4種中藥多糖及胸腺肽對(duì)U14宮頸癌荷瘤鼠脾臟和瘤內(nèi)免疫影響的比較*

羅惠娟，徐建平，黎 清，謝杏美，陳瑞平

(暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510632)

宮頸癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，由于機(jī)體免疫力低下患者往往死于嚴(yán)重感染，腫瘤擴(kuò)散、復(fù)發(fā)等并發(fā)癥，因此免疫增強(qiáng)劑已經(jīng)成為重要的輔助治療手段。本研究通過(guò)比較枸杞、當(dāng)歸、人參、靈芝4種常用的中藥多糖和核酸類免疫增強(qiáng)劑:胸腺肽(thymopeptide，THY)對(duì)U14宮頸癌荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)、瘤組織內(nèi)部和脾臟免疫的影響，試圖找到對(duì)宮頸癌有相對(duì)特異性的免疫增強(qiáng)劑，達(dá)到提高患者生存率的目的。

材料和方法

1 材料

昆明小鼠，SPF級(jí)，6～8周齡，體重(20±2)g，雌性，廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):SCXK(粵)2008－0020;U14宮頸癌腹水型細(xì)胞株由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中心細(xì)胞庫(kù)提供;枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide，LBP)、當(dāng)歸多糖(Angelica sinensis polysaccharide，ASP)、靈芝多糖(Ganodema lucidum polysaccharide，GLP)和人參多糖(Panax ginseng polysaccharide，PGP)由陜西錦泰生物工程有限公司提供;胸腺肽腸溶片由西安迪賽生物藥業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)為0810555，每片5 mg;免疫熒光抗體:FITC anti－mouse CD3、PerCP anti－ mouse CD4、APC anti－ mouse CD8a、PE antimouse CD49 b和小鼠脾淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)于北京達(dá)科為生物技術(shù)有限公司。免疫組化抗體:兔抗人/鼠干擾素γ(interferon γ，IFN－γ)購(gòu)于巴傲得生物科技有限公司;兔抗人/鼠白細(xì)胞介素10(interleukin－10，IL－10)購(gòu)于武漢博士德生物有限公司;生物素化山羊抗兔IgG抗體－HRP多聚體，購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)分組

昆明小鼠70只，隨機(jī)分成7組:正常對(duì)照組、腫瘤模型組、LBP、ASP、GLP、PGP和胸腺肽治療組，每組 10只。第1 d除正常對(duì)照組外，每只鼠右前肢腋下接種U14宮頸癌瘤細(xì)胞2×106∶0.2 mL。第2 d開(kāi)始，正常對(duì)照組和腫瘤模型組0.5 mL/d生理鹽水灌胃，中藥多糖組按純多糖含量400 mg·kg－1·d－1灌胃，胸腺肽按成人用量100 mg/d根據(jù)體表面積折算成0.3 mg/d(生理鹽水稀釋成0.5 mL)灌胃，共21 d，每天記錄小鼠腫瘤生長(zhǎng)情況。第22 d處死所有小鼠，取腫瘤結(jié)節(jié)稱重、計(jì)算體積，腫瘤生長(zhǎng)抑制率(%)=(對(duì)照組平均瘤重－多糖組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%。取脾臟稱重并計(jì)算脾臟指數(shù):脾臟指數(shù)=(脾臟重量/小鼠體重)×10。

3 細(xì)胞分離

將小鼠脾臟研碎，400目篩網(wǎng)過(guò)濾，淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心，分離組織內(nèi)淋巴細(xì)胞，磷酸鹽緩沖液(phosphatebuffered solution，PBS)洗滌后調(diào)整細(xì)胞濃度至1×109/L，樣本加入1%多聚甲醛固定，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3+CD4+TLC、CD3+CD8+TLC和CD49b+NK

