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    Maspin在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與Caspase-3的關(guān)系

    2012-07-21 06:52:42蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬常州腫瘤醫(yī)院普外科常州213001
    陜西醫(yī)學(xué)雜志 2012年10期
    關(guān)鍵詞:組織化學(xué)肝細(xì)胞免疫組化

    蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬常州腫瘤醫(yī)院普外科(常州213001) 張 駿

    原發(fā)性肝癌(HCC)是最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率、病死率明顯增加。Maspin是1994年Zou等[1]用消減雜交的方法在比較正常乳腺與乳腺癌組織時發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因,是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員之一。Maspin在乳腺、前列腺、角膜、卵巢、小腸等人體器官組織中有高水平表達(dá),而在相應(yīng)的惡性腫瘤中表達(dá)下調(diào)或不表達(dá),提示它可作為腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后評估的一個重要指標(biāo)。我們采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測了50例肝癌組織及癌旁肝組織中Maspin的表達(dá)并分析其與Caspase-3的關(guān)系,旨在探討Maspin在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用及可能機(jī)制。

    材料與方法

    1 一般資料 隨機(jī)選取2004年1月至2008年8月間在蘇州大學(xué)附屬第三醫(yī)院肝膽外科,原發(fā)性肝癌行腫瘤切除的50例病例,術(shù)前均未行放化療、肝動脈栓塞及免疫治療等。其中男42例,女8例,年齡38~81歲,平均53.10±10.96歲。同時取距離上述肝癌腫塊2c m以上的癌旁肝組織標(biāo)本50例作為對照。

    2 方 法 免疫組織化學(xué)采取Envision T M二步法。鼠抗人Maspin免疫組化單克隆抗體(濃縮型)購自英國Neo mar ker公司,配制成工作液濃度為1∶50;兔抗人Caspase-3免疫組化多克隆抗體(即用型)購自北京中杉生物公司。石蠟包埋的組織制成4μm厚切片。免疫組織化學(xué)染色步驟按試劑盒說明進(jìn)行,Maspin單克隆抗體用人乳腺組織標(biāo)本做陽性對照,Caspase-3多克隆抗體用人扁桃體組織標(biāo)本作陽性對照,以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

    3 免疫組化結(jié)果判定 Maspin、Caspase-3以胞漿、胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性細(xì)胞。每例切片隨機(jī)選取5個高倍視野進(jìn)行結(jié)果判定。按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比綜合計分。

    4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 Maspin、Caspase-3在肝癌和癌旁肝組織中的表達(dá) 見表1。肝癌組織中Maspin的陽性率28%(14/50),與Caspase-3的陽性率36%(18/50),均低于相應(yīng)癌旁肝組織,分別為66%(33/50)和76%(38/50)。二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    表1 肝癌與癌旁組織中Maspin、Caspase-3的蛋白表達(dá)比較

    2 Maspin、Caspase-3的表達(dá)與肝癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表2。表2顯示Maspin蛋白表達(dá)與Edmonson病理分級、有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移有關(guān);Caspase-3的表達(dá)與Ed monson病理分級、有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移、有無包膜有關(guān)。均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

    表2 Maspin、Caspase-3蛋白表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系

    3 肝癌中Maspin的表達(dá)與Caspase-3的關(guān)系見表3。肝癌組織中,Maspin的表達(dá)與Caspase-3呈正相關(guān) (r=0.553,P<0.01)。

    表3 肝細(xì)胞癌中Maspin與Caspase-3的關(guān)系

    討 論

    有臨床研究表明Maspin與腫瘤抑制明顯相關(guān),原發(fā)乳腺癌組織中Maspin蛋白含量較自體對側(cè)正常組織明顯減少[2];口腔鱗癌組織中Maspin蛋白高表達(dá)者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯降低,患者的生存率也相對較高[3-4];對乳腺癌和前列腺癌研究發(fā)現(xiàn)從原位癌到浸潤癌再到淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌,Maspin蛋白含量依次減少[5]。本研究表明,肝癌組織中Maspin蛋白陽性表達(dá)率低于癌旁組織,而且與Ed monson病理分級、有無肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移有關(guān),均具有統(tǒng)計學(xué)差異。這就說明了Maspin在人肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移過程中起一定作用。

    細(xì)胞凋亡在肝癌的發(fā)生、發(fā)展中起了較為重要的作用。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)是一組與凋亡密切相關(guān)的蛋白水解酶。Caspase-3在細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起核心作用,是家族中最重要的成員。本研究證明Caspase-3在肝癌組織中較癌旁組織中的表達(dá)降低,和Maspin在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中存在正相關(guān)(r=0.553,P=0.000)。與之相符,Wang等[6]在對正常胃粘膜、腸化生胃粘膜和胃癌的分析中發(fā)現(xiàn) Maspin和Caspase-3的表達(dá)呈正相關(guān)。我們推測,Maspin和Caspase-3在肝細(xì)胞癌中的發(fā)生過程中作用密切相關(guān),且呈協(xié)同作用。

    綜上所述,Maspin在肝細(xì)胞癌中表達(dá)下調(diào),Maspin可能在抑制肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中有重要作用。肝細(xì)胞癌發(fā)生過程中Maspin低表達(dá)導(dǎo)致Caspase-3活性降低,細(xì)胞凋亡受抑制,從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生,Maspin是腫瘤凋亡治療的調(diào)節(jié)劑。Maspin通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋來抑制肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移。

    [1]Zou Z,Anisowicz A,Hendrix MJ,et al.Maspin,a ser pin with tu mor-suppressing activity in hu man mammary epithelial cells[J].Science,1994,263(5146):526-529.

    [2]Maass N,Nagasaki K,Jonat W,et al.Expression of t u mor suppressor gene maspin in hu man breast cancer t u mor[J].ASCO Pr oc,1999,18(10):2452-2454.

    [3]Yasunlatsu R,Nakashi ma T,Hirakawa N,et al.Maspin expression in stage I and II oral tongue squamous cell carcino ma[J].Head Neck,2001,23(11):962-966.

    [4]Xia W,Lau YK,Hu MC,et al.High t u mour maspin expression is associated with i mpr oved survival of patients with oral squamous cell carcino ma[J].Oncogene,2000,19(20):2398-2403.

    [5]Maass N,Nagasaki K,Ziebart M,et al.Expression and regulation of t u mor suppressor gene maspin in breast cancer[J].Clin Breast Caneer,2002,3(4):281-287.

    [6]Wang MC,Yang Y M,LI XH,et al.Maspin expression and its clinic pathological significane in tu morigenesis and progression of gastric cancer[J].World J Gastronterol,2004,10(5):634-637.

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