微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的性能評(píng)價(jià)

李 囡，金燕萍，閻 超

（中日友好醫(yī)院 檢驗(yàn)科，北京 100029）

目前，大多醫(yī)院將梅毒螺旋體抗體檢測(cè)作為術(shù)前常規(guī)檢查和產(chǎn)前篩查項(xiàng)目，這使得傳統(tǒng)的血清學(xué)手工實(shí)驗(yàn)難以滿足日益增長(zhǎng)的樣本量需要。目前已有多種全自動(dòng)免疫分析儀具備大量檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的能力，本文著重對(duì)Architect i2000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體的靈敏度、精密度、攜帶污染率等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集130例血清為2011年10月～2012年8月間我院門(mén)診和住院患者，均行TPPA和CMIA檢測(cè)。

1.2 儀器和試劑

梅毒螺旋體特異性抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）試劑盒 （由日本富士株氏會(huì)社提供）；Architect i2000SR型微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（CMIA）及其配套Syphilis TP診斷試劑（由美國(guó)雅培提供）。

2 方法

（1）明膠顆粒凝集法檢測(cè)：嚴(yán)格按照TPPA試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)130例臨床血清進(jìn)行梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)。儀器法檢測(cè)：用i2000重復(fù)檢測(cè)130例臨床樣本，S/Co值≥1為陽(yáng)性，＜1為陰性。（2）比較儀器法與TPPA的靈敏度：將弱陽(yáng)性混合血清進(jìn)行4個(gè)稀釋度的倍比稀釋，對(duì)每個(gè)稀釋度的血清分別用CMIA法和TPPA試劑盒測(cè)定10次，比較兩者的靈敏度。（3）精密度：將陽(yáng)性混合血清制成3個(gè)稀釋水平的樣本，作為高值、中值、和低值血清。3個(gè)水平的樣本每天測(cè)定3次，（每次測(cè)定間隔不得少于2h），每次測(cè)定均做3份，連續(xù)測(cè)定3d。對(duì)所得數(shù)據(jù)計(jì)算批間、日間及總變異。（4）攜帶污染率：選取強(qiáng)陽(yáng)性血清為高值標(biāo)本，均分為3管，標(biāo)注為H1、H2、H3，選取陰性血清為低值標(biāo)本，均分為 3管，標(biāo)注為 L1、L2、L3，將低高值血清相互交叉排放，連續(xù)測(cè)定6管，利用以下公式計(jì)算攜帶污染率，攜帶污染率＝（L1－L3）/（H3－L3）×100%。 （5）用 SPSS11.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。2種方法檢測(cè)結(jié)果的差異用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

（1）130例血清經(jīng)CMIA法檢測(cè)陽(yáng)性103例，陰性27例；TPPA法檢測(cè)陽(yáng)性102例，陰性28例，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不一致樣本3例（表1）。以TPPA法檢測(cè)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，CMIA的敏感度為99%（101/102），特異性為93%（26/28）。（2）CMIA法檢測(cè)弱陽(yáng)性混合血清從1:4稀釋度開(kāi)始為陰性（S/Co 0.85）；TPPA法從1:2稀釋度開(kāi)始為陰性。CMIA法靈敏度高于TPPA法。（3）經(jīng)重復(fù)性試驗(yàn)，CMIA法在3個(gè)不同水平測(cè)定值的批間和批內(nèi)變異系數(shù)均小于10%（表2）。（4）根據(jù)公式計(jì)算，攜帶污染率=（0.093-0.09）/（29.78-0.09）×100%=0.01%（表 3）。

表1 2種方法檢測(cè)結(jié)果比較

表2 CMIA的精密度檢測(cè)結(jié)果

表3 攜帶污染實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4 討論

目前，臨床實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒螺旋體感染的主要方法是血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，包括對(duì)梅毒螺旋體非特異性抗體和特異性抗體的檢測(cè)。常用的檢測(cè)非特異性抗體的實(shí)驗(yàn)包括甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片實(shí)驗(yàn)（RPR），檢測(cè)特異性抗體的實(shí)驗(yàn)包括明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（TPPA）、血凝實(shí)驗(yàn) （TPHA）和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) （TPELISA）[1]。由于前2種方法檢測(cè)的不是梅毒螺旋體的特異性抗體，有較高的假陽(yáng)性率和假陰性率，因此僅作為初篩實(shí)驗(yàn)。凝集法作為臨床確證實(shí)驗(yàn)又有手工操作較為繁瑣、肉眼判斷結(jié)果受人為因素干擾等缺陷[2～4]。TP-ELASA在大樣本量操作時(shí)又難于保證加樣及反應(yīng)時(shí)間的一致。

雅培Architect i2000SR全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析 （CMIA）是以梅毒螺旋體重組抗原TpN15、pN17和TpN47包被磁性微粒，待檢血清中如有相應(yīng)的抗體，則可與磁微粒上的抗原結(jié)合，再加入吖啶酯標(biāo)記的二抗以及激發(fā)液和預(yù)激發(fā)液。通過(guò)激發(fā)光的強(qiáng)度對(duì)血清中的特異性抗體進(jìn)行相對(duì)定量。

以上實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CMIA法具有很好的重復(fù)性和極低的攜帶污染率。與目前梅毒螺旋體特異性抗體的臨床確證實(shí)驗(yàn)比較，該法具有更高的靈敏度，結(jié)果判定更為客觀一致，適合大規(guī)模常規(guī)篩查。本文檢測(cè)的130例血清中，2種方法檢測(cè)一致的標(biāo)本為127例，一致率為98%。不一致樣本中，有1例為CMIA法檢測(cè)陰性，TPPA檢測(cè)弱陽(yáng)性。TPPA可能會(huì)在某些患有慢性疾病如SLE、糖尿病、肝硬化，及長(zhǎng)期使用免疫抑制劑的患者中出現(xiàn)假陽(yáng)性的結(jié)果[5]，由于該患者為我院皮膚科門(mén)診患者，未能進(jìn)行跟蹤隨訪。另外2例血清CMIA法檢測(cè)陽(yáng)性而TPPA陰性，這2例均來(lái)自本院住院患者，未被診斷為梅毒螺旋體感染。因此不排除CMIA法假陽(yáng)性的可能[2]。這2份血清的S/Co值均在1～2之間，因此在臨床應(yīng)用中，對(duì)于CMIA法檢測(cè)弱陽(yáng)性的血清，進(jìn)行TPPA的復(fù)檢是必要的。

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