益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊應(yīng)激和免疫的影響

李 敏 呂 凱 侯生珍 郭遠(yuǎn)玉 劉陽梅

（1.青海貴南縣過馬營鎮(zhèn)獸醫(yī)站，青海 貴南 813101；2.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810016）

青海牧區(qū)地處高寒地帶，獨(dú)特的氣候條件和極其嚴(yán)酷的自然環(huán)境，致使牧草生長期短，枯草期長達(dá)8個(gè)月之久，冬春枯草季節(jié)營養(yǎng)物質(zhì)的匱乏嚴(yán)重制約著該地區(qū)畜牧業(yè)的發(fā)展，特別是藏母羊產(chǎn)羔期，正處于天然草場的枯草期。由于受自然環(huán)境和飼養(yǎng)條件等因素的制約，羔羊斷奶日齡延長到5～6月齡。實(shí)施藏羔羊早期斷奶，受母子隔離、食物、哺喂方式等方面的變更，容易引起藏系羔羊較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，主要表現(xiàn)在食欲差、采食量下降、營養(yǎng)消化吸收不良，機(jī)體免疫力和抗病力下降等，部分羔羊變成僵羊，甚至死亡[1]。因此，為了挖掘藏羔羊生長潛力，滿足其營養(yǎng)需求，設(shè)計(jì)合理藏羔羊飼料配方，促進(jìn)胃腸道功能的健康發(fā)育，有效地減輕斷奶應(yīng)激反應(yīng),同時(shí)，人們對無公害食品、綠色食品和有機(jī)食品呼喚中，兼顧抗生素類飼料添加劑對動(dòng)物和人類健康造成的危害[2-5]，應(yīng)用其替代品——益康XP。益康XP中含有酶、維生素和其它營養(yǎng)物質(zhì)及一些重要的輔助因子，可以調(diào)節(jié)和維護(hù)瘤胃內(nèi)微生物生態(tài)環(huán)境，刺激體內(nèi)免疫系統(tǒng)發(fā)育，減小應(yīng)激，并對提高畜產(chǎn)品的品質(zhì)有較好的作用，能提高動(dòng)物生長性能及其生長率、采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藏羔羊的選擇與分組設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選擇（55±2）日齡斷奶（體重 7.91±0.83 kg）藏羔羊42只，隨機(jī)分為3組（每組14只，公母各半），飼喂基礎(chǔ)日糧為粗蛋白和能量水平分別為18.02%和12.95 MJ/kg開口料。試驗(yàn)Ⅰ組為基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅱ組為基礎(chǔ)日糧+1%益康XP，試驗(yàn)Ⅲ組為基礎(chǔ)日糧+0.03%莫能菌素。試驗(yàn)期21 d，試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2 試驗(yàn)的時(shí)間與地點(diǎn)

試驗(yàn)時(shí)間：飼養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行于2012年3月18日～2012年4月8日。

試驗(yàn)地點(diǎn):海北州剛察縣那仁牛羊?qū)I(yè)育肥合作社。

1.3 藏羔羊開口料組成及配方

試驗(yàn)根據(jù)羔羊體重和營養(yǎng)需要特點(diǎn)，參照中國肉用山羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(2004)配制藏羔羊開口料，基礎(chǔ)日糧配方見表2。

表2 羔羊開口料組成及營養(yǎng)水平

1.4 藏羔羊飼養(yǎng)管理

羊舍為半開放式，避風(fēng)、向陽、干燥、通風(fēng)良好。試驗(yàn)羔羊進(jìn)圈舍前對圈舍進(jìn)行消毒處理，以后每天進(jìn)行清掃，隔天進(jìn)行消毒；所有試驗(yàn)羔羊按常規(guī)的免疫程序進(jìn)行免疫注射，并使用伊維菌素進(jìn)行內(nèi)寄生蟲防治，使用溴氰菊酯淋浴進(jìn)行外寄生蟲防治。各組飼喂制度（每天飼喂羔羊 3 次 8：30、13：00 和 17：00）和方式相同，自由采食、飲水自由。