按2×1010/L的濃度用PBS重新懸浮細(xì)胞，每個(gè)樣本分2管，第1管同時(shí)加入下列3種熒光抗體染色:FITC antimouse CD3 單克隆抗體 1 μL(0.5 μg)，稀釋度 1∶10;PerCP anti－mouse CD4，稀釋度1∶10;APC anti－mouse CD8a單克隆抗體0.5 μL(0.25 μg)，稀釋度 1∶10，第 2管中加入 PE anti－mouse CD49b 單克隆抗體 0.5 μL(0.25 μg)，稀釋度1∶10。室溫避光孵育30 min，PBS液洗滌2次，PBS液調(diào)整總體積為 100 μL，建立對(duì)照管，分別加入 FITC anti－mouse CD3;PerCP anti－mouse CD4;APC anti－mouse CD8a和PE anti－mouse CD49b單克隆抗體對(duì)照。FACS－Aria流式細(xì)胞儀及CellQuest軟件檢測(cè)和分析樣品。每管樣品檢測(cè)5×103個(gè)細(xì)胞，重復(fù)檢測(cè)3次。

5 腫瘤組織內(nèi)IFN－γ和IL－10的檢測(cè)

腫瘤結(jié)節(jié)10%甲醛固定后石蠟包埋。連續(xù)切片3張，1張經(jīng)HE染色進(jìn)行病理檢查，另2張分別用于IFN－γ和IL－10免疫組化檢測(cè)。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水化，用于免疫組化的標(biāo)本每張切片加1滴相應(yīng)的Ⅰ抗(兔抗人/鼠IL－10或兔抗人/鼠IFN－γ)，4℃過(guò)夜(用PBS替代Ⅰ抗來(lái)進(jìn)行反應(yīng)作為陰性對(duì)照)。PBS沖洗3次，每張切片加1滴生物素化Ⅱ抗，室溫孵育30 min，PBS沖洗3次，每張切片加1滴新鮮配制的DAB顯色液(二氨基聯(lián)苯胺)，蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化，自來(lái)水沖洗返藍(lán)，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固，晾干后觀察。結(jié)果判斷:400倍顯微鏡下IFN－γ和IL－10陽(yáng)性表達(dá)為胞漿、胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒。每張切片觀察5個(gè)代表性視野，應(yīng)用圖像分析軟件Image－Pro Plus 6.0進(jìn)行積分吸光度(integrated absorbance，IA)半定量分析，取5個(gè)視野的平均IA值代表標(biāo)本對(duì)應(yīng)抗原的表達(dá)強(qiáng)度。

6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 小鼠成瘤率、腫瘤抑制率、脾臟重量及脾臟指數(shù)

小鼠在接種U14腹水型宮頸癌細(xì)胞株后5～7 d即可見(jiàn)明顯皮下瘤結(jié)節(jié)，種植成功率100%。結(jié)果顯示，中藥多糖和胸腺肽治療組瘤結(jié)節(jié)重量和體積均小于腫瘤模型組，但PGP和ASP組與腫瘤模型組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。腫瘤抑制率最高的是GLP，達(dá)53.48%，其次依次是LBP和胸腺肽，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。荷瘤鼠脾臟均反應(yīng)性增生，LBP、胸腺肽與正常組相比差異顯著(P＜0.05)，但各治療組與腫瘤模型組差異無(wú)顯著(P＞0.05)。脾臟指數(shù)顯示LBP、GLP、胸腺肽治療組與正常組相比差異顯著(P＜0.05)，其它組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 各組瘤結(jié)節(jié)重量、體積、腫瘤抑制率、脾臟重量和脾臟指數(shù)Table1.Weight and volume of tumor node，tumor inhibitory rate，spleen weight and spleen index of mice(.n=10)

表1 各組瘤結(jié)節(jié)重量、體積、腫瘤抑制率、脾臟重量和脾臟指數(shù)Table1.Weight and volume of tumor node，tumor inhibitory rate，spleen weight and spleen index of mice(.n=10)

*P ＜0.05 vs control group;#P ＜0.05 vs tumor model group.

