4種梅毒血清學檢測方法聯(lián)合檢測的應(yīng)用價值

周守容 鄧安彥 陳華平 吳春磊 穆萬洋 劉 敏

川北醫(yī)學院第二臨床醫(yī)學院南充市中心醫(yī)院輸血科，四川省南充市 637000

梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性傳播疾病。主要通過性接觸傳播，也可通過母嬰傳播和輸血傳播。近年來梅毒的發(fā)病率在我國呈明顯上升趨勢，由于其病程長、危害性大，因此對梅毒的早期診斷和及時治療顯得十分重要。梅毒血清學試驗的方法大致可分為兩大類：非特異性的血清篩選試驗和特異性血清篩選試驗。大量研究表明，TPELISA檢測方法具有靈敏度高、特異性強和總符合率好等優(yōu)點，適用于大批量標本的檢測，可作為較理想的篩查試驗。本研究使用ELISA法對患者標本進行初篩，陽性者再作SYP、TPPA和TRUST檢測，通過對結(jié)果進行綜合比較、分析，探討使用上述4種方法進行聯(lián)合檢測的應(yīng)用價值，從而為臨床提供更可靠、更準確的結(jié)果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標本來自2011年1－9月本院術(shù)前、輸血前需要檢測TP－Ab的患者以及門診、體檢病人，共18 468例。

1.2 設(shè)備與試劑 ELISA試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供。TPPA試劑盒由富士瑞必歐株式會所提供。SYP試劑盒由艾康生物技術(shù)（杭州）有限公司提供。TRUST試劑盒由上海榮盛生物藥業(yè)有限公司提供。儀器有Biocell 2010型酶標儀、深圳匯松產(chǎn)PW－960型洗板機、SHH.W21型電子恒溫水箱、KJ－201BD型振蕩器。

1.3 方法 采用ELISA法對所有標本進行檢測，陽性者同時進行SYP、TRUST、TPPA進行檢測，所有操作嚴格按照試劑說明書進行。

2 結(jié)果

2.1 在18 468例樣本中，經(jīng)ELISA法檢測為陽性共621例。對621例陽性樣本，經(jīng)TPPA法、SYP法、TRUST法檢測后顯示：TPPA陽性例數(shù)為566例，與ELISA法的符合率為91.1%，SYP陽性例數(shù)為575例，與 ELISA 法 的 符 合 率 為92.6%，TRUST陽性例數(shù)為158例（見表1）。

2.2 根據(jù)ELISA檢測的原始吸光度值，將621例標本分為低（OD＜0.5）、中（0.5＜OD＜1.0）、高吸光度組（OD＞1.0），與TPPA檢測結(jié)果進行比較。在ELISA檢測低吸光度組中，經(jīng)TPPA確認陽性比例為83/132，中、高吸光度組中經(jīng)TPPA確認陽性比例分別為182/188和300/301。ELISA、TPPA的檢測結(jié)果見表2。

表1 4種梅毒血清學檢測方法的檢測結(jié)果（n）

表2 2種梅毒血清學檢測方法的檢測結(jié)果

3 討論

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種性傳播疾病，主要通過性接觸傳播，也可通過母嬰傳播和輸血傳播。人體在感染了梅毒螺旋體后會產(chǎn)生特異性抗螺旋體類抗體及非特異的抗類脂質(zhì)性抗體。

TP－ELISA檢驗方法是近年來較為推崇的梅毒血清學檢測方法。TP－ELISA雙抗原夾心法以基因重組的特異性梅毒螺旋體抗原包被酶聯(lián)反應(yīng)板，不易發(fā)生非特異性反應(yīng)，因此假陽性率低，也不易出現(xiàn)因治療而造成的漏檢。它具有敏感性高、特異性好、操作簡便、可實現(xiàn)自動化、判斷結(jié)果客觀準確、價格適中等優(yōu)點，在臨床上應(yīng)用普遍，是目前梅毒血清學診斷試驗的首選方法［1］。但是在某些生理或病理因素的影響下，特異的梅毒血清學試驗也有一定的假陽性率，據(jù)文獻報道，妊娠、晚期腫瘤或老年人均可出現(xiàn)梅毒血清反應(yīng)假陽性，這種陽性結(jié)果可持續(xù)數(shù)月、數(shù)年、甚至終身［2］。此外，由于操作因素引起TP－Ab檢測出現(xiàn)假陽性的情況見于：洗滌過程中有溢出現(xiàn)象，標本間出現(xiàn)交叉污染；或者洗滌不充分使酶試劑殘留［3］。因此，本院在選擇梅毒血清學試驗時，以TP－ELISA作為篩查試驗，結(jié)果呈陽性時再作TPPA、TRUST、SYP。

