兩種酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙肝表面抗原的結(jié)果比較

胡 越，蔣瑞馨，邵家幼

(無(wú)錫市紅十字中心血站檢驗(yàn)科，江蘇 無(wú)錫 214021)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的傳染病，輸血是HBV 傳播的主要途徑之一，我國(guó)是HBV 感染的高流行區(qū)，約9.7%的人群為HBV 攜帶者[1]。為防止HBV 經(jīng)血液傳播，《獻(xiàn)血者健康檢查要求》(GB18467-2001)要求對(duì)獻(xiàn)血者篩查表面抗原HBsAg，但是據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，使用一步法檢測(cè)時(shí)，樣本中的抗原或抗體濃度過(guò)高會(huì)因鉤狀效應(yīng)造成假陰性漏檢，從而增加輸血傳播的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。本研究通過(guò)比較ELISA 一步法和二步法檢測(cè)結(jié)果，探討ELISA 一步法中鉤狀效應(yīng)對(duì)檢測(cè)HBsAg 結(jié)果的影響，評(píng)價(jià)ELISA 二步法檢測(cè)HBsAg的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 1200份無(wú)償獻(xiàn)血初檢標(biāo)本來(lái)源于無(wú)錫中心血站2011年1月至5月無(wú)償獻(xiàn)血者。

1.2 試劑與儀器 乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一步法和二步法診斷試劑盒均來(lái)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司。酶免分析采用瑞士HAMILTON全自動(dòng)酶免系統(tǒng)，TECAN全自動(dòng)加樣系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 檢測(cè)步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3.2 6份乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一步法檢測(cè)結(jié)果陰性，懷疑存在鉤狀效應(yīng)的標(biāo)本進(jìn)行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋后，再采用乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一步法進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SSPS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同方法檢測(cè)HbsAg 結(jié)果比較 1200份無(wú)償獻(xiàn)血初檢標(biāo)本經(jīng)二步法檢測(cè)出35份陽(yáng)性，一步法僅檢測(cè)出29份陽(yáng)性。陽(yáng)性率分別為2.92%和2.42%,兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 6份疑有鉤狀效應(yīng)標(biāo)本一步法檢測(cè)結(jié)果 將6份標(biāo)本分別進(jìn)行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋?zhuān)瑱z測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 6份疑有鉤狀效應(yīng)標(biāo)本不同稀釋倍數(shù)下一步法檢測(cè)結(jié)果

表2 不同方法檢測(cè)6份疑有鉤狀效應(yīng)標(biāo)本結(jié)果

2.3 6份疑有鉤狀效應(yīng)標(biāo)本不同方法檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

本研究對(duì)乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)二步法檢測(cè)為陽(yáng)性，而乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一步法檢測(cè)為陰性，懷疑存在鉤狀效應(yīng)的6份標(biāo)本進(jìn)行1:5、1:10、1:30、1:60倍稀釋?zhuān)儆靡腋伪砻婵乖?酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一步法檢測(cè)，結(jié)果全部轉(zhuǎn)為陽(yáng)性。說(shuō)明乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)一步法檢測(cè)這6份標(biāo)本時(shí)存在鉤狀效應(yīng)，并且將這些標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后可以消除鉤狀效應(yīng)，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致[4-5]，而乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)二步法由于待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗體是分兩步加入的，因此不存在競(jìng)爭(zhēng)抑制，即避免了鉤狀效應(yīng)。

本文結(jié)果表明，在篩查大量標(biāo)本時(shí)，乙肝表面抗原-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)二步法檢測(cè)結(jié)果比一步法檢測(cè)結(jié)果更可靠。一步法檢測(cè)HBsAg 時(shí)應(yīng)考慮到鉤狀效應(yīng)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，可以通過(guò)稀釋法或二步法完全或部分消除鉤狀效應(yīng)，保證檢測(cè)結(jié)果的敏感度。另外文獻(xiàn)報(bào)道ELISA 孵育過(guò)程中適當(dāng)振蕩也可以消除鉤狀效應(yīng)[6]，這在今后的研究中有待加以補(bǔ)充完善。

[1]莊 輝.加強(qiáng)對(duì)新生兒以外人群乙型肝炎疫苗免疫[J].中華流行病學(xué)雜志,2004,25(5):376.

[2]王火生，李麗雄，林萍，等.一步法ELISA 在HIV 初篩中的應(yīng)用探討[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2006,10(5):501.

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[4]單桂秋，李秋生，肖韶英，等.檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的一步法試劑的鉤狀效應(yīng)分析[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2002,25(2):107-108.

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