高效液相色譜在糕點(diǎn)添加劑測(cè)定中的應(yīng)用

陳曉珍

(廣州市質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院 國家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，廣東 廣州 510110）

隨著食品種類的增多和食品添加劑的大量使用,食品檢驗(yàn)的分析任務(wù)越來越大。大多數(shù)糕點(diǎn)因貨架期較短，而容易腐敗、發(fā)霉。苯甲酸、山梨酸等防腐劑由于價(jià)格低廉防腐效果好，常作為食品添加劑用于糕點(diǎn)等食品的防腐。富馬酸二甲酯（Dimethyl Fumarate，DMF）作為美國20世紀(jì)80年代開發(fā)出來的一種防霉劑，由于其能抑制多種霉菌、酵母菌及細(xì)菌的生長和繁殖，近年來作為防腐劑在食品及飼料工業(yè)上得到廣泛的應(yīng)用。安賽蜜（乙酰磺胺酸鉀）和糖精鈉作為人工合成甜味劑也是糕點(diǎn)中常用的食品添加劑。由于上述添加劑都對(duì)人體健康有不同程度的危害，國家對(duì)這些食品添加劑的使用量有嚴(yán)格的規(guī)定，為保證食品質(zhì)量安全，建立快速有效的檢測(cè)方法具有重要的意義。

1.色譜條件的選擇和優(yōu)化

(1)檢測(cè)波長的選擇

將5種物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)混合溶液進(jìn)行色譜分離并用二極管陣列檢測(cè)器在波長190nm～350nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果表明5種物質(zhì)的紫外吸收波長分別為：安賽蜜226nm，糖精鈉218nm，苯甲酸216nm，富馬酸二甲酯218nm，而山梨酸在252nm和212nm2個(gè)波長下具有吸收峰。實(shí)驗(yàn)選用波長220nm作為糖精鈉、苯甲酸、富馬酸二甲酯的檢測(cè)波長，230nm作為安賽蜜和山梨酸的檢測(cè)波長。

(2)流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)分別用乙腈-水、甲醇-水、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-硫酸銨水溶液和甲醇-硫酸銨水溶液作為流動(dòng)相作等度洗脫，均不能將5種物質(zhì)完全分離；用甲醇-硫酸鈉水溶液能將目標(biāo)物質(zhì)分離，但是富馬酸二甲酯的色譜峰拖尾嚴(yán)重。通過篩選驗(yàn)證，最后采用甲醇和含2.84g/L硫酸鈉+2.60g/L溴化四丁基銨的水溶液（用冰乙酸調(diào)節(jié)pH至6）為流動(dòng)相，5種被測(cè)組分可以很好的分離，這可能是由于在流動(dòng)相中加入了帶正電荷的四丁基溴化銨，可以促進(jìn)帶有弱負(fù)電的富馬酸二甲酯分離，改善出峰效果。

2.樣品前處理優(yōu)化

(1)分散基質(zhì)的選擇

糕點(diǎn)中常常含大量的油脂和蛋白，利用傳統(tǒng)的溶劑和超聲波輔助提取時(shí)會(huì)由于蛋白質(zhì)變形后與油脂一起作用，將目標(biāo)物質(zhì)包裹起來，無法有效分散樣品，影響提取效果，回收率較低，且油脂的存在不但會(huì)形成干擾、影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，而且還會(huì)污染色譜柱，損害儀器的性能。實(shí)驗(yàn)采用改良的基質(zhì)固相分散技術(shù)，分別考察了無水硫酸鈉、中性氧化鋁、無水硫酸鎂作為樣品分散基質(zhì)對(duì)糕點(diǎn)中5種食品添加劑測(cè)定的影響。結(jié)果表明，用中性氧化鋁作為分散基質(zhì)不但提取效果好，回收率高，且由于氧化鋁對(duì)油脂和蛋白質(zhì)的吸附作用，樣品中雜質(zhì)凈化完全，干擾較少，有利于目標(biāo)物質(zhì)的定性和定量。

(2)提取溶劑的選擇

分別考察了水、甲醇、乙腈、甲醇-水作為提取溶劑對(duì)樣品回收率的影響。當(dāng)用純水作提取溶劑時(shí)，糖精鈉和安賽蜜的提取效果最好，平均回收率接近100%，富馬酸二甲酯由于極性較弱，用水提取效果較差。如果用甲醇和乙腈作為提取溶劑，則富馬酸二甲酯的回收率高，苯甲酸和山梨酸的提取效果比較差。最后選擇甲醇-水作為提取液，并研究其體積比與pH對(duì)5種物質(zhì)提取效果的影響。結(jié)果表明當(dāng)甲醇和水體積比為為7:3，pH為7.5時(shí)，5種物質(zhì)的回收率均可達(dá)90%以上。

3.方法的線性范圍、檢出限和定量限

以質(zhì)量濃度-峰面積作校正曲線，得到線性回歸方程，5種食品添加劑在 1μg/mL～200.00μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.9995，線性方程見表1。

表1 5種食品添加劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ)

以3倍信噪比為檢出限（LOD），計(jì)算得出5種食品添加劑的檢出限分別為0.016mg/kg～0.039mg/kg。以10倍信噪比為定量限(LOQ)，計(jì)算出5種食品添加劑的定量限分別為 0.050mg/kg～0.120mg/kg。

4.方法的回收率和精密度

采用在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法，對(duì)常見的4種糕點(diǎn)：月餅、蛋糕、面包和餅干進(jìn)行不同濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)品種4次重復(fù)結(jié)果見表2。

由表2可見，5種食品添加劑在添加濃度為20.0mg/kg～120.0mg/kg范圍內(nèi)平均回收率為89.5%～101.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.98%～3.07%，完全滿足食品添加劑分析的要求。

表2 5種食品添加劑樣品加標(biāo)回收率和RSD（n＝4）

結(jié)束語

高效液相色譜法簡便、快速、定量準(zhǔn)確、回收率高且精密度好,可以用于含脂糕點(diǎn)中3種防腐劑：苯甲酸、山梨酸和富馬酸二甲酯，2種甜味劑：安賽蜜、糖精鈉的同時(shí)測(cè)定。樣品運(yùn)用固相分散萃取技術(shù)進(jìn)行提取凈化，以中性氧化鋁為分散劑以提高回收率并除去樣品中的脂肪等雜質(zhì)，所得的色譜圖干擾少，峰形尖銳對(duì)稱，5種食品添加劑在 1μg/mL～200.00μg/mL范圍內(nèi)線關(guān)系良好。

[1]王春榮.張濟(jì).劉嵐錚；食品中多種合成色素的反相高效液相色譜法測(cè)[J].中國公共衛(wèi)生，2005.03.