枯草芽孢桿菌－菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及體液免疫功能的影響

邊連全 杜 欣 劉顯軍 文宇婷 張 飛

(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，沈陽(yáng) 110866)

在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，仔豬的早期斷奶綜合征影響著養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的集約化和規(guī)模化發(fā)展。具有無(wú)毒、無(wú)殘留、無(wú)抗藥性的微生態(tài)制劑已成為抗生素的有效替代品之一，可預(yù)防斷奶仔豬綜合征，提高仔豬生長(zhǎng)性能和免疫功能。益生菌和益生素類(lèi)物質(zhì)按適當(dāng)比例配合組成合生元，如納豆菌和甘露寡糖［1］、芽孢桿菌和果寡糖［2］合生元能調(diào)控畜禽消化道內(nèi)微生態(tài)環(huán)境，提高生長(zhǎng)性能?？莶菅挎邨U菌是好氧生長(zhǎng)，可以形成芽孢的革蘭氏陽(yáng)性菌，具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，提高生長(zhǎng)性能等諸多功能，被認(rèn)為是最理想的益生菌。菊糖又稱(chēng)菊粉，是一種天然果聚糖類(lèi)碳水化合物，被認(rèn)為具有調(diào)節(jié)消化道微生物區(qū)系的作用，是促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)和抑制有害菌生長(zhǎng)的益生素。但兩者結(jié)合的合生元對(duì)斷奶仔豬的應(yīng)用效果未見(jiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)研究枯草芽孢桿菌－菊糖合生元對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、免疫機(jī)能的影響，為其在仔豬飼養(yǎng)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌菌種(ACCC11025)購(gòu)自中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)，并由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院保藏;菊糖購(gòu)自上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司，純度96%。

含菊糖(3.5 mg/mL)培養(yǎng)基制備：將經(jīng)過(guò)0.22 μm微孔濾膜除菌的菊糖 3.5 g 加到1 000 mL無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，pH 7.0。

枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基和枯草芽孢桿菌－菊糖合生元培養(yǎng)基制備：在無(wú)菌條件下，以1%接種量將枯草芽孢桿菌分別接種到無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和含菊糖(3.5 mg/mL)培養(yǎng)基中，在37℃、120 r/min條件下分別振蕩培養(yǎng)5.5 和4.5 h，確定枯草芽孢桿菌含量為1.25×108CFU/mL。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì)

采用完全隨機(jī)分組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用72頭21日齡斷奶的“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交仔豬［平均體重為(4.25 ±0.71)kg］，隨機(jī)分為 4 個(gè)組，每組 3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭豬。各組試豬分別灌喂培養(yǎng)基(對(duì)照組)、培養(yǎng)基 +3.5 mg/mL菊糖(菊糖組)、培養(yǎng)基+1.25×108CFU/mL枯草芽孢桿菌(枯草芽孢桿菌組)、培養(yǎng)基+3.5 mg/mL菊糖+1.25×108CFU/mL枯草芽孢桿菌(合生元組)，各組灌喂量為16 mL/d。試驗(yàn)期為14 d。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

參照NRC(1998)仔豬營(yíng)養(yǎng)需要量標(biāo)準(zhǔn)，并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐配制基礎(chǔ)飼糧，由沈陽(yáng)眾友飼料公司提供，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)于2011－06－01—2011－06－14在沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)科研種豬場(chǎng)進(jìn)行。在斷奶仔豬進(jìn)舍前，對(duì)豬舍進(jìn)行全面刷洗，消毒。按豬場(chǎng)常規(guī)管理程序進(jìn)行免疫、驅(qū)蟲(chóng)，自然光照、通風(fēng)。

正試期斷奶仔豬自由采食，每天13：00按照分組分別灌喂培養(yǎng)基、菊糖培養(yǎng)基、枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基和枯草芽孢桿菌－菊糖合生元培養(yǎng)基1次，自動(dòng)飲水器供水。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

試驗(yàn)期間每天觀察仔豬精神狀況、腹瀉情況以及持續(xù)時(shí)間。試驗(yàn)開(kāi)始前及試驗(yàn)最后1 d的20：00停止喂料，照常供水，于次日早上對(duì)試豬逐只稱(chēng)重;試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)(欄)為單位稱(chēng)剩料量，記錄耗料量，計(jì)算試驗(yàn)期的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)及腹瀉率。

腹瀉率(%)=［(每天腹瀉頭數(shù)×腹瀉天數(shù))/

(試驗(yàn)豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))］×100。

1.5.2 血清免疫指標(biāo)測(cè)定

試驗(yàn)最后1 d的20：00停止喂料，照常供水，于次日早上對(duì)空腹仔豬進(jìn)行前腔靜脈采血15 mL，收集于離心管中，不加抗凝劑，室溫靜置2 h，待血清析出，吸出血清置于－20℃保存。采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)含量和補(bǔ)體3(C3)、補(bǔ)體4(C4)水平，測(cè)定用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物技術(shù)有限公司。

1.6 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用F檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異檢驗(yàn)，顯著者再用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌 －菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，枯草芽孢桿菌組和合生元組的平均日增重均顯著高于對(duì)照組與菊糖組(P＜0.05)，合生元組的平均日增重最高?？莶菅挎邨U菌組平均日采食量最高，但各組間差異不顯著(P＞0.05)?？莶菅挎邨U菌組和合生元組料重比顯著低于對(duì)照組與菊糖組(P＜0.05)，但菊糖組與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。合生元組腹瀉率最低，顯著低于對(duì)照組與菊糖組(P＜0.05)，與枯草芽孢桿菌組差異不顯著(P＞0.05)。

