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    偏硅酸鈉抑制家兔外周血白細(xì)胞活性氧的生成

    2012-06-05 05:10:44谷麗娟侯建明甄艷軍李愛(ài)英
    關(guān)鍵詞:硅酸鈉高血脂家兔

    谷麗娟,侯建明,甄艷軍,李愛(ài)英

    (河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)課教學(xué)部,河北石家莊 050091)

    偏硅酸鈉抑制家兔外周血白細(xì)胞活性氧的生成

    谷麗娟,侯建明*,甄艷軍,李愛(ài)英

    (河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)課教學(xué)部,河北石家莊 050091)

    *通信作者(corresponding author):jckbsh@126.com

    高血脂時(shí)外周血白細(xì)胞引爆和激活,產(chǎn)生過(guò)多活性氧(reactive oxygen species,ROS),抑制過(guò)量的ROS產(chǎn)生對(duì)于控制動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)發(fā)生發(fā)展具有重要意義[1]。以往研究發(fā)現(xiàn)偏硅酸鈉(Na2SiO3)有抗炎效應(yīng)[2]。本實(shí)驗(yàn)觀察Na2SiO3對(duì)家兔外周血白細(xì)胞ROS的抑制作用,為Na2SiO3抗AS機(jī)制提供進(jìn)一步資料。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物:清潔級(jí)新西蘭家兔(河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心,合格證號(hào):1004218),雄性,體質(zhì)量1 500~2 000 g。

    1.2 制備ox-LDL:從健康家兔耳中動(dòng)脈取血,沉淀法提取低密度脂蛋白,置硫酸銅(CuSO4)溶液中37℃氧化24 h得氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)。

    1.3 分離白細(xì)胞:兔淋巴細(xì)胞分離液分離健康家兔血細(xì)胞,取出單個(gè)核細(xì)胞層和中性粒細(xì)胞層混合,得到白細(xì)胞懸液。

    1.4 白細(xì)胞內(nèi)ROS的測(cè)定:采用DCFH-DA探針測(cè)定ROS。

    1.5 體外ox-LDL刺激白細(xì)胞分組:分離的兔外周血白細(xì)胞分成6組。1)正常對(duì)照組;2)ox-LDL組:ox-LDL終濃度50 mg/L;3)68.5組、4)34.2組、5)17.1組和6)8.5組:培養(yǎng)液中加ox-LDL(50 mg/L)并Na2SiO3,硅的終濃度分別68.5、34.2、17.1和8.5 mg/L。以無(wú)血清DMEM懸浮細(xì)胞,總體積1 mL(含細(xì)胞3×106個(gè)),37℃搖動(dòng)孵育3 h,裝載 DCFH-DA探針,洗滌細(xì)胞2次后測(cè)熒光值(3 h熒光值)。然后恢復(fù)ox-LDL和 Na2SiO3濃度,繼續(xù)孵育30 min后再次測(cè)熒光值(3 h+30 min熒光值)。

    1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組:12只家兔分為3組。1)正常組:普通飼料喂養(yǎng);2)高脂組:高脂飼料;3)Na2SiO3組:與高脂組同步飼喂高脂飼料3周,第4周按每日2 mg硅/kg的量給予Na2SiO3溶液100 mL為飲用水,仍然高脂飼料喂養(yǎng)。共計(jì)4周后分離外周血白細(xì)胞。每只家兔細(xì)胞分成3組:1)空白組,培養(yǎng)液中不加其他試劑;2)PMA組,培養(yǎng)液中加入終濃度100 μg/L氟波醇豆蔻酸鹽乙酸酯(phorbol-myris-tate-acetate,PMA);3)PMA+Si組,加 PMA和 Na2SiO3,硅的終濃度8.5 mg/L。分離白細(xì)胞后60 min內(nèi)測(cè)定熒光值。