1.5 測定項(xiàng)目與分析方法

1.5.1 藏羔羊血樣的采集

血液采集當(dāng)天(55、65、75 d)，早上飼喂前，由頸靜脈采血，將羔羊側(cè)臥保定，采血部位剪毛，用75%酒精消毒，用手指壓迫頸靜脈，待血管怒張后刺入一次性采血器采血約5 ml。血液采集后，管口向上，垂直放置,避免振蕩而造成的溶血。在室溫條件下放置30～60 min，待析出血清，3500 r/min離心 15 min，收集血清，于低溫-20℃冷凍，待測。

1.5.2 藏羔羊應(yīng)激酶類活性的測定

血清皮質(zhì)醇（Cor）：生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA酶聯(lián)試劑盒)；

肌酸激酶（CK）：酶標(biāo)儀法[肌酸激酶（CK）測試盒，批號(hào) 20120305]；

乳酸脫氫酶（LDH）：酶標(biāo)儀法[乳酸脫氫酶（LDH）測試盒，批號(hào)20120305]；

天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）：賴氏法[天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）測試盒，批號(hào) 20120305]；

堿性磷酸酶(ALP)：酶標(biāo)儀法[堿性磷酸酶（ALP）測試盒，批號(hào)20120305]。

指標(biāo)按照試劑盒操作說明進(jìn)行測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5.3 藏羔羊免疫指標(biāo)的測定

IgA、IgM、IgG：生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA酶聯(lián)試劑盒)。

指標(biāo)按照試劑盒操作說明進(jìn)行測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5.4 藏羔羊生長發(fā)育測定

早期斷奶藏羔羊55、65、75 d日采食量；

早期斷奶藏羔羊55、65、75 d體重,并計(jì)算日增重；

記錄腹瀉藏羔羊的只數(shù),記錄治療持續(xù)時(shí)間及恢復(fù)情況。

1.6 數(shù)據(jù)處理

對試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel2003進(jìn)行初步處理，然后用SAS 9.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和DUNCAN法多重比較，結(jié)果均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊應(yīng)激的影響（見表 3）

表3 各組藏羔羊血清中應(yīng)激酶類活性

由表3可見，在55、65、75 d時(shí)試驗(yàn)Ⅲ組Cor與試驗(yàn)Ⅰ組相比有所上升，試驗(yàn)Ⅱ組與試驗(yàn)Ⅰ組相比有所下降，各組差異不顯著（P>0.05）；從 55、65、75 d，試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組的CK、AST、LDH都有先上升后下降的趨勢，CK、AST、LDH 各試驗(yàn)組沒有顯著性差異（P>0.05），但試驗(yàn)Ⅱ組和Ⅲ組CK在75 d時(shí)小于試驗(yàn)Ⅰ組，AST在

65 d時(shí)試驗(yàn)Ⅱ組顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組、LDH在75 d時(shí)試驗(yàn)Ⅲ組小于其它兩組，ALP各試驗(yàn)組有先下降后上升的趨勢，75 d時(shí)試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組大于試驗(yàn)Ⅲ組（P>0.05）。

2.2 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊免疫的影響（見表 4）

表4 各組藏羔羊血清中免疫球蛋白含量

由表 4 可見,從 55、65、75 d 看各試驗(yàn)組 IgG、IgA、IgM 差異不顯著（P>0.05），但試驗(yàn)Ⅱ組 IgG、IgA、IgM高于試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組。

2.3 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊采食量的影響(見表5)

由表5可見，55～65日齡，試驗(yàn)Ⅰ組藏羔羊采食量最高，高于試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組；65～75日齡，試驗(yàn)Ⅱ組藏羔羊采食量最高，高于試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組。

2.4 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊體重及日增重的影響（見表6）

由表6可見，各試驗(yàn)組在55日齡、65日齡和75日齡時(shí)體重沒有顯著性差異（P>0.05）。55～65日齡，試驗(yàn)Ⅰ組藏羔羊日增重顯著高于試驗(yàn)Ⅱ組和試驗(yàn)Ⅲ組（P＜0.01）；而 65～75日齡，試驗(yàn)Ⅱ組藏羔羊日增重顯著高于試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組（P＜0.01）。

