規(guī)?；i場常見傳染病的樣品采集方法

代洪波，林 艷，周遠(yuǎn)成，吳江江,朱 玲

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 雅安 625014）

實(shí)驗(yàn)室檢測與分析主要針對(duì)動(dòng)物的傳染性疾病。動(dòng)物傳染病是危害養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的一類疾病，它不僅可能造成動(dòng)物大批死亡，而且某些人獸共患傳染病還能給人類健康帶來嚴(yán)重威脅。隨著我國規(guī)?；B(yǎng)殖的不斷發(fā)展，飼養(yǎng)高度集中，一旦暴發(fā)傳染病將會(huì)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。因此，做好規(guī)?；B(yǎng)殖場傳染病檢疫與監(jiān)測至關(guān)重要。樣品采集是傳染病檢疫與檢測的重要環(huán)節(jié)之一，關(guān)系到傳染病檢測的準(zhǔn)確性與檢測效率，本文就規(guī)模化豬場常見傳染病的樣品采集做一簡要概述。

1 流行病學(xué)調(diào)查

當(dāng)規(guī)模化養(yǎng)豬場發(fā)現(xiàn)可疑傳染性疾病病例后，應(yīng)及時(shí)隔離病豬。調(diào)查登記發(fā)病年齡、發(fā)病時(shí)間、發(fā)病率、死亡率、主要癥狀、用藥情況以及疫苗免疫情況等，將調(diào)查情況隨病料一起送檢，便于綜合分析。

2 不同疾病樣品采集

病豬剖檢前應(yīng)充分了解病史，對(duì)于可能的人獸共患傳染病應(yīng)謹(jǐn)慎處理，做好個(gè)人防護(hù)工作，并及時(shí)向相關(guān)防疫部門報(bào)告。選擇合適場所進(jìn)行病豬剖檢，避免病原污染擴(kuò)大，病豬尸體需做無害化處理。優(yōu)先選取未大量使用藥物治療的病危豬進(jìn)行剖檢，病死豬最好在死后6 h以內(nèi)進(jìn)行剖檢。

2.1 呼吸道疾病樣品采集

引起豬呼吸道疾病的主要傳染性疾病有豬繁殖與呼吸綜合征（藍(lán)耳?。⒇i流感、豬偽狂犬病、豬巴氏桿菌?。ㄘi肺疫）、豬支原體肺炎（喘氣病）、豬傳染性胸膜肺炎、副豬嗜血桿菌病、豬萎縮性鼻炎等。

圖1 采集病豬血液

肺臟是呼吸道疾病檢測的主要病料，也是呼吸道疾病實(shí)驗(yàn)室檢測的最佳病料。[1]豬呼吸道疾病的病原主要通過感染豬的肺臟，引起病豬肺臟炎癥、壞死等病變，進(jìn)而導(dǎo)致呼吸困難等。肺臟是豬呼吸道疾病病原繁殖的主要場所，例如豬藍(lán)耳病病毒、豬偽狂犬病病毒主要侵襲肺泡巨噬細(xì)胞，病毒在肺臟的組織細(xì)胞內(nèi)繁殖致病；細(xì)菌病原進(jìn)入肺臟以后，可以吸附并寄生在呼吸道黏膜上，在豬的氣管、支氣管中大量繁殖，導(dǎo)致肺臟炎癥、壞死等。因此采集肺臟可以有效檢測出引起呼吸道疾病的病毒、細(xì)菌等病原微生物。此外，還可以用無菌棉簽采集發(fā)病豬鼻腔分泌物，以含10%甘油的生理鹽水保存，鼻腔拭子僅能夠檢測出部分病原，檢出率與準(zhǔn)確性不如肺臟樣品；[2]發(fā)熱期病豬，可以采集病豬全血樣品（抗凝血采集靜脈血或采血后劇烈震蕩破壞凝血）用于實(shí)驗(yàn)室病原檢測，全血樣品并不能全面分析引起呼吸道疾病的所有病原，僅能檢出引起病毒血癥與菌血癥的病原。

病毒檢測的病料需低溫冷凍保存，細(xì)菌檢測病料建議4 ℃保存；如果懷疑有副豬嗜血桿菌或豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌等分離難度較大的細(xì)菌病原，病料最好在12 h以內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原分離，能有效提高檢出率。

2.2 腹瀉性疾病樣品采集

腹瀉性疾病主要包括豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒感染、豬瘟、大腸桿菌引起的仔豬黃白痢、仔豬水腫病、沙門氏菌引起的仔豬副傷寒、螺旋體引起的豬痢疾、魏氏梭菌引起仔豬紅痢等。

病毒性腹瀉主要選用腸內(nèi)容物、腸黏膜與腸系膜淋巴結(jié)進(jìn)行病原檢測，引起腹瀉的病毒主要感染腸絨毛上皮細(xì)胞，并在腸絨毛中進(jìn)行增殖。大量病毒隨著腸絨毛破壞脫落等，釋放至腸內(nèi)容物中，同時(shí)腸上皮細(xì)胞破損，病毒可以進(jìn)入毛細(xì)血管，引起腸系膜淋巴結(jié)等組織病變。因此，主要選用腸系膜淋巴結(jié)、腸黏膜或腸內(nèi)容物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病原檢測。細(xì)菌病原引起的腹瀉，主要選用病變部位腸內(nèi)容物或小腸內(nèi)容物進(jìn)行病原菌的分離；腹瀉病豬常伴有胃、腸黏膜受損，病原菌容易進(jìn)入血液循環(huán)引起菌血癥，常選用肝臟進(jìn)行病原菌的分離；仔豬水腫病引起仔豬胃黏膜水腫，一般選取病豬胃進(jìn)行病原菌分離。胃、腸采樣前，應(yīng)先在斷端作結(jié)扎處理。

