不同干燥加工方法對(duì)知母化學(xué)成分含量的影響

郭曉曄楊東升馬長(zhǎng)華王文全黃建梅尹玉山

（1北京市宣武中醫(yī)院藥劑科，北京100050；2北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，100102；3易縣太行植物開(kāi)發(fā)有限公司，河北保定，074200）

不同干燥加工方法對(duì)知母化學(xué)成分含量的影響

郭曉曄1楊東升2馬長(zhǎng)華2王文全2黃建梅2尹玉山3

（1北京市宣武中醫(yī)院藥劑科，北京100050；2北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，100102；3易縣太行植物開(kāi)發(fā)有限公司，河北保定，074200）

目的：揭示各種干燥加工方法對(duì)知母有效成分含量的影響。方法：分別采用曬干、陰干、烘干、遠(yuǎn)紅外干燥、微波干燥的方法對(duì)知母進(jìn)行干燥加工，以菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷、新芒果苷為指標(biāo)，通過(guò)高效液相色譜法（HPLC），分析各種干燥加工條件下知母中各類(lèi)指標(biāo)成分的含量變化情況。其中菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ采用高效液相蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLC-ELSD）進(jìn)行檢測(cè)，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量，芒果苷、新芒果苷采用高效液相紫外檢測(cè)法（HPLC-UV）檢測(cè)。結(jié)果：采用烘干、遠(yuǎn)紅外干燥、微波干燥方法加工后，知母菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷含量與曬干、陰干相比均有不同程度上升，新芒果苷含量與曬干、陰干相比有所下降。結(jié)論：從有效成分保存方面考慮，不同干燥方法的優(yōu)劣順序?yàn)槲⒉ǜ稍铮具h(yuǎn)紅外干燥＞烘干＞曬干≈陰干。

知母；干燥加工；菝葜皂苷元；知母皂苷AⅢ；芒果苷；新芒果苷

知母為百合科知母屬多年生草本植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖[1]，具有清熱瀉火、生津潤(rùn)燥的功效，主要用于外感熱病，高熱煩渴，肺熱燥咳，骨蒸潮熱，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘等癥。為探討干燥加工方法對(duì)知母主要化學(xué)成分的影響，本研究考察了采用不同干燥加工方法時(shí)知母的化學(xué)成分含量，為實(shí)際生產(chǎn)中選擇知母合理的干燥加工方法提供依據(jù)。

1 儀器與材料

ESA高效液相色譜儀，ESA蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國(guó) ESA）；Agilent1100高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫），配置：高效液相色譜泵、紫外檢測(cè)器；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗機(jī) （昆山市超聲儀器有限公司）；HH-6型恒溫水浴鍋（江蘇國(guó)華電器有限公司）；DF205電熱鼓風(fēng)干燥箱 （北京京通儀器廠），70-1型遠(yuǎn)紅外干燥箱 （上海申光儀器儀表有限公司），MG-5021TW1型微波爐（LG）。

菝葜皂苷元對(duì)照品購(gòu)自原中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：110744-200306，含量測(cè)定用），知母皂苷AⅢ對(duì)照品購(gòu)自天津中新藥業(yè)中藥現(xiàn)代化技術(shù)工程中心（批號(hào)：0701119，含量測(cè)定用）。新芒果苷對(duì)照品購(gòu)自天津中新藥業(yè)中藥現(xiàn)代化技術(shù)工程中心（批號(hào)：ZWY0801-4-2，含量測(cè)定用），芒果苷對(duì)照品購(gòu)自原中國(guó)藥品生物制品檢定所 （批號(hào)：111607-200301，含量測(cè)定用）。水為娃哈哈純凈水，甲醇、乙腈為色譜純（FISHER），其余試劑均為分析純（北京化工廠）。

知母樣品采自易縣西陵知母規(guī)范化生產(chǎn)基地同一種植地塊，根莖用微濕潤(rùn)的毛刷仔細(xì)洗凈泥土后切片，切片厚度為3～5 mm。

2 方法與結(jié)果

2.1 干燥加工方法[2]

陰涼通風(fēng)處晾干表面水分，按以下方法分別進(jìn)行干燥加工，每種方法平行重復(fù)3次，每次200 g，分別記錄干燥所用時(shí)間。

2.1.1 曬干 取藥材切片直接置日光下晾曬至干，白天每隔3 h翻動(dòng)1次。

2.1.2 陰干 取藥材切片置室內(nèi)陰涼通風(fēng)處晾干，白天每隔3 h翻動(dòng)1次。

2.1.3 烘干 將藥材切片平鋪于搪瓷盤(pán)中，置電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干，烘干溫度分別為80℃、60℃、40℃。

2.1.4 遠(yuǎn)紅外干燥 將藥材切片平鋪于搪瓷盤(pán)中，置遠(yuǎn)紅外干燥箱中烘干。

2.1.5 微波干燥 將藥材切片均勻碼放在微波爐專(zhuān)用托盤(pán)周?chē)蜏? min后，溫火20 min干燥。所有樣品均干燥至能達(dá)到質(zhì)硬而脆，易掰斷，斷面黃白色、無(wú)焦斑的標(biāo)準(zhǔn)為止。各干燥加工方法干燥時(shí)間見(jiàn)表1。

