慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平與HBsAg和HBeAg水平的相關(guān)性分析*

李筠竹 張振華 張亞飛 蘇 倩 李 旭

我國(guó)慢性乙型肝炎（CHB）高發(fā)，乙型肝炎病毒（HBV）感染者約有9300 萬(wàn)。在CHB 的抗病毒治療過(guò)程中，大部分患者HBsAg 和（或）HBeAg 很難轉(zhuǎn)陰。臨床上以HBV DNA、HBsAg 和HBeAg 的轉(zhuǎn)陰作為評(píng)價(jià)抗病毒療效的指標(biāo)，但僅定性檢測(cè)HBsAg和HBeAg，并不能動(dòng)態(tài)反應(yīng)其血清學(xué)變化。本研究采用Abbott 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法測(cè)定HBsAg 和 HBeAg 滴度，并分析 HBV DNA 水平與HBsAg 和HBeAg 滴度的相關(guān)性，旨在探討測(cè)定HBsAg 和（或）HBeAg 滴度變化來(lái)推測(cè)HBV DNA水平變化的可行性。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象 2010年8月至2011年3月在我科門(mén)診及住院的CHB 患者951 例，男743 例，女208 例，年齡 2～80歲，中位數(shù)年齡為 38歲。所有患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合2010年修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]。

二、檢測(cè)方法 采用FQ-PCR 法檢測(cè)血清HBV DNA 水平（上?？迫A生物工程股份有限公司）；HBV DNA 檢測(cè)線性范圍為 103～108拷貝 /毫升。將HBV DNA 分成3 組：即＜3 lg 拷貝/毫升、3～7 lg 拷貝/毫升和≥7 lg 拷貝/毫升組；采用CMIA 法檢測(cè) HBsAg 和 HBeAg 滴度（美國(guó) Abbott公司）。根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。按照CMIA 檢測(cè)試劑說(shuō)明，將 HBsAg＞0.05IU/mL 和HBeAg≥1.00 S/CO 判為陽(yáng)性，前者為定量檢測(cè)，后者為半定量檢測(cè)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，HBV DNA 水平與HBsAg 和HBeAg 水平相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析，多樣本間中位數(shù)比較采用Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)，兩組樣本間中位數(shù)比較采用Mann-Whitney 檢驗(yàn)，P＜0.05 被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、血清 HBV DNA 與 HBsAg 和 HBeAg 水平相關(guān)性分析 對(duì)951 例患者血清HBV DNA 與HBsAg和HBeAg滴度進(jìn)行Spearman 秩相關(guān)分析，結(jié)果它們之間具有正相關(guān)性（r=0.45 和 0.49，P＜0.05）。

二、不同HBV DNA 水平患者血清HBsAg 和HBeAg 滴度比較 對(duì)HBV DNA 載量分別為＜3 lg拷貝/毫升、3～7 lg 拷貝/毫升和≥7 lg 拷貝/毫升3 組患者血清HBsAg 和HBeAg 滴度進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同HBV DNA水平患者血清HBsAg和HBeAg滴度比較

三、不同HBsAg 滴度患者血清HBV DNA 水平比較 將 HBsAg 滴度分成＜1000 IU/ml、1000～10000 IU/mL 和≥10000 IU/mL3 組。三組之間HBV DNA 水平進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表2）。經(jīng) Spearman 秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，在HBsAg≥10000 IU/ml 組患者，血清HBsAg滴度與 HBV DNA 水平呈正相關(guān)（rS=0.39，P＜0.05）。

表2 不同HBsAg 滴度患者血清HBV DNA 水平比較

討論

血清 HBV DNA 與 HBsAg 和 HBeAg 滴度是否存在相關(guān)性，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道不一[2～6]。本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者血清 HBV DNA 與 HBsAg、HBeAg 滴度呈正相關(guān)。分組后顯示，在血清HBV DNA≥7 lg 拷貝/毫升和（或）HBsAg 滴度≥10000 IU/mL 患者下，HBV DNA 水平與HBsAg 滴度具有更好的一致性。在HBV DNA＞3 lg 拷貝/毫升患者，HBV DNA水平與HBeAg 滴度呈正相關(guān)。

