復方美托洛爾-氨氯地平雙層片體外釋放度方法研究

沈淑媛 吳 赟 王成港 王杏林

1.天津中醫(yī)藥大學，天津 300193；2.天津藥物研究院 釋藥技術(shù)與藥代動力學國家重點實驗室，天津 300193

酒石酸美托洛爾為水溶性β受體阻滯劑，口服1.5 h血藥濃度達峰值，半衰期3～5 h，為減少服藥次數(shù)可制成緩釋制劑[1]；苯磺酸氨氯地平為二氫吡啶類鈣拮抗劑，口服不受食物影響、生物利用度高，6～12 h達到峰濃度，血漿半衰期長（36～45 h）[2]。二者通過不同的作用途徑，達到了相同的降血壓效果。兩者聯(lián)合不僅能協(xié)同降低血壓，而且可抑制由于降壓而引起的反射性心率增快，同時可以減少對心、腦、腎等靶器官的毒副作用。由阿斯利康公司研發(fā)的復方琥珀酸美托洛爾氨氯地平緩釋片（SelomaxTM）在國外已上市，而國內(nèi)尚無此類產(chǎn)品上市。筆者對復方酒石酸美托洛爾-苯磺酸氨氯地平雙層片進行了研究開發(fā)，本文主要考察了自制美托洛爾-氨氯地平雙層片的體外釋放度。

1 材料與試藥

1.1 儀器

紫外可見分光光度計UV2550（日本島津），安捷倫高效液相色譜儀1200（美國安捷倫公司），AB104N型電子天平（瑞士 METTLER TOLEDO），智能溶出試驗儀（ZRS-8G）（天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 藥品

酒石酸美托洛爾（廣州漢方現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司，批號：00239），苯磺酸氨氯地平（常州亞邦制藥有限公司，批號：M100401），磷酸二氫鉀（天津博迪化工股份有限公司，批號：20101201），鹽酸（天津市凱信化學有限公司），乙腈（天津市康科德科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 材料的制備

2.1.1 緩釋層的制備

將酒石酸美托洛爾與新型預膠化淀粉緩釋骨架材料SWELSTARTM MX-1、乳糖等輔料混勻，加入適量黏合劑（10%PVP及乙醇溶液）制軟材，過30目篩制粒，在60℃烤箱中干燥0.5 h，取出，過30目篩整粒，加入適量硬脂酸鎂，混勻即得。

2.1.2 速釋層的制備

根據(jù)預試驗知速釋層可以采用粉末直接壓片法制備，先將各輔料按處方量混合均勻，再將苯磺酸氨氯地平按等量遞加法與輔料混合，即得。

2.1.3 雙層片的制備

根據(jù)處方設(shè)計要求將兩種顆粒按一定比例分層壓片。

2.2 釋放度方法考察

2.2.1 吸收波長的選擇

分別用0.01 mol/L的鹽酸溶液配制50 μg/mL的美托洛爾溶液、20 μg/mL的氨氯地平溶液及空白輔料溶液，在200～400 nm范圍內(nèi)進行全波長掃描。結(jié)果酒石酸美托洛爾在274 nm處有最大吸收波長，而苯磺酸氨氯地平在237 nm處有較高吸收。空白輔料在兩個波長下均無干擾吸收?？疾煸趦蓚€不同的波長下主藥的檢測，在237 nm波長條件下，基線平穩(wěn)，兩個主藥互不影響，因此選擇237 nm為兩者的檢測波長。

2.2.2 釋放度測定方法

采用高效液相色譜（HPLC）法測定。色譜條件具體為流動相：0.02 mmol/L 磷酸二氫鉀（pH 3.0）-乙腈=65∶35，十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（25 cm），流速：1 mL/min，檢測波長：237 nm。配制適宜濃度的樣品和對照品，進樣20 μL，記錄色譜圖及主峰峰面積。用外標法計算兩個主藥釋放度。