表1 各種干燥方法所用干燥時(shí)間

2.2 各成分含量測(cè)定方法

2.2.1 菝葜皂苷元測(cè)定方法[3-6]

2.2.1.1 色譜條件 KromasilC18柱（250mm×4.6mm，5 μm，大連依利特）。流動(dòng)相∶甲醇，流速1.0 mL/min。柱溫為室溫，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器漂移管溫度為50℃，蒸發(fā)溫度為70℃，以氮?dú)鉃殪F化氣，壓力為137.9 kPa，在此條件下，菝葜皂苷元保留時(shí)間為6.9 min。

2.2.1.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱(chēng)取干燥至恒重的菝葜皂苷元對(duì)照品適量，置容量瓶中，甲醇溶解定容，配制成濃度為0.267 2 mg/mL的對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.2.1.3 供試品溶液的制備 取藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5 g，精密稱(chēng)定，置25 mL容量瓶中，加入95%乙醇浸泡過(guò)夜。超聲波振蕩40 min，取出放涼后乙醇定容，過(guò)濾，取續(xù)濾液10 mL置圓底燒瓶中，蒸干乙醇，加入濃鹽酸 1.5 mL，水 10 mL，水蒸氣回流水解2 h。水解液放涼后，滴加40%氫氧化鈉溶液至由黃色突變?yōu)槌燃t色。用三氯甲烷30 mL萃取兩次，合并萃取液，回三氯甲烷仿至干。殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，甲醇定容后用0.45 μm針頭過(guò)濾器過(guò)濾，即得。

2.2.1.4 方法學(xué)考察 經(jīng)實(shí)驗(yàn)考察，線性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率均符合要求。

2.2.2 知母皂苷AⅢ測(cè)定方法[7]

2.2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特）。流動(dòng)相∶甲醇-水（85∶15），流速1.0 mL/min。柱溫為室溫，檢測(cè)器漂移管溫度為50℃，蒸發(fā)溫度為70℃，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器以氮?dú)鉃殪F化氣，氣體壓力為137.9 kPa，在此條件下，知母皂苷AⅢ的保留時(shí)間為11.6 min。

2.2.2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱(chēng)取干燥至恒重的知母皂苷AⅢ 對(duì)照品適量，置容量瓶中，甲醇溶解定容，配制成濃度為0.149 mg/mL的對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.2.2.3 供試品溶液的制備 取藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5 g，精密稱(chēng)定，置25 mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，浸泡過(guò)夜。超聲波振蕩 40 min，放涼后用80%乙醇定容。搖勻靜置后，取上清液經(jīng)0.45 μm針頭過(guò)濾器過(guò)濾，即得。

2.2.2.4 方法學(xué)考察 經(jīng)實(shí)驗(yàn)考察，線性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率均符合要求。

2.2.3 新芒果苷和芒果苷測(cè)定方法[8-10]

2.2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Hypersil C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm，大連依利特）。流動(dòng)相：乙腈-0.2%冰醋酸（10∶90），流速1 mL/min。柱溫為室溫。檢測(cè)波長(zhǎng)：258 nm。在此條件下，新芒果苷保留時(shí)間為5.4 min，芒果苷保留時(shí)間為11.6 min。

2.2.3.2 對(duì)照品溶液的配置 精密稱(chēng)取干燥至恒重的新芒果苷對(duì)照品和芒果苷對(duì)照品適量，加30%甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中定容，配制成新芒果苷和芒果苷濃度分別為0.104 7 mg/mL和0.053 5 mg/mL對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.2.3.3 供試品溶液的制備 取藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.2 g，精密稱(chēng)定，置25 mL容量瓶中，加入80%乙醇至刻度，浸泡過(guò)夜。超聲處理40 min，取出放涼后，80%乙醇定容。過(guò)濾，取上清液經(jīng)0.45 μm針頭過(guò)濾器過(guò)濾，即得。

2.2.3.4 方法學(xué)考察 經(jīng)實(shí)驗(yàn)考察，線性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率均符合要求。

2.3 不同干燥加工方法知母各成分含量測(cè)定結(jié)果

將干燥加工后的藥材切片粉碎，過(guò)三號(hào)篩作為測(cè)定用樣品，對(duì)樣品進(jìn)行化學(xué)成分含量測(cè)定，3次測(cè)定結(jié)果取平均值，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各干燥方法知母有效成分含量測(cè)定（±s，n=3）（mg/g）

表2 各干燥方法知母有效成分含量測(cè)定（±s，n=3）（mg/g）

類(lèi)別 菝葜皂苷元 知母皂苷AⅢ 新芒果苷 芒果苷曬干 8.33±1.01 2.22±0.28 13.08±0.76 4.47±0.44陰干 8.92±0.23 2.00±0.17 13.04±0.52 4.64±0.07 80℃烘干 11.15±0.55 2.73±0.14 10.79±0.21 7.27±0.32 60℃烘干 10.15±0.27 2.30±0.19 12.13±0.32 5.36±1.14 40℃烘干 10.03±0.44 2.42±0.09 10.88±0.58 6.08±0.10遠(yuǎn)紅外干燥 11.13±0.77 2.78±0.25 10.73±0.44 8.98±0.35微波干燥 10.65±0.48 2.34±0.15 12.06±0.33 9.98±0.26