Group Tumor weight(g)Tumor inhibitory rate(%)Tumor volume(cm3)Spleen weight(g)Spleen index Control 0.19 ±0.52 0.07 ±0.02 Tumor model 5.61 ±1.89 11.75 ±2.03 0.28 ±0.11 0.10 ±0.31 PGP treatment 4.84 ±1.20 13.73 9.66 ±3.43 0.37 ±0.12 0.12 ±0.07 LBP treatment 3.48 ±2.39# 37.97 7.92 ±2.79# 0.39 ±0.81* 0.14 ±0.04*GLP treatment 2.61 ±1.95# 53.48 5.04 ±2.58# 0.37 ±0.11 0.12 ±0.04*ASP treatment 5.09 ±2.80 9.27 10.24 ±3.01 0.22 ±0.95 0.08 ±0.03 THY treatment 3.53 ±1.66# 37.08 7.88 ±1.92# 0.33 ±0.80* 0.12 ±0.04*

2 各組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的比例

小鼠接種U14腫瘤細(xì)胞后脾內(nèi)CD3+CD4+TLC、CD3+CD8+TLC、CD4/CD8比值均出現(xiàn)下降，CD49b+NK升高，可能為外源性腫瘤細(xì)胞的植入，引起的機(jī)體反應(yīng)。服用中藥多糖和胸腺肽組CD3+CD4+TLC均明顯升高，程度依次增強(qiáng)的是:LBP＜ASP＜胸腺肽組 ＜PGP＜GLP。各處理組與正常對(duì)照組和腫瘤對(duì)照組相比均有顯著差異(P＜0.05)。CD3+CD8+TLC除腫瘤對(duì)照組和LBP組，其它組均不同程度升高，程度依次增強(qiáng)的是胸腺肽＜GLP＜ASP＜PGP，腫瘤對(duì)照組、胸腺肽組與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，LBP組與腫瘤對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)。腫瘤對(duì)照組和PGP組CD4/CD8較正常組低，且差異顯著(P＜0.05)，ASP組CD4/CD8比值也有下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余組CD4/CD8比值均升高，表現(xiàn)出免疫增強(qiáng)的反應(yīng)，程度依次增強(qiáng)的是GLP＜胸腺肽組＜LBP，與腫瘤對(duì)照組相比各處理組CD4/CD8均升高，但僅有LBP、GLP和胸腺肽組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各處理組CD49b+NK較正常對(duì)照組和腫瘤對(duì)照組均升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，程度依次為:ASP＜胸腺肽組＜LBP＜GLP＜PGP，見(jiàn)圖1、表2。

3 IFN－γ和IL－10在不同組腫瘤細(xì)胞的表達(dá)

采用免疫組化的方法檢測(cè)小鼠腫瘤組織中表達(dá)以IFN－γ為代表的 Th1和以IL－10為代表的Th2，經(jīng)IA半定量分析并進(jìn)行比較顯示PGP、LBP組的IFN－γ和IL－10較腫瘤對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，GLP、ASP和胸腺肽組IFN－γ較對(duì)照組明顯升高，但前兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，胸腺肽組與腫瘤對(duì)照組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。除ASP組，其它組IL－10與腫瘤對(duì)照組相比均下降，但僅PGP和LBP有顯著差異(P＜0.05)。胸腺肽、LBP和GLP組Th1/Th2均出現(xiàn)向Th1漂移，程度依次減弱，PGP和ASP組無(wú)明顯Th1漂移，見(jiàn)圖2、表3。

討 論

世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)資料表明，全球每年大約有50萬(wàn)宮頸癌新發(fā)病例，約20萬(wàn)人死于宮頸癌。我國(guó)宮頸癌發(fā)病率為14.6/10萬(wàn)，占全球總數(shù)的1/3[1]。盡管宮頸癌已取得滿意療效，中晚期患者5年生存率仍不到50%，預(yù)后不良的主要原因是機(jī)體免疫低下，局部腫瘤難以控制或復(fù)發(fā)，其次是淋巴轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。手術(shù)創(chuàng)傷、放化療等有效的治療方法本身也可損害患者的免疫系統(tǒng)[2－3]。大部分抗腫瘤化療藥物也有免疫抑制作用。何春年等[4]發(fā)現(xiàn)宮頸鱗癌局部以細(xì)胞免疫為主，瘤組織中CD8+TLC比例增加，抗腫瘤免疫受到抑制，需要免疫調(diào)節(jié)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫力。

