慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與HBsAg和HBeAg水平的相關(guān)性分析*

李筠竹 張振華 張亞飛 蘇 倩 李 旭

我國慢性乙型肝炎（CHB）高發(fā)，乙型肝炎病毒（HBV）感染者約有9300 萬。在CHB 的抗病毒治療過程中，大部分患者HBsAg 和（或）HBeAg 很難轉(zhuǎn)陰。臨床上以HBV DNA、HBsAg 和HBeAg 的轉(zhuǎn)陰作為評價抗病毒療效的指標，但僅定性檢測HBsAg和HBeAg，并不能動態(tài)反應其血清學變化。本研究采用Abbott 化學發(fā)光微粒子免疫分析法測定HBsAg 和 HBeAg 滴度，并分析 HBV DNA 水平與HBsAg 和HBeAg 滴度的相關(guān)性，旨在探討測定HBsAg 和（或）HBeAg 滴度變化來推測HBV DNA水平變化的可行性。

對象與方法

一、研究對象 2010年8月至2011年3月在我科門診及住院的CHB 患者951 例，男743 例，女208 例，年齡 2～80歲，中位數(shù)年齡為 38歲。所有患者的診斷標準均符合2010年修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]。

二、檢測方法 采用FQ-PCR 法檢測血清HBV DNA 水平（上?？迫A生物工程股份有限公司）；HBV DNA 檢測線性范圍為 103～108拷貝 /毫升。將HBV DNA 分成3 組：即＜3 lg 拷貝/毫升、3～7 lg 拷貝/毫升和≥7 lg 拷貝/毫升組；采用CMIA 法檢測 HBsAg 和 HBeAg 滴度（美國 Abbott公司）。根據(jù)試劑盒提供的標準判斷結(jié)果。按照CMIA 檢測試劑說明，將 HBsAg＞0.05IU/mL 和HBeAg≥1.00 S/CO 判為陽性，前者為定量檢測，后者為半定量檢測。

三、統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析，HBV DNA 水平與HBsAg 和HBeAg 水平相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析，多樣本間中位數(shù)比較采用Kruskal-Wallis 檢驗，兩組樣本間中位數(shù)比較采用Mann-Whitney 檢驗，P＜0.05 被認為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

一、血清 HBV DNA 與 HBsAg 和 HBeAg 水平相關(guān)性分析 對951 例患者血清HBV DNA 與HBsAg和HBeAg滴度進行Spearman 秩相關(guān)分析，結(jié)果它們之間具有正相關(guān)性（r=0.45 和 0.49，P＜0.05）。

二、不同HBV DNA 水平患者血清HBsAg 和HBeAg 滴度比較 對HBV DNA 載量分別為＜3 lg拷貝/毫升、3～7 lg 拷貝/毫升和≥7 lg 拷貝/毫升3 組患者血清HBsAg 和HBeAg 滴度進行比較，發(fā)現(xiàn)各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同HBV DNA水平患者血清HBsAg和HBeAg滴度比較

三、不同HBsAg 滴度患者血清HBV DNA 水平比較 將 HBsAg 滴度分成＜1000 IU/ml、1000～10000 IU/mL 和≥10000 IU/mL3 組。三組之間HBV DNA 水平進行比較后發(fā)現(xiàn)，各組之間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，表2）。經(jīng) Spearman 秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，在HBsAg≥10000 IU/ml 組患者，血清HBsAg滴度與 HBV DNA 水平呈正相關(guān)（rS=0.39，P＜0.05）。

表2 不同HBsAg 滴度患者血清HBV DNA 水平比較

討論

血清 HBV DNA 與 HBsAg 和 HBeAg 滴度是否存在相關(guān)性，國內(nèi)外文獻報道不一[2～6]。本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者血清 HBV DNA 與 HBsAg、HBeAg 滴度呈正相關(guān)。分組后顯示，在血清HBV DNA≥7 lg 拷貝/毫升和（或）HBsAg 滴度≥10000 IU/mL 患者下，HBV DNA 水平與HBsAg 滴度具有更好的一致性。在HBV DNA＞3 lg 拷貝/毫升患者，HBV DNA水平與HBeAg 滴度呈正相關(guān)。

血清HBsAg 是HBV 感染的主要標志，常作為乙型肝炎的篩選和診斷。在血清中HBsAg 以小球形顆粒、絲狀或桿狀顆粒和Dane 顆粒三種形式存在，前兩者不含核酸，不具有傳染性，Dane 顆粒為病毒蛋白和部分雙鏈rcDNA 組成，具有很強的傳染性[7]。Deguchi[8]等認為HBsAg 滴度在一定程度上能夠推測HBV DNA 復制水平。本研究結(jié)果顯示，有些患者血清HBV DNA 與HBsAg 滴度不具有相關(guān)性，這可能是因為：（1）在一般情況下，非感染性HBsAg 顆粒與Dane 顆粒比例約為1∶103～105[9]。血清HBsAg滴度測定實際為三種顆?？傮w的滴度，因此，只有雙鏈rcDNA 水平達到一定程度和兩種顆粒比例減小時，血清HBsAg 滴度與HBV DNA 水平才具有正相關(guān)性；（2）所有患者血清HBV DNA 與HBsAg 滴度的相關(guān)性較小，相關(guān)系數(shù)均為0.5 左右。本研究樣本量僅為951 例，且選取患者時未剔除抗病毒治療對HBV DNA 水平的影響因素，部分患者經(jīng)過抗病毒治療后HBV DNA 水平下降，造成病毒載量低的患者兩者無明顯相關(guān)性；（3）HBV DNA＜3 lg 拷貝/毫升組HBV DNA 水平低于最低檢測限，雖有實際測量值，但可能存在假陰性結(jié)果，造成實驗誤差；（4）HBV DNA 載量為 3～7 lg 拷貝 / 毫升時，其中 80.05%（301/376）HBsAg 滴度＜10000 IU/ml，因而與HBV DNA 水平無相關(guān)性。