表5 藏羔羊各階段的日采食量

2.5 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊腹瀉率的影響（見表7）

由表7可見，試驗(yàn)Ⅱ組藏羔羊全程腹瀉率最低（14.29%），低于試驗(yàn)Ⅰ組（28.57%）和試驗(yàn)Ⅲ組，試驗(yàn)Ⅲ組最高(38.64%)；各試驗(yàn)組藏羔羊腹瀉發(fā)病率最高均出現(xiàn)在55～65日齡,各組腹瀉數(shù)（率）分別為2(14.29%)、2(14.29%)和 3（21.43%）；65～75 日齡，試驗(yàn)Ⅱ組藏羔羊已沒有羔羊腹瀉，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組藏羔羊仍然有腹瀉，腹瀉數(shù)（率）分別為 2（14.29%）和 2（14.29%）。但全程各試驗(yàn)組均沒有藏羔羊的死亡。

表6 藏羔羊各階段的體重及日增重

表7 藏羔羊腹瀉情況

3 討論

3.1 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊應(yīng)激的影響

酶類研究應(yīng)用于獸醫(yī)臨床,對動(dòng)物疫病的診斷和愈后判斷起了重要作用。研究表明血清中相關(guān)酶類測定也可作為判定應(yīng)激狀態(tài)的指標(biāo)[1]。Moss[6]認(rèn)為檢驗(yàn)血清中一些酶活性可作為應(yīng)激指標(biāo)。Becker[7]等指出皮質(zhì)醇在應(yīng)激反應(yīng)、物質(zhì)代謝及維護(hù)機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面起重要作用,各種應(yīng)激源均可提高血清皮質(zhì)醇水平,通常把它作為應(yīng)激反應(yīng)判定的敏感指標(biāo)之一。堿性磷酸酶(ALP)是廣泛分布于肝臟、骨骼、腸和腎等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶，與肝臟和骨骼的代謝密切相關(guān)。血清ALP活性的高低反映了動(dòng)物的生長狀況，因其是具有遺傳標(biāo)記的同工酶，其活性的高低可以反映生長速度和生長性能[8]。朱年華[9]、唐曉玲[10]研究表明堿性磷酸酶活性與豬的日增重呈顯著正相關(guān)，AST幾乎存在于所有組織中,但肝和肌肉中含量最高，肌肉、心肌和肝臟損傷，AST會(huì)升高[8]，當(dāng)早期斷奶幼畜應(yīng)激時(shí),會(huì)造成ALP、AST在血清中的含量和活性升高；CK是一種器官特異性酶,以骨骼肌含量最多，LDH是糖酵解途行中的重要酶,早期斷奶幼畜應(yīng)激腹瀉時(shí),采食量降低,肌肉能量供應(yīng)不足,易造成CK與LDH從肌細(xì)胞逸出,致使CK和LDH含量升高[9-10]；周向梅等[11]研究認(rèn)為血清中AST、CK、LDH酶活性,可作為判斷應(yīng)激狀態(tài)的指標(biāo),當(dāng)畜禽受到應(yīng)激時(shí)，血清中這三種酶的含量和活力會(huì)升高；Janezic和Presahn等[12-13]研究發(fā)現(xiàn)豬應(yīng)激前后CK可上升1.5～13.0倍。試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組早期斷奶藏羔羊Cor、CK、LDH、AST都有升高，說明早期斷奶的藏羔羊受到一定斷奶應(yīng)激，但試驗(yàn)Ⅱ組 Cor、CK、LDH 小于試驗(yàn)Ⅰ組(P>0.05)，Cor、AST小于試驗(yàn)Ⅲ組（P>0.05），說明早期斷奶藏羔羊日糧中加入益康XP可以減小應(yīng)激。