    2 結(jié)果

    2.1 Na2SiO3對(duì)體外ox-LDL刺激白細(xì)胞生成ROS的作用:加硅各組3 h熒光值和3 h+30 min熒光值均比ox-LDL組降低,其中8.5組(P<0.01)(圖1)。

    圖1 Na2SiO3對(duì)ox-LDL刺激的白細(xì)胞產(chǎn)生ROS的影響Fig 1 The effect of sodium metasilicate on ROS production of PBL stimulated with ox-LDL

    2.2 Na2SiO3對(duì)高脂血癥家兔白細(xì)胞生成ROS的作用:動(dòng)物飼養(yǎng)4周后,正常組家兔血漿總膽固醇濃度2.8 mmol/L,高脂組為10.5 mmol/L,Na2SiO3組為10.8 mmol/L,與高脂組無(wú)差別。

    以60 min內(nèi)最高熒光值,不同家兔組之間比較:3種處理白細(xì)胞方法均顯示,高脂組家兔白細(xì)胞ROS比正常組增加,Na2SiO3組比高脂組顯著下降(圖2A)。相同家兔白細(xì)胞不同處理組之間比較:正常組和高脂組家兔的PMA組ROS比空白組顯著增加,正常組和Na2SiO3組家兔的PMA+Si組比PMA組ROS顯著下降,Na2SiO3組家兔的PMA+Si組比空白組ROS顯著下降(圖2B)。

    圖2 偏硅酸鈉抑制高膽固醇血癥家兔白細(xì)胞ROS的產(chǎn)生Fig 2 Administration of sodium metasilicate to hypercholesteremia rabbits inhibited ROS production of the PBL

    3 討論

    健康家兔白細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)中,3 h熒光值代表ox-LDL刺激3 h后白細(xì)胞內(nèi)ROS量,3 h+30 min熒光值代表在3 h后再次加入ox-LDL 30 min后的ROS量。文獻(xiàn)中觀測(cè)ROS的實(shí)驗(yàn)一般在較短時(shí)間測(cè)定ROS量(0.5~1 h),本實(shí)驗(yàn)觀測(cè)3h以上,8.5組兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)熒光值均比ox-LDL組顯著降低,說(shuō)明從長(zhǎng)時(shí)間累積效應(yīng)看,適當(dāng)濃度的Na2SiO3對(duì)ox-LDL刺激的白細(xì)胞ROS產(chǎn)生具有顯著抑制作用。

    高血脂動(dòng)物的外周血白細(xì)胞處于引爆狀態(tài),表現(xiàn)為PMA刺激后產(chǎn)生的ROS比正常細(xì)胞多。ox-LDL能直接激活白細(xì)胞,即沒(méi)有任何刺激物時(shí)高血脂動(dòng)物ROS也會(huì)比正常白細(xì)胞多。本實(shí)驗(yàn)高脂組家兔的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述相符。Na2SiO3組白細(xì)胞加或不加PMA所產(chǎn)生的ROS均比高脂組下降,而且體外再加Na2SiO3能進(jìn)一步抑制PMA對(duì)白細(xì)胞的刺激作用,表明Na2SiO3可以抑制高脂條件下白細(xì)胞引爆和激活。Na2SiO3組是在家兔形成高血脂后短期飲用Na2SiO3即檢測(cè)ROS,其血脂水平與高脂組無(wú)差異,而ROS比高脂組顯著下降,提示Na2SiO3抑制白細(xì)胞的引爆和激活不是通過(guò)降低血脂,這種獨(dú)立于降血脂的抗炎效應(yīng)對(duì)抑制AS發(fā)生發(fā)展有重要意義。

    [1]Mazor R,Shurtz-Swirski R,F(xiàn)arah R,et al.Primed polymorphonuclear leukocytes constitute a possible link between inflammation and oxidative stress in hyperlipidemic patients[J].Atherosclerosis,2008,197:937 -943.

    [2]黃偉,李麗緯,甄艷軍,等.偏硅酸鈉對(duì)ECV-304細(xì)胞系與單個(gè)核細(xì)胞黏附的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2009,29:796-798.

    R 543

    A

    1001-6325(2012)01-0094-02

    2011-05-26

    2011-11-24

    河北省科技廳科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(08276101D-103)

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