SYP法是利用免疫層析分析的原理檢測血清中的特異性抗體，其操作簡單，檢測快速，靈敏度高。從表1可以看出，SYP法與TP－ELISA法陽性符合率非常高，由此，當TP－ELISA法篩查為陽性且結(jié)果處于中、高吸光度組時，應(yīng)先作SYP，觀察二者的結(jié)果是否一致，尤其是ELISA法OD值＞1，而SYP法為陰性時，應(yīng)謹慎對待，需考慮標本是否有誤加的可能，注意核實。

TPPA是用梅毒螺旋體毒株制成抗原，包被在明膠顆粒上，檢測其抗體。因此，特異性好、靈敏度高，目前被公認為首選的梅毒血清學確證試驗［4］。但其依賴進口，價格是國產(chǎn)ELISA試劑的3倍。檢測時需將標本進行系列稀釋，不利于大批量標本檢測。并且對實驗人員的技術(shù)要求較高，通過肉眼觀察進行結(jié)果的判定，受人為因素影響較大。根據(jù)表2的數(shù)據(jù)顯示：與中、高吸光度組相比，當TP－Ab處于低吸光度組時，TPPA確認為陰性的比例較高，此時可適當降低TPPA滴度，一般稀釋到1∶320即可，避免試劑的浪費。

甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）主要檢測血清中的抗心磷脂抗體（反應(yīng)素），屬于非特異性試驗，TRUST試驗隨梅毒治愈可轉(zhuǎn)陰，故TRUST試驗一般用于梅毒篩查和療效觀察、復(fù)發(fā)判斷指標［5，6］。在這一點上，ELISA法和TPPA均無法比擬。對已確診的梅毒患者，只需進行TRUST即可［7］。

當然，目前PCR方法是梅毒診斷中的高特異、敏感的分子生物學方法，在檢測早期梅毒、免疫功能低下的梅毒（如伴艾滋病）、先天性梅毒、神經(jīng)性梅毒及判斷再感染和復(fù)發(fā)、區(qū)分其他螺旋體感染等方面有十分重要價值［8］。目前PCR檢測Tp主要的靶基因有 TP47、polA、16SrRNA、tpf－1、BMP、tmpA 和tmpB等［9］，以 TP47 和 polA 的 特 異 性 最 高。TpN47是TP特異性含量豐富的外膜蛋白抗原，所有TP菌株均具有TpN47基因，其核苷酸或氨基酸序列高度保守，能與Ⅰ、Ⅱ期梅毒患者血清發(fā)生強烈反應(yīng)，晚期梅毒也可檢測到高效價的TpN47抗體［10］。PCR類型有常規(guī)PCR、RT－PCR、巢式PCR、多重PCR（可同時檢測多種潰瘍樣本的病原體）、實時熒光定量PCR（real－time PCR）、多重實時熒光定量PCR［11］等。但PCR檢測TP主要缺點是假陽性較高、靈敏度受來源樣本和所處病期的限制、試劑盒成本較高、實驗室條件高、需特殊儀器，目前尚不能大面積推廣。

4 結(jié)論

綜上所述，在檢測梅毒抗體時，尤其針對大批量標本的檢測，首選TP－ELISA法。當ELISA法陽性時，且吸光度值偏低（OD值＜0.5）時，應(yīng)進一步作TPPA確認試驗。若TPPA確認為陽性，再作TRUST；若TPPA確認為陰性，可直接報告陰性結(jié)果。當吸光度值處于中、高值（OD值＞0.5）時，應(yīng)同時作TPPA、SYP、TRUST，并報告TPPA滴度和TRUST檢測結(jié)果。從而使臨床醫(yī)生根據(jù)報告結(jié)果，結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)，采取正確有效的診療措施。在醫(yī)患關(guān)系較緊張的今天，檢測結(jié)果的準確性和可靠性顯得尤為重要，在梅毒抗體檢測中，尤其是輸血前患者的檢測，4種梅毒血清學方法的聯(lián)合應(yīng)用尤為關(guān)鍵，可以在一定程度上避免臨床漏診、誤診情況的出現(xiàn)，也可避免因輸血引起的醫(yī)療糾紛問題，同時還可以為梅毒患者的療效觀察提供有力依據(jù)。

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