PTHrP和BSP聯(lián)合檢測在前列腺癌骨轉移診斷中的價值

朱開常，許小林，劉 峰，王 忠，陳 琳，沈建國，金建忠，王 悅，李 迅，徐 敏，李家棟

(上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院奉賢分院，上海201400)

甲狀旁腺激素相關蛋白(Parathyroid hormone related protein，PTHrP)是1987年從惡性高血鈣腫瘤患者的腫瘤中提取純化的，與細胞的增殖分化和鈣轉移有關。多種類型腫瘤組織中存在PTHrP過度表達，并已證實PTHrP為惡性腫瘤致體液性高血鈣的原因［1］。人骨唾液蛋白(Human bone sialoprotein，hBSP)是細胞外基質中的一種酸性糖蛋白，參與信號識別、細胞黏附和轉移，在破骨細胞和成骨細胞與骨小梁表面結合過程中發(fā)揮重要作用。BSP與惡性腫瘤及骨轉移有相關性，且在眾多前列腺癌骨轉移標志中，顯示出很高的靈敏性及特異性［2］。近期我們對2009年1月～2010年9月確診的原發(fā)性前列腺癌患者檢測了其前列腺癌組織中PTHrP和BSP表達，并探討二者表達與術后骨轉移的關系，旨在為前列腺癌骨轉移的預防和治療尋找新的藥物靶點提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 89例前列腺癌患者癌組織石蠟包埋標本，患者年齡32～74(54.6±4.2)歲，中位年齡46歲。均經(jīng)病理檢查證實診斷，TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期48例，Ⅲ期30例，Ⅳ期5例。根據(jù)核素骨顯像結果分為骨轉移組42例和無骨轉移組47例，其中無骨轉移組包括無轉移患者26例，骨外轉移患者21例。兩組一般資料具有可比性。

1.2 PTHrP和BSP表達檢測 采用常規(guī)ABC法對兩組標本行PTHrP和BSP的免疫組織化學染色。PTHrP鼠抗人單克隆抗體購于美國Calbiochem公司，BSP鼠抗人單克隆抗體購自加拿大Bio-Wen公司，ABC免疫組化試劑盒和DAB染色盒購自北京中山試劑公司，按照試劑盒說明進行操作。以已知PTHrP和BSP的陽性切片作為對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為每次染色的陰性對照。PTHrP和BSP陽性細胞染色為棕黃或棕褐色，定位于胞質，連續(xù)計數(shù)＞10個高倍視野，每個高倍視野計數(shù)100個腺上皮細胞，計算陽性細胞的平均百分率，陽性細胞數(shù)＜25%為陰性，25%～80%為弱陽性(+)，＞80%為強陽性(++)。

1.3 隨訪 采用電話或信件方式對兩組進行隨訪，隨訪截至2011年10月1日，共隨訪12個月，記錄新發(fā)生的骨轉移情況，隨訪終點為研究結束或患者死亡。對可能影響前列腺癌患者骨轉移的臨床因素采用Cox比例風險回歸模型統(tǒng)計，患者生存預后情況采用Log-rank生存曲線分析。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS13.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理，組間計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α =0.05。

2 結果

2.1 兩組PTHrP和BSP表達 PTHrP和BSP染色部位均位于癌細胞胞質，邊緣正常前列腺上皮細胞和浸潤淋巴細胞均無著色。PTHrP和BSP在骨轉移組陽性表達均明顯高于無骨轉移組(χ2值分別為10.47 和8.48，P 均 ＜0.01)，且強陽性表達亦均明顯高于后者(χ2值分別為 11.04和 9.17，P 均 ＜0.05)，見表1。無骨轉移組中無轉移及骨外轉移者兩指標陽性率無統(tǒng)計學差異。

表1 兩組前列腺癌組織PTHr P和BSP表達比較

2.2 隨訪 隨訪率100%。無骨轉移組隨訪12個月，17例發(fā)生骨轉移。Cox比例風險回歸模型分析結果顯示，前列腺癌組織中PTHrP和BSP高表達是骨轉移的主要危險因素(P＜0.01)，其相對危險度分別為1.348和1.293(表2)。兩組隨訪期間共有24例死亡，Log-rank生存曲線分析結果顯示，隨著觀察時間延長，PTHrP和BSP高表達者累積生存概率均明顯低于PTHrP和 BSP陰性表達者(P均＜0.05)。

