血、尿β2－微球蛋白在高鹽高血壓大鼠早期腎損害診斷中的意義

陳景彥 范洪亮 張樹峰 (華北煤炭醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

眾所周知，高鹽可引起高血壓，而高血壓常引起嚴重的心、腦、腎損害，一般持續(xù)5年以上的高血壓患者大多出現(xiàn)不同程度的腎損傷〔1〕。由于在腎損害的早期，患者沒有明顯的癥狀，即使發(fā)展到相當(dāng)嚴重的階段，癥狀也不明顯，常單純用血清肌酐和尿素氮來評估高血壓患者的腎功能狀態(tài)，最后導(dǎo)致診斷的延遲〔2〕。目前大多數(shù)文獻報道認為，血、尿β2－MG是診斷原發(fā)性高血壓早期腎損害的敏感指標(biāo)〔3〕。本文旨在進一步比較血、尿β2－MG診斷高血壓早期腎損害的敏感性。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 3周齡雄性Wistar大鼠180只，體重40～60 g，SPF級，由天津市山川紅實驗動物科技有限公司提供，動物合格證號:SCXK(津)2009－001。

1.1.2 儀器及試劑 BP－6動物套尾無創(chuàng)血壓儀(成都泰盟科技有限公司);低溫離心機、代謝籠、JA1003型精密天平、日立7180全自動生化分析儀;FT－630G放免儀(北京核儀器廠);尿β2－MG放射免疫分析藥盒(北京原子高科股份有限公司)。

1.1.3 藥物 中藥飲片(承德醫(yī)藥集團責(zé)任有限公司，批號0712002);纈沙坦(北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號X0796)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型制備 根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，高鹽造成高血壓的周期長，并且成模率低，故用3周齡雄性Wistar大鼠180只，選取尿蛋白和尿紅細胞均為陰性者作為觀察對象，預(yù)留10只作為正常對照組，其余170只通過連續(xù)22 w 8%高鹽飼料自然飼養(yǎng)，并從喂養(yǎng)第8周開始每周一次進行血壓測量。在喂養(yǎng)第18～22周時進行血壓達標(biāo)(SBP＞130 mmHg)篩選(用鼠尾動脈測壓儀測清醒狀態(tài)下大鼠的血壓)。模型篩選方法:(1)從血壓已達標(biāo)的大鼠中隨機抽出10只取腎組織行病理切片觀察，尚未發(fā)現(xiàn)病理改變者;(2)在大鼠分組前，每3 d測1次血壓，連測3次，每次每只大鼠測3遍，血壓均＞130 mmHg為造模成功。最后選用40只成模大鼠行8 w干預(yù)措施。

1.2.2 分組 從造模成功的大鼠中篩選40只，根據(jù)血壓值隨機分為模型組、纈沙坦組、中藥高劑量組、中藥中劑量組，每組各10只，加上預(yù)留的10只正常組，共50只。

1.2.3 給藥方法 正常組:普通飼料，灌蒸餾水;模型組:灌蒸餾水;纈沙坦組:予纈沙坦14.4 mg·kg－1·d－1(研磨，蒸餾水溶解;成人劑量的10倍);澤瀉湯加味方高劑量組:予中藥飲片16.2 g·kg－1·d－1(含生藥為 0.81 g/ml，成人劑量的 15 倍);澤瀉湯加味方中劑量組:予中藥飲片10.8 g·kg－1·d－1(含生藥為0.54 g/ml，成人劑量的10倍)。所有實驗大鼠灌胃8 w;除正常對照組外，其余各組大鼠繼續(xù)8%高鹽飼料喂養(yǎng)8 w。

1.2.4 血壓測量 采用無創(chuàng)性套尾法測定清醒大鼠收縮壓(SBP)，每次測量時記錄3次，取其平均值。測定前大鼠在38℃恒溫箱內(nèi)預(yù)熱15 min，使尾部血管充分擴張，便于準確測量。給藥前(0 w)、2 w、4 w、8 w各測一次血壓，每次服藥后2 h開始測量。

1.2.5 血液指標(biāo)檢測 治療8 w后，用10%水合氯醛腹腔內(nèi)給藥麻醉，目內(nèi)眥取血約 3 ml，放入肝素鈉管中，離心(4000 r/min，5 min)取血漿，放置 －80℃冰箱備用。用日立7180全自動生化分析儀檢測血BUN、血Crea、血β2-MG。

1.2.6 尿中指標(biāo)檢測 在治療8 w后，將每只大鼠分別置于代謝籠中，收集24 h尿量(自由飲水、禁食)。尿β2-MG用放免儀檢測。

1.2.7 取材 干預(yù)8 w末，10%水合氯醛腹腔麻醉，并取每只大鼠的雙腎置電子天平稱重，然后把腎組織放入10%甲醛溶液固定保存(石蠟切片備用)。

1.2.8 光鏡觀察腎臟組織病理學(xué)變化 將10%甲醛固定好的腎臟，經(jīng)酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)改變。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組實驗大鼠干預(yù)8 w后，血β2-MG、尿β2-MG的變化纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組與正常組比，血β2-MG無顯著性差異(P＞0.05)。正常組與模型組比，尿β2-MG降低，有顯著性差異(P＜0.05);中藥中劑量組與模型組比，尿β2-MG降低，有顯著性差異(P＜0.05);纈沙坦組、中藥高劑量組與模型組比，尿β2-MG有所降低，但無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

