參七粉對動脈粥樣硬化家兔血脂代謝及血管內(nèi)皮功能的影響

劉月玲 朱秋玲

廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510150

通常中醫(yī)將人參作為補氣強壯藥，而將三七作為活血化瘀止血藥來使用。近年來，對人參與三七的研究越來越廣，如秦鑒等[1-3]研究表明人參三七煎劑（紅參和三七比例為1∶1）對大鼠缺血再灌注心肌損傷具有保護(hù)作用，參七湯可顯著降低缺血心肌內(nèi)皮素的濃度 ；鄭穎等[4]報道人參與三七兩藥均能顯著改善急性血瘀模型動物血液流變性及微循環(huán)，延長凝血酶原時間和凝血酶凝結(jié)時間；三七對慢性炎癥有顯著抑制作用。無論是參七湯還是人參三七煎劑都少不了煎煮的工序，本實驗是用參七粉（直徑為10 μm以下的超細(xì)粉）來研究其對動脈粥樣硬化（AS）模型家兔血脂代謝和血管內(nèi)皮功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑和藥品 膽固醇，天津市大茂化學(xué)試劑廠；豬油自煉；血清脂質(zhì)測定試劑盒（TC、TG、LDL-C 、HLD-C）由澳斯邦生物工程有限公司生產(chǎn)；ET、TXB2、6-K-PGF1α試劑盒均購自解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所；參七粉：由生三七粉和紅參粉以1∶1混合組成，粒徑在10 μm以下占95%，由廣州市白云區(qū)藥品公司提供；血脂康（北京北大維信生物科技有限公司生產(chǎn)，批號：20081107）。高脂飼料配方[5-6]：1.5%膽固醇，5.0%豬油，93.5%基礎(chǔ)飼料。

1.1.2 動物和儀器 健康新西蘭白兔40只，雌雄各半，體重2.0～2.5 kg，4個月齡，由廣東藥學(xué)院動物藥理實驗室提供。LD-R4-84C冷凍離心機（法國制造），日立717OA型全自動生化分析儀，SN-682型放射免疫γ-計數(shù)器 （上海核輻射光電儀器有限公司），F(xiàn)T-646A微機單頭放免儀（北京核儀器儀器廠），奧林帕斯CH30光學(xué)顯微鏡。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組與造模 所有實驗動物在實驗前均以普通飼料適應(yīng)性飼喂1周，排除飲食異常者，在穩(wěn)定其血脂水平及代謝狀況后，隨機分為4組，即對照組、模型組、參七粉組和血脂康組，每組10只，除對照組給予普通飼料外，其余各組每天上午均先給予高脂飼料50 g/（kg·d），待食完后晚上再補充普通顆粒飼料。同時，參七粉組給參七粉2.0 g/（kg·d）飼喂，血脂康組給血脂康 0.5 g/（kg·d）飼喂 （均將藥物拌入少量的高脂飼料內(nèi)食入后，再投入剩余的高脂飼料）。動物單籠飼養(yǎng)，飲水不限，自由攝食，4組平行試驗8周。

1.2.2 TC、TG、LDL-C、HDL-C的測定 各組試驗動物分別于實驗前及實驗第8周末，禁食（不禁水）12 h，經(jīng)耳緣靜脈取血，分離血清，用酶法測定血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）水平，采用日立717OA型全自動生化分析儀檢測。各組血脂的測定結(jié)果見表1。

1.2.3 TXB2、6-K-PGF1α、ET的測定 各組試驗動物分別于實驗第8周末，禁食（不禁水）12 h，經(jīng)耳緣靜脈取血2.5 mL，加 2%EDTA抗凝，4℃，3000 r/min離心10 min，取血漿-20℃保存待測。 TXB2、6-K-PGF1α、ET 均用放射免疫法測定，具體測定步驟按放免試劑盒說明書操作。各指標(biāo)測定見表 2。