表2 枯草芽孢桿菌－菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of Bacillus subtilis-dahlin synbiotics on growth performance of weaner piglets

2.2 枯草芽孢桿菌 －菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白含量和補(bǔ)體水平的影響

由表3可知，合生元組IgG含量顯著高于其他各組(P＜0.05)，菊糖組和枯草芽孢桿菌組差異不顯著(P＞0.05)。各組IgM的含量差異不顯著(P＞0.05)?？莶菅挎邨U菌組和合生元組IgA含量均顯著高于菊糖組和對(duì)照組(P＜0.05)，合生元組顯著高于枯草芽孢桿菌組(P＜0.05)，但是菊糖組與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。合生元組C3水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。合生元組C4水平顯著高于對(duì)照組和菊糖組(P＜0.05)，枯草芽孢桿菌組與合生元組差異不顯著(P＞0.05)。

表3 枯草芽孢桿菌－菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響Table 3 Effects of Bacillus subtilis-dahlin synbiotics on serum immune indices of weaner piglets g/L

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌 －菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

朱五文等［3］和黃雪泉［4］研究發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌制劑能提高仔豬日增重，降低料重比。顧憲紅等［5］和上官明軍等［6］的研究表明菊粉能提高畜禽生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)得出，枯草芽孢桿菌組和菊糖組與對(duì)照組相比均提高了斷奶仔豬的平均日增重，降低了料重比和腹瀉率。合生元組與對(duì)照組相比平均日增重提高26.3%，料重比和腹瀉率降低19.4%和73.0%，顯著提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能。其可能原因如下：腸道的優(yōu)勢(shì)菌大多為厭氧菌，有害菌和外來(lái)菌多數(shù)為需氧菌［7］?？莶菅挎邨U菌能夠迅速消耗腸道環(huán)境中的游離氧，造成厭氧環(huán)境，促進(jìn)乳酸桿菌等有益厭氧菌的生長(zhǎng)，抑制其他病原菌的生長(zhǎng)［4］，而且作為益生元的菊糖與病原菌的外源凝集素特異結(jié)合，使病原菌不能在腸道上黏附，所以認(rèn)為枯草芽孢桿菌－菊糖合生元共同促進(jìn)有益菌的增殖，減少仔豬腹瀉。同時(shí)，枯草芽孢桿菌具有較強(qiáng)的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，能發(fā)酵合成多種生物活性物質(zhì)［8－9］，加入菊糖培養(yǎng)出的枯草芽孢桿菌合生元活性作用強(qiáng)于枯草芽孢桿菌，能更顯著地增強(qiáng)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)代謝，提高飼料轉(zhuǎn)化率。

3.2 枯草芽孢桿菌 －菊糖合生元對(duì)斷奶仔豬體液免疫功能的影響

楊峰［10］研究表明，枯草芽孢桿菌可提高仔豬血清IgG和IgA含量。沈文英等［11］報(bào)道，枯草芽孢桿菌可以提高草魚(yú)C3水平。上官明軍等［6］報(bào)道，菊糖可提高雛雞血清免疫球蛋白含量。以上研究表明枯草芽孢桿菌、菊糖2類(lèi)物質(zhì)都能影響動(dòng)物的免疫機(jī)能?？莶菅挎邨U菌黏附在小腸黏膜表面，通過(guò)生物拮抗和免疫作用使病原菌難以在動(dòng)物腸道內(nèi)定植，可提高腸道局部和全身益生菌免疫的功能［8，12］。Carpentier 等［13］研究枯草芽孢桿菌的脂磷壁酸(LTA)和肽聚糖－磷壁酸復(fù)合物的生物活性時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩者均具有很強(qiáng)的免疫佐劑活性。菊糖有可能成為腫瘤過(guò)敏及感染等免疫治療中的新型免疫調(diào)節(jié)劑。Cooper等［14］制取γ－菊粉發(fā)現(xiàn)，它比滅活的金色葡萄球菌和酵母聚糖有更大的免疫佐劑活性。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，枯草芽孢桿菌組可提高仔豬血清IgG、IgA含量及C3、C4水平，菊糖組提高了IgG、IgA含量和C3水平，但合生元組仔豬血清IgG、IgA含量及C3、C4水平均高于對(duì)照組、菊糖組和枯草芽孢桿菌組，這說(shuō)明枯草芽孢桿菌－菊糖合生元可以提高仔豬體液部分特異性和非特異性免疫功能，且枯草芽孢桿菌和菊糖對(duì)機(jī)體的免疫機(jī)能產(chǎn)生協(xié)同作用。

4 結(jié)論

①枯草芽孢桿菌－菊糖合生元可顯著提高斷奶仔豬平均日增重，降低料重比和腹瀉率，對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能有改善作用。

②枯草芽孢桿菌－菊糖合生元可提高仔豬血清IgG、IgA含量以及C3、C4水平，對(duì)仔豬的免疫機(jī)能有改善作用。

③枯草芽孢桿菌和菊糖對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能及體液免疫具有協(xié)同作用。

［1］黃俊文，林映才，馮定遠(yuǎn)，等.益生菌、甘露寡糖對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)、免疫和抗氧化機(jī)能的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2005，17(4)：16 －20.

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