脾臟是機(jī)體最大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，是細(xì)胞免疫和體液免疫的中心，通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，它對(duì)TLC免疫調(diào)節(jié)作用是腫瘤免疫的一個(gè)重要環(huán)節(jié).成熟的TLC分為CD4+和CD8+TLC兩個(gè)亞群。一般認(rèn)為:CD4+TLC產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，CD8+TLC在CD4+TLC的輔助及細(xì)胞因子的作用下可以殺傷腫瘤細(xì)胞，缺乏CD4+和CD8+TLC，以及CD4+/CD8+比值的降低是導(dǎo)致抗腫瘤免疫效應(yīng)低下的原因之一。CD49b是小鼠NK細(xì)胞的表面標(biāo)記物。NK細(xì)胞不需抗體的存在，亦不需經(jīng)抗原致敏，就可殺傷某些腫瘤細(xì)胞或病毒感染的細(xì)胞，因此也有人認(rèn)為NK細(xì)胞是血液循環(huán)中抗腫瘤細(xì)胞最有效的成分。

LBP、ASP、GLP、PGP和胸腺肽都是目前常用的免疫增強(qiáng)劑，它們發(fā)揮抗癌作用主要通過(guò)以下途徑:(1)對(duì)腫瘤的直接抑制作用:如ASP能抑制S180實(shí)體瘤、腹水型腫瘤艾氏腹水癌(EAC)和小鼠白血病LL－10等腫瘤增殖，是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或分化的天然誘導(dǎo)劑[5]，GLP能抑制小鼠移植性肉瘤S180、人前列腺癌細(xì)胞[6]、人宮頸瘤HeLa細(xì)胞和人胃腺癌MGC 803細(xì)胞的生長(zhǎng)[7]。(2)作為免疫增強(qiáng)劑發(fā)揮抗腫瘤作用:PGP能誘生內(nèi)源性腫瘤壞死因子(TNF)，對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷、抑制作用，ASP和PGP對(duì)放、化療所致的白細(xì)胞減少有明顯的回升作用。增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，活化T、B淋巴細(xì)胞[8－9]。枸杞多糖能增強(qiáng)人外周血淋巴細(xì)胞的免疫功能從而加強(qiáng)抗腫瘤作用[10]。胸腺肽能促使有絲分裂原激活后的外周血中的T淋巴細(xì)胞成熟和淋巴因子的分泌，增加T細(xì)胞上淋巴因子受體的水平，使NK細(xì)胞更有細(xì)胞毒性。(3)影響癌基因的表達(dá)，抑制腫瘤血管形成:如人參、絞股藍(lán)可使CTX誘變的小鼠活體骨髓細(xì)胞 SCE頻率明顯下降[11]。(4)無(wú)論是植物、動(dòng)物或微生物來(lái)源的中藥多糖，都具有一定的抗輻射作用，其機(jī)制一般是認(rèn)為多糖通過(guò)強(qiáng)化造血系統(tǒng)和活化吞噬細(xì)胞的作用來(lái)提高機(jī)體對(duì)輻射的耐受性。

Figure1.Proportion of T －lymphocytes and NK cells in the spleen of the mice in different groups.A:control;B:tumor model;C:PGP treatment;D:LBP treatment;E:GLP treatment;F:ASP treatment;G:thymopeptide treatment.圖1 各組小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的比例

表2 各組脾臟內(nèi)CD3+CD4+TLC、CD3+CD8+TLC、CD49b+NK和CD4/CD8Table2.CD3+CD4+TLC，CD3+CD8+TLC，CD49b+NK and CD4/CD8 in spleen of mice(.n=10)

表2 各組脾臟內(nèi)CD3+CD4+TLC、CD3+CD8+TLC、CD49b+NK和CD4/CD8Table2.CD3+CD4+TLC，CD3+CD8+TLC，CD49b+NK and CD4/CD8 in spleen of mice(.n=10)

*P ＜0.05 vs control group;#P ＜0.05 vs tumor model group.