1.2.4 病理標(biāo)本的制作及主動脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)觀察 于實驗第8周末采血完畢后將所有實驗動物以氣栓法處死。打開胸腔，立即將主動脈根部至髂動脈分叉處的整條動脈取出，剝離外膜結(jié)締組織，縱向剖開，用生理鹽水洗去血跡，進(jìn)行大體形態(tài)觀察。取升主動脈至主動脈弓部組織，用10%甲醛固定后石蠟包埋，制備橫切面石蠟切片，厚度為4 μm，用蘇木精-伊紅（HE）染色，常規(guī)制作光鏡標(biāo)本，觀察主動脈壁血管內(nèi)皮細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)的改變。

1.3 AS斑塊判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]

肉眼觀察為點狀或條紋狀黃色不隆起或微隆起于內(nèi)膜的病灶，常見于主動脈后壁及其分支出口處。光鏡下病灶處的內(nèi)膜下有大量泡沫細(xì)胞聚集。泡沫細(xì)胞體積大，圓形或橢圓形，胞質(zhì)內(nèi)含有大量小空泡。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 15.0對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 參七粉對血脂的影響

結(jié)果顯示，實驗前各組間動物的血脂水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗后第8周末，與對照組比較，模型組、參七粉組和血脂康組血清TC、TG、LDL-C明顯高于對照組 （P<0.05或P<0.01）；與模型組比較，參七粉組和血脂康組血清TC、TG、LDL-C明顯低于模型組（P<0.05）；HDL-C各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組第8周末血脂的測定結(jié)果（，mmol/L）

表1 各組第8周末血脂的測定結(jié)果（，mmol/L）

注：與對照組比較，﹟P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05

組別 TC TG HDL-C LDL-C對照組模型組參七粉組血脂康組1.49±0.2523.10±4.55##14.30±3.35##▲13.58±3.15##▲1.16±0.313.30±0.56#1.93±0.38#▲1.75±0.35#▲0.58±0.100.48±0.120.68±0.150.50±0.110.65±0.1519.85±4.90##13.58±3.85##▲11.88±3.58##▲

2.2 參七粉對 TXB2、6-K-PGF1α、ET 的影響

實驗前各組間 TXB2、6-K-PGF1α、ET 差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗后第8周末，模型組血漿ET、TXB2含量較對照組顯著升高 （P<0.05 或 P<0.01），6-K-PGF1α/TXB2值較對照組顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，參七粉組和血脂康組ET、TXB2含量明顯低于模型組 （P<0.05）；6-K-PGF1α/TXB2值則顯著高于模型組（P<0.05）；各組間6-K-PGF1α差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 各組第 8 周末 ET、6-K-PGF1α、TXB2的測定結(jié)果（）

表2 各組第 8 周末 ET、6-K-PGF1α、TXB2的測定結(jié)果（）

注：與對照組比較，﹟P<0.05，##P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05

組別 ET（ng/L） 6-K-PGF1α（ng/L） TXB2（ng/L） 6-K-PGF1α/TXB2對照組模型組參七粉組血脂康組172.55±28.85347.30±35.30#255.75±30.55#▲246.85±25.45#▲113.30±12.10101.85±10.53108.68±11.75106.70±11.3088.10±8.65295.32±25.35##▲173.53±22.63#▲180.45±24.56#▲1.27±0.280.33±0.15##0.64±0.20#▲0.61±0.18#▲

