Ki-67和微血管密度在膀胱癌組織中的表達(dá)及意義

王榮江 石麒麟 邵四海

(湖州市第一人民醫(yī)院,浙江 湖州 313000)

膀胱癌是泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,血管生成是腫瘤產(chǎn)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中極為關(guān)鍵的步驟,細(xì)胞增殖狀況是預(yù)測(cè)膀胱癌發(fā)展及預(yù)后的良好指標(biāo)之一。微血管密度(MVD)可用來評(píng)價(jià)腫瘤組織微血管生成情況,核增殖相關(guān)抗原Ki-67可反映腫瘤細(xì)胞的增殖程度。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)膀胱癌組織中Ki-67和MVD的表達(dá),探討對(duì)膀胱癌的生物學(xué)行為的影響及預(yù)后意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組30例(膀胱癌組),男22例,女8例,年齡60～78歲,平均(65.4±4.8)歲。按UICC分期標(biāo)準(zhǔn)∶淺表性癌組9例(Tis期1例,Ta期2例,T1期6例),浸潤(rùn)性癌組21例(T2期11例,T3期9例,T4期1例)。根據(jù)WHO級(jí)標(biāo)準(zhǔn)∶G1期9例,G2期13例,G3期8例。單發(fā)23例,多發(fā) 7例；術(shù)前初發(fā)22例,復(fù)發(fā)8例；術(shù)后復(fù)發(fā)5例,未復(fù)發(fā)25例。術(shù)后病理證實(shí)單純移行細(xì)胞癌27例,移行細(xì)胞癌合并腺癌2例、合并鱗癌1例。選擇同期20例正常膀胱黏膜標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.2 標(biāo)本制備與免疫組化方法 30例膀胱癌患者腫瘤標(biāo)本常規(guī)經(jīng)4%甲醛固定,石蠟包埋,制成4μ m切片,應(yīng)用SP免疫組化法進(jìn)行組織染色,試劑盒購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司,按照試劑盒說明操作,使用鼠抗人Ki-67單克隆抗體、鼠抗人F-ⅧRag單克隆抗體對(duì)所選切片進(jìn)行染色,磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) (1)Ki-67表達(dá)測(cè)定∶參照Volm Metal[1]的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),以腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞核有棕色顆粒著色為陽(yáng)性標(biāo)記,以隨意5個(gè)400倍視野的癌巢區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞＜5%定為陰性(-),6%～20%為弱陽(yáng)性(+),21%～30%為陽(yáng)性(++),＞30%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)；(2)MVD值判定標(biāo)準(zhǔn)∶腫瘤組織及其鄰近間質(zhì)內(nèi),胞膜或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇即被認(rèn)為是單個(gè)微血管。MVD的計(jì)數(shù)參照Weidner[2]方法,先在40倍光學(xué)顯微鏡下掃描,選取腫瘤組織內(nèi)微血管高度密集區(qū),即“熱點(diǎn)”,然后在200倍光鏡下計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)的微血管數(shù)目,記錄3個(gè)視野中的微血管數(shù)目并取其平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,Ki-67以(+)或(-)表示,不同病理分級(jí)和臨床分期之間比較采用 χ2檢驗(yàn)；MVD值以(±s)表示,不同病理分級(jí)和臨床分期之間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；Ki-67與MVD之間的相關(guān)性分析采用Simple Factorial過程進(jìn)行方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 Ki-67和MVD的表達(dá) 正常膀胱黏膜中Ki-67較少表達(dá),MVD明顯較低,與膀胱癌組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01和P＜0.05),詳見表1。

表1 膀胱癌組與對(duì)照組膀胱黏膜組織Ki-67及MVD比較

2.2 Ki-67和MVD與膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期的關(guān)系 Ki-67和MVD隨著膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期的升高而增加。MVD在腫瘤不同分級(jí)、分期之間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)在G1與G2、G3相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),但與臨床分期無關(guān)(P＞0.05),詳見表2。

表2 Ki-67和MVD與膀胱癌病理分級(jí)、臨床分期的關(guān)系

2.3 Ki-67、MVD與復(fù)發(fā)性膀胱癌的關(guān)系 MVD在初發(fā)和復(fù)發(fā)膀胱癌患者中,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而Ki-67無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),詳見表3。

2.4 膀胱癌組織Ki-67與MVD之間的關(guān)系見表4∶膀胱癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)組MVD明顯高于Ki-67陰性表達(dá)組(P＜0.05),Ki-67弱陽(yáng)性表達(dá)組的MVD明顯低于強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組(P＜0.05),Ki-67與MVD之間有明顯相關(guān)性(F=66.320,P＜0.01),隨著Ki-67表達(dá)強(qiáng)度增加,MVD值增高。