CD4/CD8 Control 7.57 ±0.46 2.63 ±0.39 2.54 ±0.49 2.94 ±Group CD3+CD4+TLC(%) CD3+CD8+TLC(%) CD49b+NK(%)0.55 Tumor model 3.24 ±0.24* 1.75 ±0.28 5.81 ±0.48* 1.88 ±0.20*PGP treatment 14.07 ±1.60*# 7.49 ±0.74*# 17.27 ±2.41*# 1.90 ±0.32*LBP treatment 11.51 ±1.03*# 1.67 ±0.34* 6.71 ±1.90*# 7.11 ±1.58*#GLP treatment 15.93 ±1.31*# 3.92 ±0.41*# 7.89 ±1.12*# 4.13 ±0.81*#ASP treatment 11.61 ±1.35*# 4.23 ±0.46*# 3.47 ±0.41*# 2.75 ±0.16#THY treatment 13.73 ±1.21*# 3.22 ±0.55# 3.68 ±0.48*# 4.35 ±0.68*#

Figure2.Expression of IFN －γ and IL－10 in tumor tissues of the mice in different groups(immunohistochemical staining，×400).圖2 各組小鼠腫瘤組織IFN－γ和IL－10的表達(dá)

表3 各組Th1(IFN－γ)、Th2(IL－10)和Th1/Th2結(jié)果Table3.Th1(IFN － γ)，Th2(IL－10)and Th1/Th2 in tumor tissue of mice(.n=10)

表3 各組Th1(IFN－γ)、Th2(IL－10)和Th1/Th2結(jié)果Table3.Th1(IFN － γ)，Th2(IL－10)and Th1/Th2 in tumor tissue of mice(.n=10)

*P ＜0.05 vs tumor model.

Group Th1(IFN－γ)Th2(IL－10)Th1/Th21.62 ±0.77 4.51 Tumor model 3.77 ±1.15 2.11 ±0.51 1.79 PGP treatment 1.45 ±0.69* 1.20 ±0.64* 1.21 LBP treatment 2.53 ±0.62* 0.61 ±0.33* 4.18 GLP treatment 4.23 ±0.39 1.19 ±1.24 3.53 ASP treatment 4.53 ±1.26 3.08 ±2.41 1.47 THY treatment 7.29 ±1.53*

本研究顯示，腫瘤對(duì)照組脾臟指數(shù)升高，雖然 CD3+CD4+TLC、CD3+CD8+TLC、CD4/CD8均明顯下降，但CD49b+NK升高，表現(xiàn)出一定的免疫增強(qiáng)的反應(yīng)，可見(jiàn)外源性腫瘤的植入對(duì)于免疫正常的小鼠也有一定的免疫刺激作用。

服用400 mg·kg－1·d－1四種不同類型中藥多糖和胸腺肽對(duì)小鼠U14宮頸癌的生長(zhǎng)和脾臟TLC、NK細(xì)胞作用強(qiáng)度有明顯差異，比較顯示，PGP和ASP無(wú)明顯抑制小鼠U14宮頸癌瘤生長(zhǎng)的作用，瘤組織內(nèi)也無(wú)明顯Th1漂移。ASP對(duì)小鼠脾臟指數(shù)的增加無(wú)明顯效果，CD49b+NK和CD4/CD8改善均不明顯。既往研究表明，ASP促進(jìn)造血，且具有明顯增強(qiáng)免疫活性，對(duì)腫瘤、輻射損傷等疾病亦顯示較好療效，但作用與劑量有關(guān)[12]，改變用量是否能改變結(jié)果還需進(jìn)一步研究。PGP有明顯促脾臟和NK細(xì)胞增生的作用，但由于CD3+CD4+TLC和CD3+CD8+TLC均明顯增高，導(dǎo)致CD4/CD8反而降低。陸平成等[13]報(bào)道，人參可以明顯促進(jìn)艾氏腹水瘤荷瘤小鼠的腹水生成，增加Lewis肺癌小鼠瘤體重量并促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，原因可能是人參不但含抗腫瘤成分，也含有能保護(hù)腫瘤細(xì)胞、促進(jìn)蛋白質(zhì)核酸合成和細(xì)胞生長(zhǎng)的成分，因此提示人參多糖用于宮頸癌應(yīng)當(dāng)慎重。GLP具有最高的腫瘤抑制率，促CD4/CD8升高居第3位，促NK增生居第2位，有良好的抑制U14宮頸癌作用。LBP促脾增生和CD4/CD8升高作用最強(qiáng)，抑瘤作用居第2位，促NK增生居第3，胸腺肽也表現(xiàn)了明顯的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用但強(qiáng)度低于GLP，CD4/CD8升高居第2位，促脾和NK增生作用相對(duì)較弱，均第4位，而且胸腺肽、LBP和GLP組Th1/Th2均出現(xiàn)向Th1漂移，程度依次減弱。