2.2 各組實驗大鼠干預(yù)8 w后，血BUN、血Crea的變化 纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組與正常組比，血BUN升高，均有非常顯著性差異(P＜0.01)。纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組與正常組比，血Crea無顯著性差異(P＞0.05)。見表2。

表1 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血、尿β2-MG水平的變化( ± s，n=10，mg/L)

表1 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血、尿β2-MG水平的變化( ± s，n=10，mg/L)

與模型對照組比較:1)P＜0.05

-MG正常對照組 0.120±0.04216 0.116±0.1031)組別 血β2-MG 尿β2模型對照組 0.120±0.06325 0.226±0.164纈沙坦組 0.140±0.05164 0.153±0.113中藥高劑量組 0.100±0.06667 0.154±0.095中藥中劑量組 0.120±0.06325 0.119±0.1041)

表2 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血BUN、血Crea的變化( ± s，n=10)

表2 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血BUN、血Crea的變化( ± s，n=10)

與正常對照組比較:1)P＜0.01

組別 BUN(mmol/L) Crea(μmol/L)7.614±1.12928 36.800±10.37947模型對照組 12.407±1.718761) 35.300±5.27152纈沙坦組 11.972±3.108551) 32.600±7.57481中藥高劑量組 11.989±2.465441) 32.000±4.73756中藥中劑量組 11.754±1.692441)正常對照組35.000±6.59966

3 討論

β2-MG是由100個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，分子量為11800，人體內(nèi)幾乎所有有核細胞都能合成。它存在于淋巴細胞表面，白細胞、血小板、上皮細胞和間質(zhì)細胞膜上，同時存在于血清、腦脊液、尿液等體液中。它主要有人體淋巴細胞產(chǎn)生，所以當(dāng)人體淋巴細胞被激活時，合成β2-MG明顯增多，在細胞損傷時，便以游離的形式釋放于體液中。正常人體內(nèi)β2-MG含量較為恒定，在通過腎臟循環(huán)時經(jīng)腎小球濾過并由腎小管重吸收和降解，是反映腎臟功能的較理想的內(nèi)物質(zhì)〔4～6〕。當(dāng)腎小球濾過功能下降時，血β2-MG水平上升，故血β2-MG是測定腎小球濾過功能減退的一個極好標(biāo)志;尿β2-MG絕大部分在近端小管被重吸收，故尿中含量極微，如血中含量正常，尿中含量增多，則說明近端腎小管重吸收功能受損〔7〕。目前，許多研究已經(jīng)證實:血BUN、血Crea是反映中晚期腎功能損害的指標(biāo);Viberti〔8〕的研究表明，Crea出現(xiàn)異常時，腎小球濾過率已低于50 ml/min，而腎小球濾過率＞80 ml/min時，β2-MG即開始出現(xiàn)異常。本實驗結(jié)果顯示:(1)在高鹽高血壓大鼠腎損害的早期，尿β2-MG有明顯升高，但是血β2-MG無明顯變化。(2)在高鹽高血壓大鼠腎損害的早期，血BUN、血Crea無明顯改變;纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組的血BUN升高可能與進食高鹽有關(guān)。提示尿β2-MG對高鹽高血壓大鼠早期腎損害的診斷比血β2-MG特異性強。研究證實〔2〕，高血壓腎損害時，腎小管損傷出現(xiàn)時間明顯早于腎小球損傷，且程度亦較重。臨床上，原發(fā)性高血壓腎損害最早出現(xiàn)腎小管功能障礙，也佐證了這一觀點。

總之，對高鹽高血壓大鼠早期腎損害的診斷，尿β2-MG比血β2-MG更敏感;并且尿β2-MG較常規(guī)的腎功能檢查能更早地發(fā)現(xiàn)腎功能的異常改變，從而為臨床診斷原發(fā)性高血壓早期腎損害提供可靠的檢測手段。

1 張 昱，張 秋，王洪霞.中醫(yī)藥治療高血壓腎損害的研究進展〔J〕.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010;5(6):549-51.

2 黎磊石，劉志紅.中國腎臟病學(xué)上冊〔M〕.北京:人民軍醫(yī)出版社，2008:829，846.

3 郭增玉，李全瑞.血尿β2-微球蛋白與老年高血壓腎損害的關(guān)系〔J〕.中國臨床醫(yī)生雜志，2007;35(12):27-8.

4 Shinkai S，Chaves PH，F(xiàn)ujiwara，Y，et al.Beta2-microglobulin for risk stratification of total mortality in the elderly population:comparison with cystatin C and C-reactive protein〔J〕.Arch Intern Med，2008;168(2):200-6.

5 蔡鐵鐵，馮改濤.腎臟疾病中血清β2-MG的意義〔J〕.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2007;8:989.

6 Ikee R，Kobayashi S，Hemmi N，et al.Involvement of transglutaminase-2 in pathological changes in renal disease〔J〕.Nephron Clin Pract，2007;105(3):c139-46.

7 王海燕.腎臟病學(xué)〔M〕.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1995:322-4.

8 Viberti GC.Beta2-microglobulin:a sensitive index of diminishing renal function in diabetics〔J〕.Br Med J，2002;282(6258):58.