2.2.3 專屬性

按處方量稱取本品中除主藥外的其他原輔料置100 mL量瓶中，加甲醇溶解，過濾，在237 nm下進樣。稱取相當于含美托洛爾50 mg、氨氯地平5 mg的片粉于50 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋，超聲溶解，移取1 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，過濾，分別進樣。結(jié)果表明空白輔料不干擾主藥的測定。酒石酸美托洛爾的理論塔板數(shù)為2902，苯磺酸氨氯地平的理論塔板數(shù)為2392，兩者的分離度為2.93。

2.2.4 線性關(guān)系

2.2.4.1 美托洛爾和氨氯地平對照品溶液的制備 用0.01 mol/L鹽酸分別配制濃度為120 μg/mL和15 μg/mL的美托洛爾和氨氯地平對照品儲備液。

2.2.4.2 美托洛爾標準溶液的制備 分別精密吸取1、2、4、6、8 mL美托洛爾對照品儲備液于10 mL容量瓶中，加0.01 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，得濃度為 12、24、48、72、96 μg/mL的美托洛爾標準溶液。

2.2.4.3 氨氯地平標準溶液的制備 分別精密吸取1、2、4、6、8 mL苯磺酸氨氯地平對照品儲備液于10 mL容量瓶中，0.01 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，得濃度為1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 μg/mL 的氨氯地平標準溶液。

分別將上述系列標準溶液、對照品儲備液進樣，記錄峰面積，以峰面積對濃度做直線回歸[3]，得酒石酸美托洛爾和苯磺酸氨氯地平在0.01 mol/L鹽酸溶液中的回歸方程分別為A=19562C+6951（r=0.9999）和 A=2932C+678（r=0.9998）。結(jié)果表明酒石酸美托洛爾在12～120 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，苯磺酸氨氯地平在1.5～15.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗

稱取復方美托洛爾-氨氯地平緩釋雙層片粉，加0.01 mol/L鹽酸溶液溶解稀釋定容，配成約含美托洛爾100 μg/mL、氨氯地平10 μg/mL的供試品溶液。重復進樣6次，分別測定兩個主藥峰面積，計算RSD。美托洛爾的RSD為0.68%、氨氯地平的RSD為0.72%，結(jié)果表明兩者精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗

稱取復方美托洛爾-氨氯地平緩釋雙層片粉適量，加0.01 mol/L的鹽酸溶解并過濾。配成約含美托洛爾100 μg/mL、氨氯地平 10 μg/mL 的供試品溶液。 分別于 0、3、6、9、12 h 進樣，測定峰面積，得酒石酸美托洛爾的RSD為0.92%，苯磺酸氨氯地平的RSD為1.3%。結(jié)果表明，酒石酸美托洛爾及苯磺酸氨氯地平在0.01 mol/L的鹽酸中12 h均穩(wěn)定。

2.2.7 回收率試驗

2.2.7.1 酒石酸美托洛爾回收率試驗 用0.01 mol/L鹽酸溶液分別配制含標示量美托洛爾80%、100%、120%的9個樣品，進樣，計算回收率。酒石酸美托洛爾的回收率平均值99.92%，RSD<2%，回收率符合要求。

2.2.7.2 氨氯地平回收率試驗 用0.01 mol/L的鹽酸溶液配制含標示量氨氯地平80%、100%、120%的9個樣品，進樣，計算回收率。氨氯地平的回收率平均值100.23%，RSD<2%，回收率符合要求。

2.2.8 濾膜干擾試驗

專屬性項下樣品溶液，分別過濾 5、10、15、20、25、30 mL續(xù)濾液20 μL分別進樣檢查。試驗結(jié)果表明，樣品經(jīng)過濾膜過濾后，不干擾溶出度的測定結(jié)果。

2.2.9 雙層片釋放度的測定

雙層片釋放度的測定采用《中國藥典》2010年版二部附錄X D第一法。按照《中國藥典》2010年版二部附錄XIX D緩釋、控釋和遲釋制劑指導原則，轉(zhuǎn)速75 r/min，溫度37.5℃，溶出介質(zhì)0.01 mol/L的鹽酸500 mL。定時取樣5 mL，濾過，同時補加相應的溶出介質(zhì)5 mL；取續(xù)濾液20 μL注入液相色譜儀，按外標法分別計算兩個主藥的累積釋放百分率，結(jié)果見圖 1、2。