表2 PTHr P和BSP對前列腺癌骨轉移的Cox比例風險回歸模型分析

3 討論

轉移性骨腫瘤是晚期惡性腫瘤的常見并發(fā)癥，據(jù)統(tǒng)計，發(fā)生率占全身轉移性腫瘤的15%～20%，僅次于肺轉移和肝轉移［3］。腫瘤患者發(fā)生骨轉移后常導致局部劇烈疼痛、病理性骨折、高鈣血癥、脊髓壓迫等癥狀，不僅嚴重影響患者的生活質量，而且影響患者的生存期。臨床約70%的乳腺癌、前列腺癌等親骨性腫瘤患者在自然病程中發(fā)生骨轉移，肺癌、胃癌、結直腸癌、腎癌、甲狀腺癌等患者在病程發(fā)展中亦有15%～30%發(fā)生骨轉移［3］。

PTHrP是1987年Burtis等從與高鈣血癥相關的惡性腫瘤組織中分離出一種具有全身作用的體液因子，其生物學作用多樣，參與多種組織器官的生長發(fā)育，如骨骼、皮膚、牙齒、腎臟、胰腺等，還直接影響胎兒的骨骼礦化，對某些細胞的增殖和分化起促進作用［4，5］。PTHrP作為成骨細胞的一種自分泌和旁分泌因子調節(jié)骨形成和骨吸收［6，7］。在前列腺癌和乳腺癌的動物模型中，PTHrP具有促進骨轉移的作用［5，8～10］，但有關 PTHrP 在腫瘤骨轉移中的具體作用與機制尚不清楚［1，11，12］。

BSP是細胞外基質中一個大的糖基化和磷酸化蛋白，其相對分子質量為70～80 kD，核心蛋白為33～34 kD，在破骨細胞、成骨細胞、滋養(yǎng)細胞、血小板中均發(fā)現(xiàn)有BSP和其mRNA表達，并且發(fā)現(xiàn)BSP在破骨細胞和成骨細胞與骨小梁表面結合過程中發(fā)揮重要作用。研究表明，許多腫瘤在發(fā)展過程中均伴隨有BSP表達，而這些表達BSP的腫瘤亦更容易表現(xiàn)出侵襲、轉移［13］。Waltregny 等［14］對乳腺癌和前列腺癌研究首次闡明BSP在腫瘤的骨轉移中作用顯著。Jain等［15］研究提示，血清BSP是診斷前列腺癌骨轉移的重要參考指標，其水平的增高是骨轉移的高危因素，BSP的高穩(wěn)定表達可增加前列腺癌細胞的血管侵襲能力，提高前列腺癌細胞的骨骼黏附能力，對前列腺癌骨轉移可能起促進作用。

本研究結果顯示，PTHrP和BSP在骨轉移組的陽性表達率均明顯高于無骨轉移組，且強陽性表達亦均明顯高于后者，支持PTHrP和BSP高表達與前列腺癌骨轉移密切相關的理論。PTHrP和BSP陽性表達率在無轉移者和骨外轉移者間比較差異無統(tǒng)計學意義，進一步證實PTHrP和BSP預測骨轉移發(fā)生的優(yōu)越性和靶向性。本研究對47例未發(fā)現(xiàn)骨轉移患者隨訪12個月，結果17例發(fā)生骨轉移。Cox比例風險回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織中PTHrP和BSP高表達是預測骨轉移的主要危險因素，其相對危險度分別為1.348和1.293。同時，應用Log-rank生存曲線分析結果提示，隨著觀察時間延長，在前列腺癌患者中PTHrP和BSP高表達者的累積生存概率均明顯低于PTHrP和BSP陰性表達者，提示PTHrP和BSP高表達患者的預后較差。PTHrP和BSP可作為評估前列腺癌患者預后的重要預測因子。

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