3.2 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊免疫的影響

IgG是血清中一種主要的免疫球蛋白，其含量反映機(jī)體的免疫狀況，起著抗體的作用，主要在畜禽腸道中發(fā)揮功效。早期斷奶的畜禽消化與免疫功能尚未發(fā)育成熟，最易受日糧中抗原與微生物抗原的刺激產(chǎn)生應(yīng)激。免疫球蛋白在畜禽腸道中可特異性地結(jié)合細(xì)菌抗原，弱化或破壞其毒性和刺激作用，從而防止畜禽腹瀉，改善生長狀況[14]；IgM在大多數(shù)家畜的血清中的含量僅次于IgG,也是固定補(bǔ)體和增強(qiáng)吞噬細(xì)胞吞噬作用最有效的Ig分子，也具有腸黏膜保護(hù)作用；IgA腸道免疫系統(tǒng)中起核心作用，腸道分泌物中含量最豐富的免疫球蛋白。IgA與細(xì)菌結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，并刺激腸道黏液的分泌，加速黏液在黏膜表面的移動(dòng)，從而有助于細(xì)菌和內(nèi)毒素隨糞便排出。防止病原微生物等的入侵，是構(gòu)成腸道黏膜免疫的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[1，14]。試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組 IgG、IgA、IgM 有所上升，各試驗(yàn)組 IgG、IgA、IgM 差異不顯著（P＞0.05），但試驗(yàn)Ⅱ組IgG、IgA、IgM高于試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅲ組，說明早期斷奶藏羔羊日糧中加入益康XP可以提高免疫。

3.3 益康XP替代抗生素對早期斷奶藏羔羊生長發(fā)育的影響

早期斷奶藏羔羊與藏母羊隔離、由母乳到固體飼料的改變，羔羊易表現(xiàn)食欲差采食量下降，營養(yǎng)消化吸收不良、生長緩慢受阻，加之胃腸道尚未發(fā)育完善，容易造成腹瀉[1]。陳國勝等[15]、張麗萍等[16]研究益康XP（酵母培養(yǎng)物）對早期斷奶仔豬生長性能的影響，研究表明益康XP，能顯著提高早期斷奶仔豬采食量，促進(jìn)動(dòng)物胃腸道有益微生物生長繁殖,提高動(dòng)物對飼料的消化能力,增強(qiáng)動(dòng)物的抗病力,提高生長速度和飼料轉(zhuǎn)化效率；Hughes等[17]在16頭早期斷奶犢牛的日糧中添加酵母培養(yǎng)物（2 g/kg日糧），試驗(yàn)84 d，試驗(yàn)組犢牛采食量和增重顯著高于對照組（P＜0.05）；Titi等[18]、寇慧娟等[19]研究酵母培養(yǎng)物對羔羊生產(chǎn)性能的影響，酵母培養(yǎng)物能顯著（P＜0.05）提高羔羊平均增加體質(zhì)量、平均日增重，極顯著(P＜0.01)提高干物質(zhì)采食量。益康XP(一種酵母培養(yǎng)物)中含有酶、維生素和其它營養(yǎng)物質(zhì)及一些重要的輔助因子，可以改善胃腸環(huán)境和菌種結(jié)構(gòu)，促進(jìn)動(dòng)物胃腸道有益微生物的生長繁殖,提高飼料的利用率。本試驗(yàn)添加益康XP的試驗(yàn)組，藏羔羊采食量有所提高，日增重高于其它試驗(yàn)組，腹瀉率明顯小于其它試驗(yàn)組，說明益康XP能提高家畜采食量和飼料轉(zhuǎn)化效率，提高其生產(chǎn)性能。

4 結(jié)論

通過對早期斷奶藏羔羊血清中酶類活性變化分析和免疫球蛋白含量分析表明,早期斷奶藏羔羊日糧中加入益康XP可以減小藏羔羊早期斷奶應(yīng)激，提高其免疫力；羔羊的健康與體重、日增重密切相關(guān)，尤其是羔羊腹瀉，嚴(yán)重阻礙羔羊的生長，試驗(yàn)添加益康XP減小了早期斷奶藏羔羊的腹瀉率，提高了藏羔羊的采食能力，提高藏羔羊的日增重，因此益康XP是抗生素的一種優(yōu)良的替代品。

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