子癇前期胎盤中Endoglin和轉(zhuǎn)化生長因子β1的表達(dá)及相關(guān)性研究

劉 金 ，梁義娟 ，薛會靈 ，趙 丹 ，呂麗娟

（1.河北大學(xué)附屬醫(yī)院 產(chǎn)科，河北保定 071000；2.保定市第一中心醫(yī)院 產(chǎn)科，河北保定 071000；3.保定市淶源縣婦幼保健院，保定 074300）

子癇前期是妊娠期特有的疾病，在妊娠期婦女中發(fā)生率約為5%，其嚴(yán)重的并發(fā)癥是孕產(chǎn)婦及圍生兒死亡的重要原因之一[1，2]，目前認(rèn)為滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤能力下降造成滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮壁過淺和螺旋動脈重塑障礙是子癇前期發(fā)生的主要機(jī)制。Endoglin是一種整合于細(xì)胞膜上的跨膜糖蛋白，是轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor β，TGFβ）受體家族的輔助蛋白質(zhì)，二者不僅與血管的發(fā)育及重塑有關(guān)，還與滋養(yǎng)細(xì)胞的分化及浸潤有關(guān)。本研究通過檢測子癇前期胎盤組織中Endoglin和TGFβ1的表達(dá)，探討二者在子癇前期發(fā)生發(fā)展中的作用及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2010年10月～2011年10月就診于河北大學(xué)附屬醫(yī)院的子癇前期患者40例作為病例組，年齡 22～31 歲（27.6±3.5 歲），孕周 34～41 周（37.5±1.5 周），診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》[3]，其中輕度子癇前期患者15例，重度子癇前期患者25例。另選擇同期住院分娩的健康孕婦35例作為正常對照組，年齡 20～33 歲（26.0±3.7 歲），孕周 37～42周（39.0±1.8周）。所有孕婦均為單胎妊娠，既往無慢性高血壓、糖尿病、腎炎、心臟病等內(nèi)科疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)本采集與試劑來源

胎盤一經(jīng)娩出，立刻于胎盤母體面取大小約1cm×1cm×1cm組織（無出血、壞死及梗死），0.9%鹽水沖凈后10%的福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片。TGFβ1兔抗人多克隆抗體及Endoglin鼠抗人CD105單克隆抗體均購自北京天恒博晟科技有限公司。

1.2.2 免疫組化檢測TGFβ1和Endoglin的表達(dá)

TGFβ1和Endoglin的染色表達(dá)操作按說明書進(jìn)行。結(jié)果判定：TGFβ1和Endoglin染色陽性為胞膜或胞質(zhì)中有棕黃色顆粒。結(jié)果應(yīng)用全自動圖像分析儀 （彩色圖像細(xì)胞免疫組化面積分析法），在同一條件下，對切片的TGFβ1和Endoglin進(jìn)行定量分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包。多組比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析F檢驗(yàn)，組間比較采用兩兩比較的q檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用簡單直線相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 胎盤組織中TGFβ1表達(dá)

TGFβ1陽性表達(dá)在胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞的胞膜和胞漿上。定量分析：輕度組與正常組比較無顯著性差異（P＞0.05）；重度組與正常組、輕度組比較均有顯著性差異（均P＜0.01），結(jié)果見表1。

表1 Endoglin和TGFβ1在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)情況

2.2 胎盤組織中Endoglin的表達(dá)

Endoglin陽性表達(dá)在胎盤的合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜上。定量分析：輕度組與正常組比較、重度組與正常組比較以及重度組和輕度組比較均存在顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01），結(jié)果見表 1。

Endoglin的表達(dá)水平與TGF β1呈顯著正相關(guān)（r=0.795，P＜0.05）。

3 討論

轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor β，TGFβ）超家族包括多潛能的細(xì)胞因子和兩型受體，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的諸多重要生物學(xué)功能，如細(xì)胞分化、增殖、運(yùn)動、凋亡等[4]。Endoglin是分子量為180kD的跨膜糖蛋白分子，主要表達(dá)于人血管內(nèi)皮細(xì)胞和胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞膜上，其內(nèi)包含豐富的絲/蘇氨酸控制區(qū)，絲/蘇氨酸蛋白激酶系統(tǒng)激活后，進(jìn)而使下游的轉(zhuǎn)錄因子磷酸化，最終啟動細(xì)胞核內(nèi)與血管生成有關(guān)的轉(zhuǎn)錄，參與血管發(fā)育和重塑[5～7]。同時(shí)Endoglin還作為一種缺氧誘導(dǎo)蛋白，與細(xì)胞增殖及NO信號系統(tǒng)有關(guān)。Gilbert等[8]通過缺氧建立妊高癥孕鼠模型，發(fā)現(xiàn)在缺氧的影響下妊高癥孕鼠胎盤中Endoglin的表達(dá)量明顯升高，是正常對照組的2倍，同時(shí)正常孕鼠體內(nèi)也有低量的表達(dá)，說明妊娠依賴于Endoglin的正常表達(dá)，但當(dāng)其表達(dá)異常時(shí)就會引發(fā)病理改變。Caniggia等[9]通過體外試驗(yàn)證實(shí)，用反義的寡核苷酸或 Endoglin抗體阻斷Endoglin的表達(dá)后能刺激絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的分化和浸潤，說明Endoglin是調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞分化侵入的關(guān)鍵的負(fù)性調(diào)節(jié)因子。

子癇前期的病理基礎(chǔ)是全身小血管痙攣，內(nèi)皮細(xì)胞受損，引發(fā)的一系列病變。有研究顯示通過上調(diào)TGFβ1的表達(dá)，誘導(dǎo)靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Endoglin的表達(dá)，引發(fā)血小板粘附、聚集，可促進(jìn)深靜脈血栓形成[10]。我們通過免疫組化方法檢測胎盤組織中Endoglin和TGFβ1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Endoglin和TGFβ1在正常妊娠胎盤組織中均有較低表達(dá)，說明二者對維持正常妊娠有一定作用，子癇前期組與正常妊娠組分布相同但著色明顯加深，說明當(dāng)其表達(dá)增高時(shí)，對滋養(yǎng)細(xì)胞的分化和浸潤的負(fù)調(diào)控作用增強(qiáng)，引起胎盤淺著床及子宮螺旋動脈重鑄障礙，參與了子癇前期的發(fā)生。同時(shí)Endoglin隨著子癇前期病情的加重表達(dá)明顯增強(qiáng)，說明Endoglin的表達(dá)情況與疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。

總之，Endoglin和TGFβ1共同參與了子癇前期的發(fā)病，而且Endoglin與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)?？梢栽O(shè)想將二者聯(lián)合起來作為臨床子癇前期的監(jiān)測指標(biāo)，有效調(diào)控Endoglin和TGFβ1的作用通路有望成為預(yù)防和治療子癇前期的新途徑。

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