白芍原藥材與不同炮制加工品的薄層對比研究

馬玉，郭力，黃玉慧，周勤梅，許莉

白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，主要含芍藥苷、牡丹酚、芍藥苷內(nèi)酯等萜類成分及黃酮、鞣質(zhì)、氨基酸、苯甲酸等成分。白芍一般需經(jīng)凈制切片或炮制后入藥。2010年版《中國藥典》規(guī)定的白芍加工炮制品為白芍飲片、清炒白芍和酒白芍。炮制方法不同，白芍的功效作用也有差異。

本文對白芍原藥材和不同炮制加工品[白芍飲片、酒白芍、麩炒白芍、發(fā)酵白芍]進行研究分析，新增了發(fā)酵白芍，采用薄層色譜法對其中的芍藥苷、氨基酸、苯甲酸進行化學(xué)成分對比分析，比較發(fā)酵法與其他方法的異同，為進一步高效液相色譜分析做輔助研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

超聲波清洗機(KQ3200E型)；10×20cm硅膠G板；玻璃點樣毛細管0.3mm(華西醫(yī)科大學(xué)儀器制造廠)；紫外分析儀；真空干燥箱（DZG-6050型，上海森信實驗儀器有限公司）。

1.2 藥材與試劑

藥材：白芍原藥材、飲片、酒白芍、麩炒白芍、發(fā)酵白芍均由亳州千草藥業(yè)飲片廠提供，由成都中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室李敏教授鑒定確認(rèn)。

對照品：芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110736-200320）。

試劑：苯甲酸（生物試劑）；薄層層析硅膠G（青島海洋化工廠）；層析用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 白芍不同炮制品薄層色譜鑒別

2.1.1 溶液的制備 供試品溶液的制備：取五種樣品粉末各0.5g，分別加乙醇l0mL，振搖5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為芍藥苷對照品溶液；另取苯甲酸適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作為苯甲酸對照品溶液。

2.1.2 芍藥苷薄層色譜鑒別 分別吸取芍藥苷對照品和上述供試品溶液2μl，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛-硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。如圖1。

圖1 芍藥苷薄層色譜圖

2.1.3 氨基酸薄層色譜鑒別 分別吸取上述供試品溶液2μl，點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%茚三酮溶液，加熱至斑點顯色清晰。如圖2。

圖2 氨基酸薄層色譜圖

2.1.4 苯甲酸薄層色譜鑒別 分別吸取苯甲酸對照品和上述供試品溶液2μl，點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚-正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（6∶4∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。如圖3。

圖3 苯甲酸薄層色譜圖

2.1.5 結(jié)果 從圖1可知，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍紫色斑點，麩炒白芍中芍藥苷斑點色稍淺，此外，白芍原藥材、白芍飲片、酒白芍、麩炒白芍及發(fā)酵白芍薄層中存在大量的共有斑點，且發(fā)酵白芍的斑點較多。從圖2可知，白芍原藥材、白芍飲片、酒白芍、麩炒白芍及發(fā)酵白芍原藥材中存在多種氨基酸，且含量以藥材和發(fā)酵品為多。從圖3可以看出，白芍原藥材、酒白芍、麩炒白芍的苯甲酸含量相對較少，而白芍飲片、發(fā)酵白芍的苯甲酸含量相對較高。

3 討論

3.1發(fā)酵是在常溫、常壓條件下進行的生物轉(zhuǎn)化過程，能最大限度地保護中藥的活性成分。微生物在發(fā)酵過程中將許多人體不能直接吸收利用的大分子有效活性物質(zhì)降解成小分子的活性物質(zhì)，使發(fā)酵中藥在人體中可以較快的被吸收，且吸收較完全。采用發(fā)酵法對白芍進行加工能最大限度保護對白芍中成分的破壞，并因為發(fā)酵的作用產(chǎn)生轉(zhuǎn)化出新的成分。因此在三個色譜中都出現(xiàn)了發(fā)酵白芍的斑點較多的情況，從而推斷發(fā)酵法應(yīng)該是比較好的方法，但還需進一步的研究開發(fā)。

3.2 芍藥苷薄層色譜中，麩炒白芍芍藥苷顏色淺于其它樣品的原因可能是由于麥麩吸附成分，致使芍藥苷含量相對較低。而發(fā)酵白芍斑點較多則可能是經(jīng)發(fā)酵后，微生物在生長過程中產(chǎn)生各種酶，將藥物的成分分解轉(zhuǎn)化產(chǎn)生了一些新物質(zhì)。

3.3 氨基酸薄層色譜，顯示存在大量氨基酸，這與之前的文獻報道相符[1]。但在薄層上只能粗略看出幾種藥材之間氨基酸含量的差異，而未能找出其種類的差異。白芍原藥材由于只經(jīng)簡單的初加工，其氨基酸含量明顯比其他炮制品高。此外發(fā)酵白芍的氨基酸斑點較其他白芍炮制品多，提示發(fā)酵后白芍有新的氨基酸產(chǎn)生，值得進一步研究。

3.4 苯甲酸可增加肝臟的解毒負擔(dān)，攝入一定量會產(chǎn)生不良反應(yīng)，故被視為存在安全隱患的有毒物質(zhì)。其為芍藥苷的分解產(chǎn)物之一，炮制加工對苯甲酸含量有一定影響，炮制品間差異不大，但炮制后均較生藥低[2]。發(fā)酵白芍中由于微生物的作用，可能增強了芍藥苷的分解，而導(dǎo)致苯甲酸含量比其它炮制品高。發(fā)酵白芍除了苯甲酸含量較高外，比較多的斑點也顯示有其它成分的存在。另外文獻報道不去皮品均大于去皮品，其中鮮品含量最高[3]。而所用白芍飲片未去皮，這可能是導(dǎo)致白芍飲片苯甲酸含量高的原因。

[1] 薛建海,王仁川.亳白芍不同炮制品中氨基酸成分分析[J].中國中藥雜志,1992,17(2):408.

[2] 吳巧鳳,來平凡,陳京,等.杭白芍生品與炮制品種芍藥甙、苯甲酸和元素含量的對比分析[J].中國中醫(yī)藥科技,2005,12(5):299.

[3] 王康才,張榮榮,方陣,等.杭白芍不同加工品苯甲酸含量分析[J].中藥材,2008,31(10):1476.