血清HBsAg 是HBV 感染的主要標(biāo)志，常作為乙型肝炎的篩選和診斷。在血清中HBsAg 以小球形顆粒、絲狀或桿狀顆粒和Dane 顆粒三種形式存在，前兩者不含核酸，不具有傳染性，Dane 顆粒為病毒蛋白和部分雙鏈rcDNA 組成，具有很強(qiáng)的傳染性[7]。Deguchi[8]等認(rèn)為HBsAg 滴度在一定程度上能夠推測(cè)HBV DNA 復(fù)制水平。本研究結(jié)果顯示，有些患者血清HBV DNA 與HBsAg 滴度不具有相關(guān)性，這可能是因?yàn)椋海?）在一般情況下，非感染性HBsAg 顆粒與Dane 顆粒比例約為1∶103～105[9]。血清HBsAg滴度測(cè)定實(shí)際為三種顆?？傮w的滴度，因此，只有雙鏈rcDNA 水平達(dá)到一定程度和兩種顆粒比例減小時(shí)，血清HBsAg 滴度與HBV DNA 水平才具有正相關(guān)性；（2）所有患者血清HBV DNA 與HBsAg 滴度的相關(guān)性較小，相關(guān)系數(shù)均為0.5 左右。本研究樣本量?jī)H為951 例，且選取患者時(shí)未剔除抗病毒治療對(duì)HBV DNA 水平的影響因素，部分患者經(jīng)過(guò)抗病毒治療后HBV DNA 水平下降，造成病毒載量低的患者兩者無(wú)明顯相關(guān)性；（3）HBV DNA＜3 lg 拷貝/毫升組HBV DNA 水平低于最低檢測(cè)限，雖有實(shí)際測(cè)量值，但可能存在假陰性結(jié)果，造成實(shí)驗(yàn)誤差；（4）HBV DNA 載量為 3～7 lg 拷貝 / 毫升時(shí)，其中 80.05%（301/376）HBsAg 滴度＜10000 IU/ml，因而與HBV DNA 水平無(wú)相關(guān)性。

在HBV 復(fù)制過(guò)程中，HBeAg 滴度與HBV DNA水平應(yīng)為正相關(guān)[5]。本研究結(jié)果表明，在HBV DNA載量為3～7lg 拷貝/毫升組和≥7lg 拷貝/毫升組，兩者有相關(guān)性。對(duì)于分組后相關(guān)系數(shù)偏低的原因可能是因?yàn)椋海?）本研究未區(qū)分HBeAg 陽(yáng)性和HBeAg陰性患者，且部分患者經(jīng)過(guò)抗病毒治療后HBeAg 滴度下降；（2）Abbott CMIA 技術(shù)測(cè)定 HBeAg 滴度為半定量，可能會(huì)造成上述實(shí)驗(yàn)誤差。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道有一定的差異，原因可能有以下幾點(diǎn)：（1）檢測(cè)試劑靈敏度不同；（2）HBsAg 存在 G145R 等突變[10]；（3）熒光定量 PCR檢測(cè)方法存在不足。本研究HBsAg、HBeAg 滴度的測(cè)定方法采用美國(guó)Abbott CMIA 技術(shù)，試劑靈敏度高，線性范圍寬，是國(guó)際公認(rèn)的定量檢測(cè)試劑，且G145R 等變異不影響Abbott 試劑的檢測(cè)靈敏度和線性范圍[10]。

有文獻(xiàn)指出，血清HBsAg 滴度測(cè)定由于其高度靈敏性及相對(duì)準(zhǔn)確性，在未來(lái)預(yù)測(cè)及評(píng)估抗病毒治療療效中可能會(huì)起重要的作用[11]。血清HBeAg 和HBV DNA 水平均可以評(píng)估HBV 復(fù)制活躍程度，HBeAg 滴度在一定程度上可以推測(cè)HBV DNA 水平，且在評(píng)估CHB 進(jìn)展程度上優(yōu)于后者[12，13]。但部分患者血清HBsAg 滴度和HBV DNA 水平在抗病毒治療過(guò)程中逐步下降。所以，在HBsAg 滴度和HBV DNA 都為低水平時(shí)，要綜合血清HBsAg、HBeAg 滴度和HBV DNA 來(lái)評(píng)估抗病毒的療效。

CHB 的發(fā)展過(guò)程是病毒、細(xì)胞和免疫系統(tǒng)相互作用的結(jié)果，監(jiān)測(cè)HBsAg 滴度在一定程度上可以反映抗病毒療效，而HBV DNA 水平和HBeAg 滴度都是衡量HBV 活動(dòng)的一個(gè)重要的指標(biāo)，綜合HBsAg、HBeAg 和HBV DNA 水平能夠更好地評(píng)估抗病毒療效。本研究利用美國(guó)Abbott 試劑檢測(cè)HBsAg、HBeAg 滴度，結(jié)果具有更高的準(zhǔn)確性及可靠性，但沒(méi)有剔除抗病毒治療的影響，是本研究不足之處，有待于進(jìn)一步分層研究。

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