表3 Ki-67和MVD與初、復(fù)發(fā)膀胱癌的關(guān)系

表4 膀胱癌組織Ki-67與MVD之間的關(guān)系

2.5 隨訪 30例隨訪18～38個(gè)月,平均27.4個(gè)月,Ki-67、MVD與預(yù)后的關(guān)系見表3,術(shù)后5例(16.67%)復(fù)發(fā)。MVD與預(yù)后有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組復(fù)發(fā)率(33.33%)高于弱陽(yáng)性表達(dá)組(14.29%)。

3 討 論

研究發(fā)現(xiàn),腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管的形成。膀胱癌是一種血管豐富的惡性腫瘤,其生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等與腫瘤新生血管生成密切相關(guān)[3_4]。細(xì)胞增殖失調(diào)和細(xì)胞凋亡障礙是腫瘤惡性增生發(fā)生、發(fā)展的重要原因,細(xì)胞增殖狀況是預(yù)測(cè)膀胱癌發(fā)展及預(yù)后的重要指標(biāo)。

3.1 MVD與膀胱癌生物學(xué)行為的關(guān)系 血管生成強(qiáng)度,即組織切片中MVD,是評(píng)價(jià)腫瘤微血管形成程度的指標(biāo),MVD與膀胱癌臨床分期、病理分級(jí)以及復(fù)發(fā)有關(guān)[5],不僅可定量地反映出腫瘤的血管生長(zhǎng)情況,而且一定程度上可作為預(yù)測(cè)腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和判斷預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。

本組結(jié)果顯示,膀胱癌組織與正常膀胱黏膜之間,MVD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),并且隨著膀胱癌的病理分級(jí)、臨床分期的增高而呈上升趨勢(shì),MVD在腫瘤不同分級(jí)、分期之間比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),在復(fù)發(fā)膀胱癌組織中,MVD明顯升高,且高M(jìn)VD組的復(fù)發(fā)率明顯高于低MVD組,MVD越高,預(yù)后越差,提示MVD可作為判斷膀胱癌惡性程度的參數(shù),測(cè)定MVD,有助于判斷患者腫瘤復(fù)發(fā)的高危性和預(yù)后。

3.2 Ki-67與膀胱癌生物學(xué)行為的關(guān)系 腫瘤增殖活性的檢測(cè)對(duì)于判斷腫瘤的惡性程度、評(píng)估預(yù)后及選擇適當(dāng)?shù)闹委煷胧┮饬x重大。Ki-67是增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原,表達(dá)情況不僅能客觀反映膀胱癌的增殖活性,并能估計(jì)腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移潛能。Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤病理分級(jí)、臨床分期關(guān)系密切,陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度隨著腫瘤分化程度的降低而增高,表達(dá)越高,腫瘤增生活躍,復(fù)發(fā)的可能性越高[6]。因此檢測(cè)Ki-67在腫瘤中的表達(dá)強(qiáng)度,可以評(píng)估腫瘤細(xì)胞的生物活性并提供腫瘤演變的信息,作為判斷膀胱癌惡性程度和預(yù)后的重要參數(shù)[7]。

本組結(jié)果顯示,30例膀胱癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率為90.33%,正常膀胱黏膜的陽(yáng)性表達(dá)率僅為15%,兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。表達(dá)程度隨著腫瘤的病理分級(jí)、臨床分期的增高而增加,尤其是強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者,在G1與G2、G1與G3之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),Ki-67強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)者的預(yù)后差于陰性表達(dá)者。

3.3 Ki-67和MVD的關(guān)系 血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和腫瘤微血管形成使MVD增高,后者促進(jìn)了膀胱癌細(xì)胞的增殖活性,體現(xiàn)出Ki-67的相應(yīng)增加[8]。本組結(jié)果還提示,膀胱癌組織中Ki-67陽(yáng)性表達(dá)組MVD明顯高于陰性表達(dá)組(P＜0.05),Ki-67與MVD之間有明顯相關(guān)性(P＜0.01)。而比較兩者在膀胱癌組織中的結(jié)果顯示,在不同病理分級(jí)、臨床分期之間,以及在初發(fā)和復(fù)發(fā)膀胱癌組織中,MVD均能顯現(xiàn)出顯著性差別,而Ki-67只在腫瘤不同病理分級(jí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示MVD檢測(cè)的敏感性相對(duì)較高,對(duì)惡性程度的分辨較為細(xì)膩。

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