在HBV 復制過程中，HBeAg 滴度與HBV DNA水平應為正相關(guān)[5]。本研究結(jié)果表明，在HBV DNA載量為3～7lg 拷貝/毫升組和≥7lg 拷貝/毫升組，兩者有相關(guān)性。對于分組后相關(guān)系數(shù)偏低的原因可能是因為：（1）本研究未區(qū)分HBeAg 陽性和HBeAg陰性患者，且部分患者經(jīng)過抗病毒治療后HBeAg 滴度下降；（2）Abbott CMIA 技術(shù)測定 HBeAg 滴度為半定量，可能會造成上述實驗誤差。

本實驗結(jié)果與國內(nèi)外文獻報道有一定的差異，原因可能有以下幾點：（1）檢測試劑靈敏度不同；（2）HBsAg 存在 G145R 等突變[10]；（3）熒光定量 PCR檢測方法存在不足。本研究HBsAg、HBeAg 滴度的測定方法采用美國Abbott CMIA 技術(shù)，試劑靈敏度高，線性范圍寬，是國際公認的定量檢測試劑，且G145R 等變異不影響Abbott 試劑的檢測靈敏度和線性范圍[10]。

有文獻指出，血清HBsAg 滴度測定由于其高度靈敏性及相對準確性，在未來預測及評估抗病毒治療療效中可能會起重要的作用[11]。血清HBeAg 和HBV DNA 水平均可以評估HBV 復制活躍程度，HBeAg 滴度在一定程度上可以推測HBV DNA 水平，且在評估CHB 進展程度上優(yōu)于后者[12，13]。但部分患者血清HBsAg 滴度和HBV DNA 水平在抗病毒治療過程中逐步下降。所以，在HBsAg 滴度和HBV DNA 都為低水平時，要綜合血清HBsAg、HBeAg 滴度和HBV DNA 來評估抗病毒的療效。

CHB 的發(fā)展過程是病毒、細胞和免疫系統(tǒng)相互作用的結(jié)果，監(jiān)測HBsAg 滴度在一定程度上可以反映抗病毒療效，而HBV DNA 水平和HBeAg 滴度都是衡量HBV 活動的一個重要的指標，綜合HBsAg、HBeAg 和HBV DNA 水平能夠更好地評估抗病毒療效。本研究利用美國Abbott 試劑檢測HBsAg、HBeAg 滴度，結(jié)果具有更高的準確性及可靠性，但沒有剔除抗病毒治療的影響，是本研究不足之處，有待于進一步分層研究。

[1]中華醫(yī)學會肝病學分會和感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）.實用肝臟病雜志，2011，14（2）：81-89.

[2]雷建華，楊旭，羅紅雨，等.血清 HBsAg 和HBeAg 陽性乙型肝炎患者HBsAg 滴度與HBV 復制水平的關(guān)系.中南大學學報，2006，31（4）：548-551.

[3]蔡文品，趙春，吳惠潔，等.慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與肝纖維化指標的相關(guān)性.實用醫(yī)學雜志，2009，25（2）：72-73.

[4]Ozdil B，Cosar AM，Akkiz H，et al.Negative correlation between viral load and HBsAg levels in chronic HBV-infected patients.Arch Virol，2009，154（9）:1415-1451.

[5]徐敬軒，謝而付，黃珮珺，等.慢性乙型肝炎患者血清中HBeAg、HBsAg 與 HBV DNA 的關(guān)系.檢驗醫(yī) 學與 臨床，2010，21（7）：2337-2340.

[6]方紅龍，吳金明，江宏峰，等.慢性乙型肝炎患者外周血HBsAg 與 HBV DNA 相關(guān)性分析.實用肝臟病雜志，2011，14（2）：108-109.

[7]Louisirirotchanakul S，Kanoksinsombat C，The amboonlert A，et al.Mutation of the“a”determinant of HBsAg with discordant HBsAg diagnostic kits.Viral Immunol，2004，17（3）:440-441.

[8]Deguchi M，Yamashita N，Kagita M，et al.Quantitation of hepatitis B surface antigen by an automated chem ilum inescent microparticle immunoassay.J Virol Methods，2004，115（2）:217-222.

[9]Moucari R，Marcellin P.Quantification of hepatitis B surface antigen：a new concept for the management of chronic hepatitis B.Liver Int，2011，31（1）:122-128.

[10]Werle lapostolle B，Bowden S，Locamini S，et al.Persistence of cccDNA during the natural history of chronic Hepatitis B decline during adefovir dipivoxil therapy.Gastroenterology，2004，126（7）:1750-1758.

[11]趙秀英.血清HBsAg 定量檢測及探討-從檢驗者角度看HBsAg 定量.北京醫(yī)學，2010，32（7）:216-218.

[12]Liaw Y F.HBeAg seroconversion as an important end point in the treatment of chronic hepatitis B.Hepatol Int，2009，3（3）:425-433.

[13]Yang HI，Lu S N，Liaw YF，et al.Hepatitis B e antigen and the risk of hepatocellular carcinoma.N Engl J Med，2002，347（1）:168-174.