液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)減肥類(lèi)保健品中非法摻入的化學(xué)品

孫曉娟，董 宇，王曉黎

目前，中藥制劑及保健品的需求逐年增加，但不法廠(chǎng)家為了牟取暴利，不惜在中藥制劑及保健品中非法添加化學(xué)成分，欺騙、坑害消費(fèi)者。不法廠(chǎng)家在降壓類(lèi)中藥制劑中添加氫氯噻嗪等化學(xué)藥物7-719RGANICS［1-2］，在抗風(fēng)濕類(lèi)藥物中添加醋酸潑尼松、吲哚美辛等化學(xué)藥物［3-4］，非法添加現(xiàn)象屢屢出現(xiàn)。在減肥類(lèi)中藥制劑及保健品的檢測(cè)中，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(編號(hào)2006004)僅對(duì)西布曲明、芬弗拉明、麻黃堿3個(gè)非法添加成分進(jìn)行檢測(cè)，并且采用了2個(gè)色譜系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程相對(duì)繁瑣。本實(shí)驗(yàn)利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，采用一個(gè)色譜系統(tǒng)，可快速、準(zhǔn)確地同時(shí)檢測(cè)減肥類(lèi)中藥制劑中非法摻入的12種具有減肥功效的化學(xué)藥物。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LCQ DECA XP MAX離子阱型液質(zhì)聯(lián)用儀，配有電噴霧離子化源(美國(guó) Thermo公司)。

1.2 試藥與試劑 鹽酸麻黃堿、咖啡因、鹽酸安非他酮、鹽酸芬氟拉明、布美他尼、鹽酸西布曲明、鹽酸氟西汀、鹽酸舍曲林對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):171242-200405、171215-200305、100671-200301、10073-0002、173-9301、100624-200401、100513-200401、100702-200401)、鹽酸東布曲明、奧利司他(Sigma公司，批號(hào):D0676、04139)、呋塞米(Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號(hào):00820)、酚 酞 (ACROSORGANICS，批 號(hào):A0280446)。甲醇、冰醋酸為色譜純，水為二次重蒸水，其余試劑為分析純。53批樣品為省內(nèi)監(jiān)督抽樣的減肥類(lèi)保健食品:碧生源牌減肥茶，14批次;大印象牌減肥茶，8批次;貝興牌左旋肉堿茶多酚膠囊，4批次;御生堂牌減肥茶，4批次;丹健減肥營(yíng)養(yǎng)精，11批次;婷采牌減肥靚顏膠囊，2批次;綠之源瘦腩清脂素膠囊，1批次;清牌減肥晶，1批次;金領(lǐng)牌金領(lǐng)減肥沖劑，1批次;經(jīng)典瘦身咖啡，1批次;人人瘦減肥茶，1批次;興維牌清麗爽減肥茶茶劑，1批次;雙禮牌清通舒軟膠囊，1批次;康氏牌減肥茶(濃縮型)，1批次;梅山牌減肥神茶，1批次;時(shí)尚麗人堂清脂三天瘦，1批次。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜及質(zhì)譜條件 色譜柱:迪馬Diamonsil C18柱(150mm × 4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇-20mmol/L醋酸銨(0.1%冰醋酸);梯度洗脫程序見(jiàn)表1;流速:0.5mL/min。

離子源:電噴霧離子化(ESI)源;檢測(cè)方式:正負(fù)離子檢測(cè)方式;離子源噴射電壓:5.0 kV;毛細(xì)管溫度:300℃;毛細(xì)管電壓:15 V;鞘氣流速:1.05 L/min;輔助氣流速:0.15 L/min;掃描方式:一級(jí)全掃描方式，二級(jí)全掃描方式。

表1 梯度洗脫程序(%)

表2 化合物準(zhǔn)分子離子及特征碎片離子

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱(chēng)取鹽酸麻黃堿、咖啡因、鹽酸東布曲明、鹽酸安非他酮、呋塞米、鹽酸芬氟拉明、布美他尼、酚酞、鹽酸西布曲明、鹽酸氟西汀、鹽酸舍曲林、奧利司他對(duì)照品適量，以甲醇溶解并稀釋制成每種化合物濃度均為10μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 若供試品為片劑，取數(shù)片，研細(xì);若供試品為膠囊劑，取數(shù)粒，傾取內(nèi)容物，研細(xì)，稱(chēng)取1次口服劑量;若供試品為口服液，量取1次口服劑量，分別置100mL量瓶中，加甲醇適量，超聲提取20min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。濾過(guò)(必要時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，作為供試品溶液。

2.2.3 空白溶液的制備 取不含12種目標(biāo)化合物的中藥制劑，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，配制成空白溶液。

2.2.4 空白加樣溶液的制備 取不含12種目標(biāo)化合物的中藥制劑，按常規(guī)口服劑量加入對(duì)照品，配制成模擬樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下操作，配制成空白加樣溶液。

