EZH2和PTEN蛋白表達(dá)與卵巢漿液性囊腺癌的相關(guān)性研究

宋大平，方仔羽

（1.湖北省武漢市蔡甸區(qū)中醫(yī)院婦產(chǎn)科 430100；2.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣西柳州545005）

惡性腫瘤中普遍存在表觀遺傳學(xué)的改變，EZH2是表觀遺傳學(xué)中重要的因子［1］。有研究表明EZH2在卵巢癌組織中高表達(dá)，與卵巢漿液性囊腺癌的進(jìn)展與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但具體機(jī)制不清［2］。PTEN基因是一種抑癌基因，對細(xì)胞生長和凋亡有重要調(diào)控作用。有研究表明EZH2和PTEN基因在膀胱癌和前列腺癌中存在負(fù)相關(guān)，且與癌癥的不同病理分級和臨床分期有關(guān)［3－4］。本研究擬通過采用免疫組化SABC法檢測卵巢漿液性囊腺癌標(biāo)本中EZH2和PTEN蛋白的表達(dá)水平，探討其在卵巢漿液性囊腺癌早期診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2006年8月至2011年7月武漢市江夏區(qū)第一人民醫(yī)院和廣西醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院婦產(chǎn)科行卵巢漿液性囊腺癌手術(shù)切除且臨床資料完整的標(biāo)本73例（觀察組），所有病例術(shù)前均未接受放療或化療，術(shù)后均經(jīng)病理確診，年齡20～70歲，平均（47.2±5.2）歲。按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FICO）2000年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期，Ⅰ～Ⅳ期分別13、16、34、10例；病理分化程度：低分化35例，中分化21例，高分化17例；其中44例伴有腹水，16例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，32例伴有癌瘤播散；全子宮和雙附件切除16例，行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)57例。選擇同期在兩院行手術(shù)治療的卵巢漿液性囊腺瘤標(biāo)本39例作為對照（對照組），年齡23～68歲，平均（48.5±6.1）歲。

1.2方法

1.2.1檢測方法 免疫組化檢測方法（SABC法）按常規(guī)方法染色，先經(jīng)固定、脫水、包埋、切片、脫蠟、脫水、滅活、修復(fù)等步驟后，分別滴加1∶200兔抗人EZH2多克隆抗體（美國Cell Signaling公司）和1∶100鼠抗人PTEN多克隆抗體（北京中山生物技術(shù)有限公司），在4℃冰箱中存放24h，再分別滴加生物素二抗，最后經(jīng)DAB顯色、脫水、透明、封片。用PBS代替抗體作陰性對照，用已知的陽性標(biāo)本作陽性對照。

1.2.2判定結(jié)果 每張切片由兩位病理學(xué)專家分別讀片，存在爭議的經(jīng)兩位專家討論后決定。EZH2主要以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均無著色或只有細(xì)胞質(zhì)著色者判為陰性；細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色、棕黃色或黃色顆粒者判為陽性。PTEN蛋白則以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕褐色、棕黃色或黃色顆粒者判為陽性。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400），計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算著色細(xì)胞所占百分比，若小于25%為陰性（－）；25%～50%為弱陽性（＋）；＞50%～75%為陽性（＋＋）；＞75%為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SAS9.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2組間EZH2或PTEN蛋白表達(dá)陽性率比較用χ2檢驗(yàn)，EZH2或PTEN蛋白表達(dá)與卵巢漿液性囊腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系用Spearman等級相關(guān)分析，EZH2和PTEN蛋白陽性表達(dá)率相關(guān)性用直線相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者EZH2和PTEN蛋白的表達(dá)情況 EZH2在卵巢漿液性囊腺癌組織中表達(dá)陽性率為71.2%，高于卵巢漿液性囊腺瘤組織的陽性率12.8%（P＜0.01）；而PTEN蛋白在卵巢漿液性囊腺癌組織中表達(dá)陽性率為46.2%，低于卵巢漿液性囊腺瘤組織的陽性率76.9%（P＝0.0013），見表1。

2.2EZH2和PTEN蛋白表達(dá)與卵巢漿液性囊腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 EZH2的總表達(dá)陽性率在高、中、低分化患者中分別為58.8%、71.4%、77.1%，隨著病理分級的增加而升高（rs＝0.246，P＝0.036）；在臨床分期Ⅰ～Ⅳ期患者中分別為53.8%、68.8%、73.5%、90.0%，隨著臨床分期的增加而升高（rs＝0.251，P＝0.032）。PTEN蛋白的總表達(dá)陽性率在高、中、低分化患者中分別為64.7%、57.1%、28.6%，隨著病理分級的增加而降低（rs＝－0.330，P＝0.035）；在臨床分期Ⅰ～Ⅳ期患者中分別為61.5%、56.2%、41.2%、20.0%，隨著臨床分期的增加而降低（rs＝－0.247，P＝0.004）。具體見表2。EZH2和PTEN蛋白在不同臨床分期和病理分級患者中的陽性表達(dá)率存在負(fù)相關(guān)（r＝－0.903，P＝0.005）。

表1 兩組患者EZH2和PTEN蛋白的表達(dá)比較［n（%）］

表2 EZH2和PTEN蛋白表達(dá)與卵巢漿液性囊腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

卵巢惡性腫瘤早期癥狀常不明顯，發(fā)現(xiàn)時(shí)多為晚期，是病死率最高的婦科惡性腫瘤，其中最常見的是卵巢漿液性囊腺癌［5－7］。EZH2是表觀遺傳學(xué)中的重要成員，具有多潛能性［8－9］，PTEN蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)的一種具有磷酸酶活性抑癌基因，大量研究表明，EZH2在肺癌、乳腺癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤中明顯高表達(dá)［10－12］，在腦癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌等組織中PTEN蛋白呈現(xiàn)低表達(dá)［13－15］。本研究同樣發(fā)現(xiàn)EZH2在卵巢漿液性囊腺癌組織中存在高表達(dá)，表達(dá)陽性率約是卵巢漿液性囊腺瘤組織5.6倍，PTEN蛋白在卵巢漿液性囊腺癌組織中存在低表達(dá)，說明EZH2和PTEN蛋白可能在卵巢漿液性囊腺癌發(fā)生過程中起一定作用。

李海波等［16］的研究發(fā)現(xiàn)EZH2和PTEN蛋白在腎癌中的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)，且EZH2的表達(dá)隨腎癌的臨床分期升高而增加，PTEN蛋白的表達(dá)隨腎癌的臨床分期及病理分級的升高而降低，與本研究結(jié)果基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)，EZH2的表達(dá)隨卵巢漿液性囊腺癌患者的臨床分期和病理分級的升高而升高，PTEN蛋白的表達(dá)隨卵巢漿液性囊腺癌患者的臨床分期和病理分級的升高而降低，說明EZH2和PTEN蛋白的表達(dá)可能與卵巢漿液性囊腺癌發(fā)展有關(guān)，有望作為卵巢漿液性囊腺癌早期診斷和判斷預(yù)后的指標(biāo)。二者存在負(fù)相關(guān)（r＝－0.903，P＝0.005），說明它們在卵巢漿液性囊腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能存在協(xié)同作用，具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

總之，EZH2和PTEN蛋白作為卵巢漿液性囊腺癌相關(guān)因子，對EZH2和PTEN蛋白的檢測有助于早期發(fā)現(xiàn)卵巢漿液性囊腺癌并判定病情進(jìn)展，同時(shí)也為卵巢漿液性囊腺癌的基因治療提供了新思路。

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