HBV感染者免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子表達(dá)變化的研究

歐陽錄明 陳福春 胡永軒 羅 輝 江 超 程 慶

湘南學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，湖南郴州 423000

慢性乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染者的臨 床轉(zhuǎn)歸和預(yù)后，與其免疫應(yīng)答狀況以及免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子含量變化有關(guān)聯(lián)。是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一[1]。為了解HBV感染者免疫應(yīng)答狀況與細(xì)胞因子含量變化的影響及意義，筆者選擇 HBV 感染者分類進(jìn)行了 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12細(xì)胞因子含量變化的檢測(cè)和研究，結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

60例來自醫(yī)院肝病科2010年6月～2011年6月的門診和住院患者。將其中27例HBeAg陽性和肝功能丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）異常者，劃為乙型病毒性肝炎（HB）現(xiàn)癥患者，即A組：男 17 例，女 10 例，平均年齡（39.14±3.36）歲，平均病程（4.2±1.61）年。將22例HBeAg陽性和肝功能ALT持續(xù)正常者，劃為無癥狀HBV攜帶者，即B組：男15例，女7例，平均年齡（34.31±6.72）歲，平均病程（4.92±8.63）年。將 11 例HBeAg陰性和肝功能ALT正常以及HBV-DNA陰性者，劃為非活動(dòng)性HBsAg攜帶者[2]，即C組：男8例，女3例，平均年齡（35.90±6.15）歲，平均病程（4.15±6.13）年。 設(shè)正常對(duì)照組：為各型病毒性肝炎血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)陰性的健康體檢者10例，男6例，女4例，平均年齡（36.60±3.63）歲。 診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2000年全國(guó)第十次病毒性肝炎與肝病學(xué)術(shù)會(huì)議（西安）修訂的病毒性肝炎防治方案[3]；并在3個(gè)月前未經(jīng)免疫調(diào)節(jié)劑和抗病毒治療，并排除合并其他病毒性肝炎和免疫性疾病的患者。

1.2 研究方法

1.2.1 血清病毒標(biāo)志物指標(biāo)觀察 包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe 及抗-HBc，HBV-DNA（羅氏熒光定量法）。高病毒載量為 HBV-DNA≥1×107拷貝/mL，中載量為 1×105～6拷貝/mL，低載量為＜1×105拷貝/mL。均由醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)。

1.2.2 血清生化學(xué)指標(biāo)觀察 包括ALT、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、r-谷酰胺轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、總膽紅素（TB）、白蛋白（A）及球蛋白（G），統(tǒng)一由醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)。

1.2.3 細(xì)胞因子含量檢測(cè) 受試者均于清晨無菌采血，血清分離后存放-50℃冰箱中備檢。 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12測(cè)定均采用雙抗體夾心ELISA法。試劑購自深圳晶美生物工程有限公司進(jìn)口分裝，具體步驟嚴(yán)格按照說明書操作。儀器為DNX-9620電腦洗板機(jī)、DG30ZZA型酶標(biāo)檢測(cè)儀，購自北京普朗新技術(shù)有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，兩兩比較q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HBV感染者細(xì)胞因子含量檢查比較

HBV感染者各組IL-2、IL-12含量較正常對(duì)照組均下降，IL-4、IL-10 均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05），IFN-γ普遍降低但各組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。A組現(xiàn)癥患者IL-2、IL-12的活性顯著高于B組無癥狀HBV攜帶組和C組非活動(dòng)性HBsAg攜帶組（P＜0.05）。見表1。

2.2 病毒載量與細(xì)胞因子含量的關(guān)系

IFN-γ、IL-2各組與正常對(duì)照組比較顯著下降 （P＜0.05），IFN-γ 下降幅度為≥107組和 105～6組＞、＜105組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。IL-12也普遍降低，各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。IL-4、IL-10各組含量明顯高于對(duì)照組 （P＜0.05），含量隨病毒載量增高而增加?！?07組和105～6與＜105組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 見表 2。

