貝前列素鈉對糖尿病大鼠相關(guān)炎癥因子的影響

李 潔, 王揚(yáng)天, 彭 麗, 王 堅(jiān), 馮曉云, 劉志民

（1第二軍醫(yī)大學(xué)南京臨床醫(yī)學(xué)院內(nèi)分泌科, 南京 210002; 2第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長征醫(yī)院內(nèi)分泌科，上海 200003）

2型糖尿病是一種低度慢性、亞臨床性和非特異性的炎癥狀態(tài)[1-3]。研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者血清中白細(xì)胞介素 6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α)、髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、超敏C反應(yīng)蛋白（high sensitive-C reactive protein, hs-CRP）等炎癥標(biāo)志物水平增高，而這些炎癥因子的變化對評估預(yù)測糖尿病發(fā)生發(fā)展、并發(fā)癥的嚴(yán)重程度和臨床治療效果具有重要的參考價(jià)值[4-6]。前列環(huán)素是1976年發(fā)現(xiàn)的一種主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生的物質(zhì)，它是花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，具有強(qiáng)烈的抗血小板和血管擴(kuò)張作用，但前列環(huán)素有化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定、半衰期短、口服給藥效果差等缺點(diǎn)。貝前列素鈉避免了上述不足，是全球首個(gè)口服給藥的前列環(huán)素前體藥物[7,8]。本研究擬觀察貝前列素鈉對糖尿病大鼠炎癥因子的影響及抗炎癥作用，以期為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物模型和分組

雄性健康無特定病原體(SPF)級 Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量（160±109）g，60只，購自中國科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動物中心。實(shí)驗(yàn)分以下 3組：（1）正常對照組10只。（2） 糖尿病組和貝前列素鈉組大鼠給予高脂飼料，喂養(yǎng)4周，誘發(fā)出胰島素抵抗模型后一次性給予鏈脲佐菌素 30 mg/kg腹腔注射；血糖穩(wěn)定 1周后測得 2次隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L，2型糖尿病造模成功。（3）貝前列素鈉組， 10只糖尿病大鼠，按照0.6mg/（kg·d）每日 9∶00灌胃給藥，最終納入實(shí)驗(yàn)各組 6只（主要由于高血糖酮癥、灌胃所致死亡）。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

貝前列素鈉（德納，安斯泰來制藥贈送），IL-6、TNF-α、MPO、hs-CRP試劑盒購于南京建成生物工程研究所。

1.3 標(biāo)本采集方法

給藥8周后處死大鼠，處死前，以 4 mg/kg的10%水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉后腹主動脈采血，10 000 r/min離心15min，離心后取上清液檢測IL-6,TNF-α，MPO，hs-CRP水平，嚴(yán)格按照試劑盒操作說明書檢測。

1.4 觀察指標(biāo)的檢測

應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析雙抗體夾心法（ELISA）檢測大鼠IL-6、hs-CRP、TNF-α水平，應(yīng)用比色法檢測MPO。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有計(jì)量資料采用±s表示，采用 SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析, 兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 一般狀態(tài)與模型評價(jià)

正常對照組大鼠表現(xiàn)為飲食、飲水及活動正常，毛色光亮，體質(zhì)量增長迅速；糖尿病組大鼠出現(xiàn)顯著的多飲、多尿、多食，毛色凌亂無光澤，精神較萎靡、不活潑，體質(zhì)量增長緩慢；貝前列素鈉組大鼠較糖尿病組精神好，毛色干凈，反應(yīng)靈敏、好斗。

2.2 三組大鼠炎癥因子比較

表1結(jié)果表明，與正常對照組比較，糖尿病組大鼠IL-6, TNF-α，MPO，hs-CRP顯著升高（P＜0.01）。貝前列素鈉干預(yù)8周后，IL-6, TNF-α, MPO，hs-CRP明顯下降（P＜0.05，P＜0.01）。

表1 3組大鼠炎癥因子(IL-6, hs-CRP, TNF-α, MPO)指標(biāo)比較Table 1 Comparison of IL-6, hs-CRP, TNF-α and MPO between three groups (n＝6,±s)