2.3 主動脈內(nèi)膜組織形態(tài)學(xué)改變

肉眼觀察：對照組主動脈血管壁薄而有彈性，內(nèi)膜光滑，色澤正常，無脂質(zhì)條紋形成；模型組主動脈病變最為嚴(yán)重，內(nèi)膜表面粗糙，可見大量點狀或條紋狀黃色微隆起于內(nèi)膜的脂質(zhì)斑塊，可見AS斑塊形成，為灰白色，相互融合成片狀，明顯隆起突向管腔，表面粗糙不平，管腔明顯狹窄；參七粉組和血脂康組表現(xiàn)為不同程度降低AS病變，斑塊減小。光鏡下觀察對照組血管內(nèi)膜平坦，結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮細(xì)胞清晰，胞質(zhì)中未見異常顆粒，肌纖維排列整齊，中膜平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則整齊；模型組見粥樣硬化斑塊形成，血管內(nèi)膜有大量泡沫細(xì)胞聚集，內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，肌纖維排列紊亂并有斷裂現(xiàn)象，局部內(nèi)皮壞死脫落，表面可見有小火山噴口樣缺損；參七粉組和血脂康組顯示血管內(nèi)膜層的泡沫細(xì)胞比模型組少，血管內(nèi)皮細(xì)胞清晰，其間有少量膠原纖維分布，肌纖維排列整齊。見圖1。

3 討論

圖1 各組主動脈內(nèi)膜組織的形態(tài)學(xué)改變

現(xiàn)已公認(rèn)高脂血癥是AS發(fā)生的重要因素之一，其中TC、LDL-C被視為致AS的危害因子。現(xiàn)已知血清TC、TG和LDL水平與AS形成呈正相關(guān)，HDL水平與AS形成呈負(fù)相關(guān)[8]。本實驗結(jié)果表明，參七粉能使高脂血癥家兔的TC、TG、LDL-C明顯降低，光鏡下觀察可見：預(yù)防性服用參七粉能顯著減輕高脂模型家兔主動脈血管的AS斑塊，提示參七粉能調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血脂水平，具有防治血脂紊亂和抗AS的作用。

近年來隨著對血管內(nèi)皮細(xì)胞生物功能認(rèn)識的不斷深入，普遍認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞損傷所致的內(nèi)皮功能障礙是AS形成的早期表現(xiàn)。已知血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種血管活性物質(zhì)，參與動脈壁細(xì)胞生物功能的調(diào)節(jié)。其中，內(nèi)皮素（ET）是一種重要的血管內(nèi)皮損傷因子，是肽類血管收縮劑，具有強大的收縮血管和促進(jìn)血管平滑肌的增殖作用，參與動脈粥樣硬化斑塊的形成[9]。血栓素（TXA2）是另一具有強烈刺激血管收縮和促使血小板聚集的活性物質(zhì)，并能刺激血管細(xì)胞增殖，促進(jìn)動脈粥樣硬化形成。前列環(huán)素（PGI2）為強力的血管擴張物，具有對抗TXA2的作用，抑制血小板聚集，在心血管疾病中具有保護(hù)作用。TXA2與PGI2呈拮抗關(guān)系，兩者維持著平衡狀態(tài)，凡傾向于血栓形成的因素均與TXA2生成增多或PGI2減少有關(guān)，二者含量變化在AS形成發(fā)展中起到重要作用[7]。TXA2與PGI2極不穩(wěn)定，在血中的半衰期很短，不易直接測得，因此目前一般是通過測定兩者的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物TXB2、6-K-PGF1α的含量來了解TXA2與PGI2的變化。本實驗結(jié)果表明，參七粉能顯著降低高脂模型家兔血漿ET、TXB2水平，提高6-酮-PGF1α/TXB2比值，對預(yù)防AS的發(fā)生及防止體內(nèi)血栓形成起著重要作用。

綜上所述，參七粉產(chǎn)生抗AS作用的機制可能為：①降低血清TC和LDL-C水平，延緩AS斑塊的形成；②調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞生成和釋放ET及TXA2，提高6-酮-PGF1α/TXB2比值，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，防止體內(nèi)血栓形成，產(chǎn)生抗AS的作用。AS的發(fā)生機制是十分復(fù)雜的，牽涉到許多因素的相互作用和制約，對參七粉更多的藥理作用有待進(jìn)一步的研究。

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