免疫增強(qiáng)劑之間的聯(lián)合應(yīng)用具有廣闊的發(fā)展前景。有研究報(bào)道靈芝多糖和枸杞多糖聯(lián)用能增強(qiáng)荷瘤小鼠免疫功能，加強(qiáng)抗腫瘤作用[14]。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看來(lái)，LBP、GLP和胸腺肽對(duì)U14宮頸荷瘤鼠有明顯的免疫增強(qiáng)作用。

[1]章文華.宮頸癌篩查方法與我國(guó)宮頸癌篩查面臨的新問(wèn)題[J].中華腫瘤雜志，2008，30(12):881 －884.

[2]劉 孜，王國(guó)慶，李明眾，等.術(shù)中大劑量放療對(duì)宮頸癌Ⅱb患者免疫系統(tǒng)的影響[J].癌變·畸變·突變，2005，17(4):247 －249.

[3]高碧燕，金從國(guó)，盧玉波，等.宮頸癌患者新輔助化療與放療前后外周血T細(xì)胞亞群變化的研究[J].實(shí)用癌癥雜志，2009，24(3):248 －250.

[4]何春年，劉貴香，翟金萍，等.子宮頸鱗癌組織中T、B、NK淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與腫瘤免疫[J].免疫學(xué)雜志，2005，21(3):115－118.

[5]左增艷，柳鐘勛，李健蕊，等.新型生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、當(dāng)歸多糖(ASDP)抗腫瘤作用及對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2000，16(10):545 －546.

[6]李穎博，李宇華，王 瑞，等.靈芝多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(2):250－253.

[7]甘 璐，張聲華.枸杞多糖的抗腫瘤活性和對(duì)免疫功能的影響[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2003，25(2):200 －202，241.

[8]吳發(fā)林，施小妹，錢 華.人參多糖抗腫瘤作用機(jī)制研究新進(jìn)展[J].西北藥學(xué)雜志，2010，25(5):390 －391.

[9]陳巖菊，杜偉彬，李樹(shù)臣.人參多糖在腫瘤放射治療中升白細(xì)胞觀察[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，32(2):55 －56.

[10]單鐵英，關(guān) 華，蘇安英，等.枸杞多糖對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(3):361－363.

[11]丁潔平，王慧銘，孫 煒.生物多糖抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，19(8):517-519.

[12]曹 尉，李小強(qiáng)，侯 穎，等.當(dāng)歸多糖ASP－bII的結(jié)構(gòu)特征及體外抗腫瘤作用[J].科學(xué)技術(shù)與工程，2010，10(8):1839 －1843.

[13]陸平成，詹 臻，周坤福，等.人參及人參聯(lián)合TNF對(duì)腫瘤動(dòng)物的作用[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，13(6):344－346.

[14]郝 習(xí)，趙明耀，董子明.靈芝多糖和枸杞多糖聯(lián)合應(yīng)用對(duì)荷瘤小鼠抗腫瘤活性和免疫功能的影響[J].中醫(yī)研究，2011，25(5):33－35.