圖1 苯磺酸氨氯地平溶出度曲線

圖2 酒石酸美托洛爾累積釋放度曲線

2.3 釋放度方法的研究

目前國內(nèi)尚無此復方制劑上市，考慮到含有兩個主藥，為減少誤差，首先參考了FDA、日本厚生省等對苯磺酸氨氯地平的溶出方法規(guī)定，確定速釋層溶出度的考察方法：槳法，75 r/min，溶出介質(zhì)為0.01 mol/L的鹽酸。下面從這三個方面考察酒石酸美托洛爾的釋放，判斷是否可以用同一個方法測定。

2.3.1 溶出方法的選擇

分別使用槳法、籃法測定酒石酸美托洛爾的釋放度[4]，結(jié)果見圖3。由圖3可知，溶出方法對釋放無顯著影響，為了便于觀察緩釋層的溶蝕情況，選擇槳法。

圖3 不同溶出方法下酒石酸美托洛爾釋放度曲線

2.3.2 轉(zhuǎn)速選擇

分別在100、75、50 r/min條件下測定雙層片緩釋層的釋放度結(jié)果見圖4。

由圖4可以看出50 r/min條件下釋放較慢，75 r/min及100 r/min條件對釋放度的影響不大，考慮到速釋層釋放條件，選擇轉(zhuǎn)速75 r/min。

圖4 不同轉(zhuǎn)速下酒石酸美托洛爾的溶出度曲線

2.3.3 溶出介質(zhì)選擇

分別考察純水、0.01 mol/L鹽酸、pH 6.8的磷酸鹽緩沖液這三種溶出介質(zhì)[5]，按照“2.2.9”項下測定方法測定酒石酸美托洛爾的釋放度，結(jié)果見圖5。

由圖5可以看出三種溶出介質(zhì)對緩釋層釋放影響不大，考慮到苯磺酸氨氯地平微溶于水，因此選擇0.01 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì)。

圖5 不同釋放介質(zhì)中酒石酸美托洛爾的釋放度曲線

綜合以上結(jié)論，兩個主藥可選擇同一方法測定溶出度。

2.4 緩釋層釋藥動力學研究

目前評價緩、控釋制劑藥物釋放機制的模型主要有如下幾種：零級釋藥方程[6]：Q=Kt；一級釋藥方程[7]：ln（100-Q）=-kt；Higuchi平面擴散模式方程[8]：Q=Kt1/2；Ritger-Peppas 方程[9]：lnQ=nlnt+k。式中Q為累積釋藥百分率，K為釋放速率常數(shù)，t為時間，n為擴散指數(shù)?？疾?5 min～12 h之間酒石酸美托洛爾的釋放度。

表1 復方雙層片中緩釋部分釋藥曲線的模型擬合（n=6）

擬合時以相關(guān)系數(shù)（r）越大，表明擬合效果越好。由此判斷酒石酸美托洛爾緩釋層體外釋藥機制接近零級動力學方程。

3 討論

對于復方緩釋片的釋放度測定方法，國內(nèi)尚未見報道，通過參考相關(guān)資料首先確定了測定氨氯地平速釋層溶出度的方法，接著考察了不同條件下酒石酸美托洛爾的釋放度，并建立了測定復方雙層片的方法。酒石酸美托洛爾為水易溶藥物，在水中溶解度 >700 mg/mL，故在選擇釋放介質(zhì)時，如釋放介質(zhì)能滿足苯磺酸氨氯地平漏槽條件的話，酒石酸美托洛爾也滿足漏槽條件。

自制片中加入了一種親水凝膠骨架材料，是由旭化成化學公司和三和淀粉公司共同開發(fā)的一種新型預膠化淀粉，商品名為SWELSTARTM MX-1，通過加入親水性物質(zhì)聚乙二醇（PEG 6000）使其具有可控制的凝膠強度，推進水分的滲透作用，增加了MX-1早期的吸水性，減少其溶蝕，從而控制藥物以零級速率釋放。

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