價峰值比A組抗體效價峰值高出4log2，說明加強(qiáng)免疫后雞體對禽流感H5亞型和H9亞型病毒的免疫機(jī)能比1次性免疫的免疫機(jī)能更強(qiáng)大。禽流感H5亞型和H9亞型HI抗體升降幅度基本一致。

3.4 本次禽流感H5亞型和H9亞型HI母源抗體效價平均值的測定 雛雞12日齡與8日齡相比，時間只相差4d，母源抗體效價平均值從7log2以上迅速下降為4log2以下，說明12日齡后的雛雞，母源抗體難以抗拒禽流感H5亞型和H9亞型的侵襲。為減少母源抗體對疫苗免疫效果的干擾，我們建議二次性免疫的首免時間為14～17日齡注射疫苗。

［1］蔡戈，亓文寶，徐成剛，等.種雞禽流感（H5+H9）二價滅活疫苗免疫程序的研究［J］.中國獸醫(yī)雜志，2009，45（7）：14-16.

［2］汪淑芳，周春宇，梁梓，等.H5亞型高致病性禽流感免疫抗體檢測及分析［J］.畜牧獸醫(yī)雜志，2008，27（1）：34-27.

［3］吳艷濤，桑蓮花，董燕平，等.免疫雞群新城疫與禽流感的流行病學(xué)檢測［J］.中國家禽，2009，31（16）：56-57.

［4］GB／T18936-2003.高致病性禽流感診斷技術(shù)［S］.