2.3 測(cè)定方法 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白溶液、空白加樣溶液各10μL，注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄色譜圖和質(zhì)譜圖。

2.4 對(duì)照品溶液分析結(jié)果 采用上述色譜系統(tǒng)對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行LC-MS-MS分析，12種目標(biāo)化合物的保留時(shí)間、準(zhǔn)分子離子、特征碎片離子見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖 1、圖2。

圖1 對(duì)照品溶液(正離子檢測(cè))選擇離子監(jiān)測(cè)色譜圖

圖2 對(duì)照品溶液(負(fù)離子檢測(cè))選擇離子監(jiān)測(cè)色譜圖

2.5 檢測(cè)限 以信噪比為3∶1時(shí)的對(duì)照品進(jìn)樣量作為檢測(cè)限，各目標(biāo)化合物的檢測(cè)限見(jiàn)表3。

表3 目標(biāo)化合物檢測(cè)限

2.6 耐用性 考察不同牌號(hào)的色譜柱對(duì)12種目標(biāo)化合物的分離效果，色譜柱分別為Kromasil C18柱(250mm ×4.6mm，5μm)和 Waters C18柱(150mm ×3.9mm，5μm)。結(jié)果表明，耐用性良好。

2.7 供試品溶液測(cè)定結(jié)果 對(duì)空白溶液、空白加樣溶液及53批供試品溶液進(jìn)行分析，結(jié)果表明，空白溶液中的中藥成分不干擾測(cè)定(見(jiàn)圖3)?？瞻准訕尤芤褐袡z測(cè)到相應(yīng)的目標(biāo)化合物，質(zhì)譜響應(yīng)良好。53批供試品溶液中，有16批檢測(cè)到保留時(shí)間與鹽酸西布曲明對(duì)照品相同的化合物，樣品質(zhì)譜信息見(jiàn)圖4;有3批檢測(cè)到保留時(shí)間與酚酞對(duì)照品相同的化合物，樣品質(zhì)譜信息見(jiàn)圖5。

圖3 空白溶液色譜圖

圖4 供試品溶液中鹽酸西布曲明質(zhì)譜圖

圖5 供試品溶液中酚酞質(zhì)譜圖

3 討論

由于在按藥品標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的常規(guī)檢驗(yàn)中無(wú)法檢出添加的化學(xué)藥物，所以，在中藥制劑及保健品中擅自添加化學(xué)成分具有極大的隱蔽性和危害性。本方法可用于檢測(cè)目前臨床上最為常用的12種具有減肥作用的化合物，比文獻(xiàn)［5-7］中檢測(cè)的目標(biāo)化合物更為全面。

通過(guò)采用甲醇、乙腈、氯仿等不同提取溶劑對(duì)模擬樣品進(jìn)行提取，最終確定采用甲醇超聲提取法對(duì)片劑、膠囊劑及口服溶液進(jìn)行預(yù)處理，制備方法簡(jiǎn)便，且提取液可直接用于液質(zhì)聯(lián)用儀分析。提取時(shí)間考察將陽(yáng)性樣品分別超聲提取5、10、15、20、25min，結(jié)果表明，20min時(shí)已提取完全。

在對(duì)53批樣品的檢測(cè)中，筆者在11批樣品(減肥茶)中檢測(cè)含有咖啡因，但通過(guò)對(duì)樣品工藝及處方的研究發(fā)現(xiàn)，茶類(lèi)及含有茶多酚的樣品均存在天然咖啡因成分，不存在非法添加現(xiàn)象，因此，此類(lèi)樣品可不檢測(cè)咖啡因。

綜上所述，本文所建立的方法操作簡(jiǎn)便、干擾少、靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

［1］劉吉金，楊敏，李軍，等.HPLC同時(shí)檢測(cè)保健品及中成藥中非法添加9種抗高血壓化學(xué)藥物的研究［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25(8):717-719.

［2］吳嫣艷，曹玲，丁安偉.降壓保健食品中非法添加氫氯噻嗪的檢測(cè)［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27(1):92-94.

［3］姜建國(guó)，張西如.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)非法制劑中的醋酸潑尼松［J］.中國(guó)藥業(yè)，2008，17(21):28-29.

［4］劉福艷，謝元超，李毓秋，等.液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)抗風(fēng)濕類(lèi)中藥制劑中非法摻入的萘普生、吲哚美辛［J］.藥物分析雜志，2008，28(8):1276-1279.

［5］曹玲，張妤琳，王寶珠.減肥保健食品中非法添加鹽酸西布曲明的檢測(cè)［J］.食品科學(xué)，2008，29(2):340-343.

［6］權(quán)伍英，欒燕，張欣.LC-MS/MS法檢測(cè)保健食品中的鹽酸芬氟拉明和鹽酸西布曲明［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，17(1):9-12.

［7］胡青，崔益泠，王柯.減肥類(lèi)保健食品中非法添加酚酞定性定量檢測(cè)方法的研究［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42(8):624-625.