鼻咽癌組織中MAD2表達(dá)及臨床意義

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬孝感醫(yī)院，湖北孝感 432100)

細(xì)胞周期“質(zhì)控機(jī)制”的最后關(guān)卡—紡錘體檢查點(diǎn)(SAC)的功能缺陷可引起細(xì)胞染色體不穩(wěn)定即形成非整倍體及多倍體，進(jìn)而引起細(xì)胞惡變，是當(dāng)今腫瘤發(fā)生與治療的研究熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，有絲分裂阻滯缺陷蛋白2(MAD2)作為檢查點(diǎn)的重要成員之一，其表達(dá)異常與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，而其與鼻咽癌的相關(guān)性研究鮮見報(bào)道。2005年1月～2011年12月，我們采用免疫組化EliVision二步法檢測(cè)了鼻咽癌組織中的MAD2表達(dá)情況，旨在探討其在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2005年1月～2011年12月我院手術(shù)切除的初治鼻咽癌組織標(biāo)本60份(鼻咽癌組)，患者男39例，女21例;中位年齡48歲，其中＜48歲31例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理診斷(低分化鱗癌)，且術(shù)前均末接受放化療及其他抗癌治療。按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)1997年標(biāo)準(zhǔn)分期，T1期10例、T2期19例、T3期21例、T4期10例;臨床分期Ⅰ期3例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期16例。CT或MRI檢查顯示27例有顱底破壞，根據(jù)臨床癥狀判定18例有顱神經(jīng)損傷。另選同期門診體檢者慢性鼻咽炎組織標(biāo)本25份(鼻咽炎組)，兩組一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

1.2 MAD2陽性表達(dá)檢測(cè) 所有組織標(biāo)本均用10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片。免疫組化染色按ElivisionTMsuper試劑盒操作說明書進(jìn)行，鼠抗人MAD2單克隆抗體(購自Santa Cruz公司)的工作濃度為1∶50，以已知陽性切片做陽性對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):與陰性對(duì)照相比，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃色至棕黃色產(chǎn)物判斷為MAD2陽性。每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野(×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞＞10%為陽性，≤10%為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 MAD2陽性表達(dá) 鼻咽癌組及鼻咽炎組MAD2 陽性表達(dá)率分別為 51.7%(31/60)、80.0%(20/25)，兩組比較 P ＜0.05。

2.2 MAD2表達(dá)與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1 MAD2表達(dá)與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

在細(xì)胞有絲分裂的過程中，有一個(gè)由多種蛋白組成的紡錘體檢查點(diǎn)(又稱有絲分裂檢查點(diǎn))，能準(zhǔn)確地識(shí)別紡錘體微管與染色體動(dòng)粒的連接，從而保證染色體的正常分離，染色體不穩(wěn)定即形成非整倍體及多倍體，是癌前細(xì)胞及癌細(xì)胞本質(zhì)特征之一［1］。MAD2蛋白是紡錘體檢查點(diǎn)的重要成員之一，可通過磷酸化和去磷酸化來調(diào)節(jié)紡錘體微管和染色體動(dòng)粒的連接作用，MAD2的異常表達(dá)可能導(dǎo)致紡錘體檢查點(diǎn)的功能減弱或消失，無法監(jiān)控腫瘤細(xì)胞內(nèi)異常的微管與動(dòng)粒結(jié)合，使染色體出現(xiàn)異常分離，造成細(xì)胞非整倍體異常而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生發(fā)展［2］。

本研究發(fā)現(xiàn)，MAD2在鼻咽癌組中的表達(dá)明顯低于鼻咽炎組，提示MAD2的表達(dá)缺失可能與鼻咽癌癌變的發(fā)生有關(guān)。這與一些學(xué)者在食管鱗癌、卵巢癌等中的研究結(jié)果相似［3，4］。而另外一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在肝癌、肺癌等中MAD2的陽性表達(dá)顯著高于正常組織［5，6］。此外 Sotillo 等［7］發(fā)現(xiàn)，使鼠體內(nèi)MAD2高表達(dá)后伴有較高的非整倍體率，而通過RNA干擾MAD2表達(dá)后亦出現(xiàn)一定非整倍體率，MAD2高表達(dá)的鼠體內(nèi)更易患不同類型腫瘤并伴較高非整倍體率。這些說明，一定量的MAD2是維持正常細(xì)胞有絲分裂所必須的，MAD2的上調(diào)或下調(diào)都可誘發(fā)染色體失衡而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，MAD2在人類腫瘤中的表達(dá)失衡(上調(diào)或下調(diào))可能與腫瘤的遺傳學(xué)背景不同有關(guān)，但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。本研究還發(fā)現(xiàn)，MAD2陽性表達(dá)與鼻咽癌臨床分期相關(guān)，提示MAD2低表達(dá)在鼻咽癌的發(fā)展過程中起促進(jìn)作用。其機(jī)制可能為MAD2低表達(dá)提高了抑癌基因如p53、Rb等的缺失率，使紡錘體分離時(shí)產(chǎn)生的非整倍體細(xì)胞經(jīng)G0期進(jìn)入G1期，抑癌基因的缺失導(dǎo)致細(xì)胞分裂無法阻止在G1期，使非整倍體細(xì)胞逃避了凋亡并進(jìn)一步發(fā)展［8］。

總之，鼻咽癌組織中MAD2呈低表達(dá)，與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān);MAD2可為鼻咽癌的早期診斷、病情及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

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