表1 3組大鼠炎癥因子(IL-6, hs-CRP, TNF-α, MPO)指標(biāo)比較Table 1 Comparison of IL-6, hs-CRP, TNF-α and MPO between three groups (n＝6,±s)

注: IL-6: 白細(xì)胞介素-6; hs-CRP: 超敏C反應(yīng)蛋白; TNF-α: 腫瘤壞死因子α; MPO: 髓過氧化物酶。與正常對照組比較, *P＜0.05,**P＜0.01; 與糖尿病組比較, #P＜0.05, ##P＜0.01

組別 IL-6(ng/L) hs-CRP(μg/L) TNF-α(ng/L) MPO(U/L)正常對照組 27.4±1.1 1.78±0.28 44±3 25±13糖尿病組 51.8±4.2** 2.44±0.09** 88±7** 163±23**貝前列素鈉組 46.4±5.1**# 2.05±0.14*## 69±5**## 119±28**##

3 討 論

糖尿病已成了危害人類健康的最大兇手之一，許多相關(guān)文獻(xiàn)闡明，糖尿病及其血管病變是炎癥性疾病，這種炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是一種亞臨床炎癥，是處在感染性和自身免疫性炎癥水平以下的炎癥，這種炎癥反應(yīng)進(jìn)一步導(dǎo)致胰島素抵抗、胰島β細(xì)胞損傷和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂，從而對糖尿病及其慢性血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展起著重要作用。血管活性物質(zhì)如貝前列素鈉可對糖尿病并發(fā)癥產(chǎn)生有益的影響[9]

近年研究表明，促炎癥因子在2型糖尿病及其并發(fā)癥動脈粥樣硬化（artherosclerosis，AS）相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制中起十分重要的作用[10,11]。內(nèi)臟脂肪細(xì)胞會產(chǎn)生多種促炎癥因子，啟動胰島素抵抗（IR），并使肝臟合成CRP，CRP是主要由肝臟產(chǎn)生的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，主要受脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子如IL-6、TNF-α的調(diào)節(jié)。CRP是AS炎癥反應(yīng)的主要標(biāo)志物。在眾多促炎癥因子中， TNF-α還能誘導(dǎo) IL-6、前列腺素等其他促炎癥因子的合成和分泌[12]。MPO是活化的中性粒細(xì)胞分泌的過氧化物酶類，研究證實(shí)，MPO與炎癥及心血管疾病有關(guān)，能加速內(nèi)皮功能不全，促進(jìn)血小板聚集和血栓形成，加速易損斑塊的形成和破裂[13,14]；同時(shí)，還促進(jìn)膽固醇在血管壁的沉積，破壞高密度脂蛋白膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)作用[15]。

在本研究中2型糖尿病大鼠表現(xiàn)為肥胖、多飲、多食等特征。給予貝前列素鈉進(jìn)行干預(yù)治療，大鼠多飲、多食癥狀有所改善，本研究全面觀察了各組大鼠炎癥因子指標(biāo)，包括 IL-6、TNF-α、MPO、hs-CRP。研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，糖尿病組大鼠IL-6、hs-CRP、TNF-α、MPO水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示2型糖尿病機(jī)體炎癥因子生成增加，炎癥損傷嚴(yán)重。貝前列素鈉組與糖尿病組大鼠比較，IL-6、hs-CRP、TNF-α、MPO水平降低明顯（P＜0.05，P＜0.01）。研究提示貝前列素鈉可抑制炎癥因子生成，改善血管內(nèi)皮功能，延緩糖尿病血管病變的發(fā)生。貝前列素鈉是一種新型的具有穩(wěn)定活性的前列環(huán)素類似物，具有抗血小板和促進(jìn)血管擴(kuò)張的特性，口服進(jìn)入體內(nèi)后，其藥理作用和前列環(huán)素完全相同，而且避免了靜脈應(yīng)用時(shí)血壓降低的不良反應(yīng)，更易為患者接受，便于長期服用。本研究證實(shí)貝前列素鈉具有顯著的抗炎作用，為臨床上對2型糖尿病慢性炎癥損傷的治療提供了新的思路。

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