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    免疫比濁法脂蛋白a試劑的評(píng)價(jià)

    2012-07-05 06:06:24王佳君
    科技傳播 2012年12期
    關(guān)鍵詞:濁法羅氏邁克

    王佳君

    上??迫A生物工程股份有限公司,上海 200233

    1 目前主要的檢測(cè)方法

    1.1 免疫比濁法

    免疫比濁法適用于自動(dòng)化分析,免疫散射要有專門儀器,免疫透射比濁法可用自動(dòng)生化分析儀。大多數(shù)生化自動(dòng)分析儀要求反應(yīng)在10分鐘內(nèi)完成,所以必須有高活性抗體和合適的反應(yīng)體系,且檢測(cè)血清用量大,在常用PEG反應(yīng)體系中存在明顯的非特異性反應(yīng),需依賴表面活性劑作用來加速反應(yīng)速度和減少非特異性反應(yīng)。Levine等設(shè)計(jì)免疫比濁自動(dòng)反應(yīng)體系中含22.5g/L PEG,2g/L明膠等表面活性劑,10分鐘反應(yīng)線形范圍>2.6g/L,不受蛋白纖溶酶原(pg)、ApoB、TG等干擾,能識(shí)別11種LP(a)的多態(tài)型,與ELISA有良好相關(guān)性。

    1.2 粒子增強(qiáng)免疫比濁測(cè)定法

    原理與免疫比濁法一樣,主要區(qū)別在于從抗血清IgG后,吸附或交聯(lián)于膠乳表面,因其有一定粒徑,可增強(qiáng)光散射強(qiáng)度等原因,可使度法靈敏度達(dá)到ng/ml水平。同時(shí)因抗體的固相化,增加了穩(wěn)定性。

    本次評(píng)價(jià)采用市場(chǎng)上常用的普通免疫比濁法的試劑盒,與粒子增強(qiáng)免疫比濁測(cè)定法的試劑盒進(jìn)行比較,以了解現(xiàn)在市場(chǎng)上采用不同方法試劑的現(xiàn)狀。

    2 采取的主要實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 實(shí)驗(yàn)所用試劑

    免疫比濁法:羅氏:646866;

    粒子增強(qiáng)法:第一化學(xué):815RA1(試劑)813 RA1(校準(zhǔn)品)邁克:0611031。

    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器

    日立全自動(dòng)生化分析儀7100。

    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:

    1)準(zhǔn)確性測(cè)定

    測(cè)定項(xiàng)目 靶值范圍 羅氏免疫比濁法邁克粒子增強(qiáng)法羅氏Cfas第一化學(xué)粒子增強(qiáng)法57.14 24.9 2934.44% -41.41% -31.76%42.5 mg/dl羅氏Control 115.4-23.2(1)21.2-32.0(2)mg/dl 24.25 13.85 13.9羅氏Control 276.6-115(1)89-137(2)mg/dl 114 54.6 64.6

    2)Bio-Rad Control范圍1為Beckman Coulter IMMAGE標(biāo)示值,范圍2為Roche cobas

    INTEGRA標(biāo)示值。

    由羅氏Cfas結(jié)果可知,羅氏結(jié)果偏高34.44%,而第一化學(xué)與邁克結(jié)果接近,偏低很多;由羅氏Control 1結(jié)果可知,羅氏試劑結(jié)果在標(biāo)示范圍內(nèi),而第一化學(xué)與邁克結(jié)果接近,低于下限值;由羅氏Control 2結(jié)果可知,羅氏結(jié)果在范圍內(nèi),而第一化學(xué)與邁克結(jié)果仍然低于范圍下限;由于Bio Control說明書上沒有提供日立機(jī)型的參考范圍,故將其他全自動(dòng)生化分析儀上的結(jié)果均進(jìn)行比較,除邁克 Bio Control2的結(jié)果在Beckman Coulter IMMAGE的標(biāo)示范圍內(nèi),其他結(jié)果均不在標(biāo)示范圍內(nèi)。

    2)相關(guān)性測(cè)定

    將羅氏,第一化學(xué),邁克3款試劑同時(shí)測(cè)定55份人血清樣本(注: Lp(a)含量超出線性范圍,用生理鹽水稀釋后測(cè)定,結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)),結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下:

    測(cè)定樣本數(shù) 相關(guān)系數(shù) 回歸方程邁克-第一化學(xué) 55 0.9908 Y=1.2114x+1.7382邁克-羅氏 55 0.9120 Y=0.5784x-4.9798羅氏-第一化學(xué) 55 0.9129 Y=1.7601x+22.8

    有以上結(jié)果可知,第一化學(xué)與邁克結(jié)果相近,相關(guān)系數(shù)R=0.9908,相關(guān)性很好;而羅氏與第一化學(xué)的相關(guān)系數(shù)R=0.9129;羅氏與邁克的相關(guān)系數(shù)R=0.9120;相關(guān)性不夠好。

    3 結(jié)論

    從以上數(shù)據(jù)結(jié)果表明,第一化學(xué)與邁克公司的LP(a)的定量測(cè)定試劑盒所測(cè)得的結(jié)果較為相近,普遍結(jié)果都要比羅氏公司的LP(a)的定量測(cè)定試劑盒的結(jié)果低上不少,究其原因可能第一化學(xué)與邁克公司的試劑盒均為粒子增強(qiáng)法試劑,體系相近,所以結(jié)果也相近;而此次試驗(yàn)中羅氏公司的試劑盒為常規(guī)的免疫比濁法試劑盒,且所用抗體為多抗,所測(cè)結(jié)果則較高。羅氏公司的試劑盒在測(cè)定羅氏control的結(jié)果都在給定的范圍內(nèi),而第一化學(xué)與邁克的試劑盒的結(jié)果則偏出范圍外,低于給定范圍的下限,而且測(cè)定的Bio-Rad Control的結(jié)果幾乎都偏出所給參考范圍;在相關(guān)性實(shí)驗(yàn)中也體現(xiàn)出第一化學(xué)與邁克由于都是粒子增強(qiáng)法試劑盒,故相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9908,而羅氏試劑盒所用方法不同,與第一化學(xué),邁克公司的試劑盒的相關(guān)性并不好。說明市場(chǎng)上不同體系的LP(a)的定量測(cè)定試劑盒所測(cè)得的結(jié)果差異很大。

    早在2004年,IFCC的生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會(huì)就接受了“IFCC SRM 2B”為國際上第一個(gè)LP(a)免疫測(cè)定的WHO/IFCC國際參考物質(zhì),該參考物質(zhì)的每個(gè)安瓿內(nèi)的LP(a)為0.1071nmol。但目前市場(chǎng)上常用的計(jì)算單位為mg/dl,又由于LP(a)結(jié)構(gòu)內(nèi)含的apo(a)具有多態(tài)性,特別是環(huán)餅區(qū)域K4的第2段中的相似環(huán)餅從3~40個(gè)不等,使得apo(a)的大小從187kDa到662kDa不等,也就導(dǎo)致LP(a)的分子量的不確定,故無法在2個(gè)單位間通過分子量進(jìn)行換算,因此從SRM 2B溯源的值無法在市場(chǎng)上得到普及,造成現(xiàn)在市場(chǎng)上各體系間的差異,希望在不久的將來,以SRM 2B為基準(zhǔn)溯源的結(jié)果能直接應(yīng)用于臨床,解決類似差異的問題。

    [1]Albers.J.J, et al.The Unique Lipoprotein(a):Properties and Immunochemical Measurement.Clin Chem.1990,36(12):2019-2026.

    [2]張麗霞,只野壽太郎,山本匡介.脂蛋白是最敏感的急性時(shí)相蛋白.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1997,20(3):167.

    [3]楊昌國,許葉,李清華.脂蛋白(a)的結(jié)構(gòu)和免疫化學(xué)測(cè)定中的難題.臨床檢驗(yàn)雜志,1993,11:42-44.

    [4]王紅,莊一義.血清脂蛋白(a)的免疫比濁測(cè)定法.臨床檢驗(yàn)雜志,1991,9(4):184.

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    [7]李建軍,莊一義,汪俊軍.人血清載脂蛋白(a)的多態(tài)性檢測(cè).中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1994,17(1):22-25.

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