2.3 神經(jīng)癥狀疾病樣品采集

引起豬神經(jīng)癥狀的主要疾病包括豬偽狂犬病、流行性乙型腦炎、豬鏈球菌病、李氏桿菌病、仔豬水腫病、豬丹毒等。

豬偽狂犬病病毒與乙型腦炎病毒主要通過感染病豬腦組織引起神經(jīng)癥狀，患豬腦組織是檢測神經(jīng)癥狀病毒的最佳病料；偽狂犬病病毒還在扁桃體、肺臟等組織中大量存在，乙型腦炎病毒感染還可以選取發(fā)熱期病豬血液進(jìn)行病原檢測。豬鏈球菌病、李氏桿菌病、仔豬水腫病等引起神經(jīng)癥狀需要病原菌進(jìn)入血液引起菌血癥或毒血癥。因此，主要選取發(fā)病動(dòng)物肝臟、脾臟等進(jìn)行病原菌分離。

2.4 其他疾病樣品采集

專嗜性傳染病或以侵害某種器官為主的傳染病，采集該病侵害的主要器官組織，例如豬瘟引起病豬脾臟梗死，病毒在脾臟中含量較高；口蹄疫、豬水皰病則采集口、蹄部的皰皮和水皰液；豬的皮膚病，例如滲出性皮炎等可以選取壞死皮膚或皮膚結(jié)痂部位進(jìn)行病原檢測；呈現(xiàn)流產(chǎn)癥狀的傳染病，例如豬細(xì)小病毒病、布氏桿菌病等，則采取流產(chǎn)胎兒和胎衣；引起皮膚充血、出血癥狀的豬傳染病，例如豬瘟、豬圓環(huán)病毒2型感染、豬巴氏桿菌病等，應(yīng)采集病豬體表淋巴結(jié)與各內(nèi)臟器官進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室全面分析。提不出懷疑對(duì)象時(shí)，則采全身各臟器組織與體表淋巴結(jié)；對(duì)懷疑為中毒性疾病時(shí)，應(yīng)采集喂食的飼料、飲水等，以及胃內(nèi)容物。

3 規(guī)?；i場抗體與主要病原監(jiān)測采樣

抗體檢測主要用于評(píng)價(jià)疫苗免疫效果；部分抗體檢測例如偽狂犬病gE抗體檢測，可以用以監(jiān)測豬場偽狂犬病野毒感染情況?？贵w檢測應(yīng)采集豬前腔靜脈或耳緣靜脈血，采血后容器中應(yīng)留有一定空隙（利于血清析出），常溫或37 ℃傾斜30～45°角放置30 min至1 h使其凝血，再4 ℃放置6～12 h析出血清?？贵w檢測血樣應(yīng)避免劇烈震蕩，分離血清以前應(yīng)避免0 ℃以下冷凍，劇烈震蕩與冷凍將導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂，溶血會(huì)對(duì)抗體檢測產(chǎn)生一定影響。[4]

圖2 用無菌棉簽采集發(fā)病豬鼻腔分泌物

抗體檢測采樣時(shí)間應(yīng)結(jié)合豬群疫苗免疫時(shí)間而定，評(píng)價(jià)免疫效果最好在疫苗免疫20 d以后采樣。母源抗體隨著仔豬日齡遞減，不同日齡仔豬抗體水平各不相同，評(píng)價(jià)仔豬母源抗體應(yīng)分年齡段采血檢測分析。

豬場引種或定期病原檢測，需要對(duì)豬群進(jìn)行活體采樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病原檢測?；铙w采樣一般采集扁桃體、鼻腔分泌物、血液、公豬精液等。扁桃體用于病原監(jiān)測比較可靠但采樣難度較大，需要專門工具進(jìn)行樣品采集；鼻腔分泌物與血液僅對(duì)部分病原可行，并且準(zhǔn)確率不如扁桃體高。

4 病料的送檢

對(duì)送檢的病料，應(yīng)在容器上編號(hào)，做好記錄，并附詳細(xì)流行病學(xué)調(diào)查記錄。對(duì)送檢的病料應(yīng)包裝安全穩(wěn)妥。一般情況下，微生物學(xué)檢查材料都怕受熱，應(yīng)冷藏包裝送檢。病料包裝好后，應(yīng)盡快送達(dá)檢驗(yàn)單位，短途或危險(xiǎn)材料應(yīng)派專人直接送達(dá)，遠(yuǎn)途可以空運(yùn)。

[1] 陳溥言. 獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2006.

[2] Straw B E，趙德明，張仲秋，等.豬病學(xué)[M].9版.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2008.

[3] 張慧勤，李釗，吳瑞栓，等.采集豬疫病監(jiān)測樣品的方法和注意事項(xiàng)[J].中國獸醫(yī)文摘，2009（3）:61-62.

[4] 朱義霞，李紅燕，苗蓮葉.怎樣采集病豬樣品送檢[J].河南畜牧獸醫(yī)，2002，12(23): 35.