3 討論

機(jī)體感染HBV會(huì)有不同的臨床表現(xiàn)和預(yù)后。慢性乙型肝炎發(fā)病主要是免疫應(yīng)答導(dǎo)致的肝細(xì)胞損傷，CD4+T輔助（Th）細(xì)胞在肝細(xì)胞損傷的免疫反應(yīng)中起著核心的調(diào)節(jié)作用。根據(jù)CD4+Th產(chǎn)生的細(xì)胞因子不同分為Th1和Th2等細(xì)胞亞群，Th1分泌IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)，在一定條件下，還可刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體；Th2分泌IL-4、IL-10等細(xì)胞因子，主要促進(jìn)B細(xì)胞增殖并分化成漿細(xì)胞，介導(dǎo)體液免疫。Th1/Th2應(yīng)答的動(dòng)態(tài)平衡是機(jī)體處于正常免疫狀態(tài)的保證[4]。這兩種細(xì)胞因子發(fā)揮作用時(shí)相互拮抗，使得Th1和Th2成為功能上相互抑制的適應(yīng)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群[5]，本研究結(jié)果顯示，IFN-γ、IL-12、IL-2 較正常組血清含量均下降，而IL-4、IL-10均升高，提示HBV感染者Th1/Th2免疫應(yīng)答失衡或紊亂。

IFN-γ由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，是促進(jìn)Th1分化的關(guān)鍵性因子，它能直接抑制Th2的分化從而使Th1的分化占優(yōu)勢(shì)；IL-12主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，它和IFN-γ可直接調(diào)節(jié)Th1的分化，還可促進(jìn)NK細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，從而發(fā)揮對(duì)Th2的抑制和對(duì)Th1的促進(jìn)作用。IFN-γ、IL-12含量較正常組降低，IFN-γ降低程度伴隨病毒載量增加而降低，顯示Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答在HBV感染者中受到不同程度的抑制。IL-4對(duì)啟動(dòng)Th2的分化起最為關(guān)鍵作用，IL-4含量越高，則對(duì)Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的抑制作用越強(qiáng)[6]。IL-10主要通過抑制Th1細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ、IL-2等，來促進(jìn)Th2的分化。結(jié)果表明IL-4和IL-10含量均升高，且含量伴隨病毒載量增高而增加，顯示HBV致病與免疫應(yīng)答中Th2介導(dǎo)的體液免疫活性偏高有關(guān)系。含量偏高的IL-4和IL-10抑制了Th1群細(xì)胞的功能，使Th1分泌IFN-γ和IL-2的量減少，細(xì)胞免疫效應(yīng)降低，機(jī)體清除病毒能力減弱，導(dǎo)致病毒持續(xù)感染。同時(shí)也進(jìn)一步證實(shí)了HBV致機(jī)體免疫應(yīng)答低下。IL-2在HBV感染者中雖然普遍偏低，但在HB現(xiàn)癥患者中其活性顯著高于無癥狀HBV攜帶者和非活動(dòng)性HBsAg攜帶者 （P＜0.05），提示在有病毒復(fù)制的HB現(xiàn)癥患者中，Th1群細(xì)胞免疫應(yīng)答處在相對(duì)活躍狀態(tài)，與有關(guān)報(bào)道相符[7]。IL-2主要由活化的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能最主要淋巴因子之一。它屬于Th1群細(xì)胞因子，能增強(qiáng)CTL、NK、LAK等殺傷細(xì)胞的活性清除HBV。HB現(xiàn)癥患者ALT異常，提示Th1群細(xì)胞免疫應(yīng)答導(dǎo)致了肝細(xì)胞的損傷。

表1 各組HBV感染者細(xì)胞因子含量檢查結(jié)果比較（x±s，pg/mL）

表2 病毒載量與細(xì)胞因子含量的關(guān)系（x±s，pg/mL）

綜上所述，HBV感染者臨床表現(xiàn)呈多樣性，它與免疫應(yīng)答狀況以及免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子含量變化有關(guān)聯(lián)。在HBV感染與免疫反應(yīng)中，Th1/Th2免疫應(yīng)答失衡或紊亂，直接影響了CTL、NK、LAK和B細(xì)胞功能的正常發(fā)揮，致使病毒清除能力下降從而導(dǎo)致疾病慢性化。對(duì)HBV感染者進(jìn)行免疫狀況和免疫調(diào)節(jié)的細(xì)胞因子研究，對(duì)于進(jìn)一步闡明其發(fā)病機(jī)制以及應(yīng)用細(xì)胞因子干預(yù)治療慢性肝炎患者，判斷藥物治療效果，臨床轉(zhuǎn)歸和預(yù)后預(yù)測(cè)具有重要意義，有待繼續(xù)深入研究。

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