3 討論

儀器快速干燥方法加工的知母菝葜皂苷元、知母皂苷AⅢ、芒果苷含量均高于傳統(tǒng)曬干、陰干方法干燥的知母，且3種成分在各干燥方法中的變化規(guī)律相近。菝葜皂苷元、芒果苷為80℃烘干、遠(yuǎn)紅外干燥、微波干燥含量最高，其次為60℃烘干和40℃烘干，曬干和陰干含量最低；知母皂苷AⅢ為80℃烘干、遠(yuǎn)紅外干燥含量最高，其次為60℃烘干、40℃烘干和微波干燥，曬干和陰干含量最低。新芒果苷含量在各干燥方法中的變化規(guī)律與芒果苷基本相反，曬干和陰干含量最高，經(jīng)儀器干燥加工后含量降低。根據(jù)分子式推斷，可能是由于新芒果苷上的糖苷基對(duì)熱不穩(wěn)定，加熱干燥過(guò)程中容易斷裂轉(zhuǎn)化為芒果苷。整體上可以在不同方法之間比較二者總量：曬干、陰干、80℃、60℃、40℃烘干條件下新芒果苷、芒果苷含量之和相差甚微，遠(yuǎn)紅外干燥和微波干燥方法含量之和有所上升?？傮w上，使用人工儀器快速干燥能起到殺酶保苷的作用，能有效防止知母皂苷類(lèi)、黃酮苷類(lèi)等成分的流失，從而最大限度地保證了知母皂苷類(lèi)和黃酮苷類(lèi)的含量。從有效成分保存方面考慮，不同干燥方法的優(yōu)劣順序?yàn)槲⒉ǜ稍铮具h(yuǎn)紅外干燥＞烘干＞曬干≈陰干。

從干燥時(shí)間上進(jìn)行分析：陰干和曬干用時(shí)較長(zhǎng)，且這兩種干燥方法容易受天氣變化影響；烘干時(shí)間隨溫度高低而不同，為數(shù)小時(shí)，80℃烘干雖然用時(shí)較短且有效成分含量較高，但實(shí)際操作時(shí)易產(chǎn)生焦斑，權(quán)衡有效成分保留情況和用時(shí)長(zhǎng)短，以60℃為宜；遠(yuǎn)紅外干燥時(shí)間較短；微波干燥知母用時(shí)最短，這跟微波加熱時(shí)知母內(nèi)部水分快速透出有關(guān)，但具體操作時(shí)對(duì)藥材飲片形狀、厚度以及時(shí)間、溫度等技術(shù)控制比較嚴(yán)格[11]。

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The Influence of Different Drying Techniques for the Contents of Effective Ingredients in Rhizoma Anemarrhenae

Guo Xiaoye1，Yang Dongsheng2，Ma Changhua2，Wang Wenquan2，Huang Jianmei1，Yin Yushan3（1 Pharmacy Department of Beijing Xuanwu TCM Hospital，Beijing 100050，China;2 Traditional Chinese Medicine College of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102;3 Taihang Plant Development Co.，Ltd.of Yi County，Hebei Baoding 074200）

Objective:To study the influence of different dry techniques for the contents of effective ingredients in rhizoma anemarrhenae.Methods:Fresh rhizoma anemarrhenae was dried with different techniques，such as drying in the sun，drying in the shade，drying in the oven，far-infrared drying and microwave drying，and the contents of the effective ingredients such as sarsasapogenin，anemasaponin AⅢ，neomangiferin and mangiferin were determined by the validated procedure of HPLC.In this study，HPLC-ELSD and two-points external standard methods were employed for the content determination of sarsasapongenin and anemasaponin AⅢ，and HPLC-UV and external standard methods used for the content determination of mangiferin and neomangiferin.Results:Compared with other drying techniques such as drying in the sun or in the shade，higher contents of sarsasapogenin，anemasaponin AⅢand mangiferin were obtained when the samples processed by drying in the oven，far-infrared drying or microwave drying，while the content of neomangiferin was lower.Conclusion:For the sake of retaining effective ingredients and taking into consideration of the advantages of different drying techniques，microwave drying，far-infrared drying and drying in the oven can be used preferably other than drying in the sun or in the shade.

Rhizoma Anemarrhenae；Drying Techniques；Sarsasapogenin；Anemasaponin AⅢ；Neomangiferin；Mangiferin

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.10.004

2012-03-11）

國(guó)家科技支撐計(jì)劃子課題（2006BAI06A15-5）

郭曉曄，女，碩士，中藥師。研究方向：中藥分析。E-mail：guoxiaoye@126.com

馬長(zhǎng)華，男，教授。研究方向：中藥質(zhì)量控制方法學(xué)研究。通訊作者E-mail：machanghua60@sina.com