氯沙坦與美托洛爾對高血壓心肌肥厚影響的實驗研究

李 禎，李潤梅

（河北北方學院附屬第一醫(yī)院藥學部，河北張家口 075000）

氯沙坦與美托洛爾對高血壓心肌肥厚影響的實驗研究

李 禎，李潤梅

（河北北方學院附屬第一醫(yī)院藥學部，河北張家口 075000）

目的研究氯沙坦與美托洛爾聯(lián)合對高血壓心肌肥厚的干預作用。方法采用結(jié)扎大鼠腹主動脈法造模，將Wistar雄性大鼠50只隨機分為假手術(shù)對照組、模型組、氯沙坦組、美托洛爾組、氯沙坦+美托洛爾組，治療5周后測定血流動力學、左心室肥厚程度、血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）及膠原蛋白含量的變化，同時檢測血清中細胞因子（白細胞介素-6、白細胞介素-10、腫瘤壞死因子-α）水平變化。結(jié)果治療5周后，與模型組比較，氯沙坦組、美托洛爾組、氯沙坦+美托洛爾組的收縮壓、舒張壓、平均動脈壓較模型組均降低；心臟質(zhì)量/體質(zhì)量與左室質(zhì)量/體質(zhì)量亦有所降低；AngⅡ及膠原蛋白含量明顯降低；白細胞介素-6、腫瘤壞死因子-α水平降低；氯沙坦+美托洛爾組效果最明顯。結(jié)論氯沙坦與美托洛爾能干預心肌肥厚，改善血流動力學，兩者合用具有協(xié)同作用。

心肌疾病，肥厚性；氯沙坦；美托洛爾

高血壓合并左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是一個獨立危險因素，研究表明［1］，高血壓左室肥大者，心血管并發(fā)癥發(fā)生率及病死率可增加3～7倍。血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）作為腎素-血管緊張素系統(tǒng)的主要活性產(chǎn)物，在LVH中具有重要作用［2］。美托洛爾（metoprolol）為心臟選擇性β受體阻滯劑，對高腎素性高血壓有較好的降壓作用［3］。氯沙坦（losartan）為非肽類血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，具有降低血漿AngⅡ水平、逆轉(zhuǎn)高血壓時的左心室肥厚作用。本文通過大鼠腹主動脈狹窄造模，給予氯沙坦及美托洛爾干預，觀察血流動力學、左心室肥厚程度、AngⅡ及膠原蛋白含量的變化，同時進一步檢測了血清中白細胞介素（interleulcin，IL）-6，IL-10，腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平變化。

1 材料與方法

1.1 材料：氯沙坦鉀（杭州默沙東公司，批號34-250-2066），美托洛爾（阿斯特拉制藥有限公司，批號52-100-2058），TNF-α放射免疫試劑盒、IL-6和IL-10檢測試劑盒（北京正泰生物技術(shù)公司），AngⅡ及膠原蛋白放免測試盒（解放軍總院科技放免所，批號050726），MD100-1電子天平（上海醫(yī)用儀器廠），壓力傳感器，RS3400四導生理儀的通用放大器（universal amplifier）（均為美國Gould產(chǎn)品），GAMMA maticⅡ型γ計數(shù)器（瑞士KONTRON公司）。

1.2 方法

1.2.1 動物模型制備：選取健康Wistar雄性大鼠50只，2月齡，體質(zhì)量160～180g。按照結(jié)扎大鼠腹主動脈的方法建立心肌肥厚模型。大鼠腹腔內(nèi)注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）麻醉，待角膜反射消失后仰臥固定于手術(shù)臺。常規(guī)去毛消毒腹部皮膚，腹部正中切口打開腹腔，于左腎后上方分離腎動脈，于起始部上段腹主動脈約13mm處，沿血管走行方向放置針尖磨鈍的7號注射針頭，以絲線將腹主動脈連同針頭一起結(jié)扎后迅速抽去針頭，造成腹主動脈狹窄。腹腔內(nèi)注入青霉素40萬U，關(guān)閉腹腔，術(shù)后進行常規(guī)抗炎治療7d。假手術(shù)組不結(jié)扎腹主動脈，其余同手術(shù)組。造模后，模型組大鼠心臟指數(shù)（全心質(zhì)量/體質(zhì)量）比假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05），表明大鼠心肌肥厚模型已建立。術(shù)中及術(shù)后6周內(nèi)平均病死率為16%（8只）。

1.2.2 動物分組：造模7d后，隨機分為5組，每組10只，即假手術(shù)組、模型組、氯沙坦組、美托洛爾組、氯沙坦+美托洛爾組。假手術(shù)組、模型組，生理鹽水2mL·kg-1·d-1，灌胃；氯沙坦組，氯沙坦60mg· kg-1·d-1，灌胃；美托洛爾組，美托洛爾20mg· kg-1·d-1，灌胃；氯沙坦+美托洛爾組，氯沙坦、美托洛爾各40mg·kg-1·d-1，灌胃。連續(xù)給藥5周。

1.2.3 檢測指標

1.2.3.1 血流動力學：實驗5周后，用2%戊巴比妥鈉（45mg/kg）麻醉狀態(tài)下行頸動脈插管，通過壓力傳感器（P23×L）與RS3400四導生理儀的通用放大器（universal amplifier）聯(lián)接，測定動脈血壓，計算平均動脈壓（mean arterial pressure，MAP）。

1.2.3.2 心肌肥厚程度測定：采用放血法處死實驗動物，分離心臟組織，稱量心臟質(zhì)量，左室質(zhì)量，計算心臟質(zhì)量指數(shù)，包括心臟質(zhì)量/體質(zhì)量，左室質(zhì)量/體質(zhì)量。

1.2.3.3 AngⅡ測定：大鼠斷頭取血5mL置于冰水浴冷卻的抗凝管中（含酶抑制劑）搖勻，1 000r/min離心5min分離血漿低溫保存。AngⅡ測定嚴格按照放射免疫試劑盒說明書操作。

1.2.3.4 心肌組織膠原蛋白含量：稱取左室游離壁約200mg濕質(zhì)量的心肌組織，應用無水乙醇、丙酮脫水脫脂，揮發(fā)待干后稱取約20mg干質(zhì)量組織，用6mmol/L鹽酸3.0mL 95℃水解5h，氫氧化鈉（6mmol/L）調(diào)酸堿度至pH6.0，稀釋至10mL，離心后取上清2m L，根據(jù)試劑盒要求測定羥脯氨酸含量，計算膠原蛋白含量。

1.2.3.5 IL-6、IL-10及TNF-α測定：頸動脈取血，離心取上清液。采用雙抗夾心ELISA法測定IL-6和IL-10，具體操作按照各試劑盒說明書進行；TNF-α采用放射免疫法檢測：采用液相競爭法，分管加樣，混勻，4℃放置24 h，加入分離劑，混勻，室溫放置20min，4℃3 000r/min離心25min，吸棄上清液，在自動γ計數(shù)器上計算標準曲線和TNF -α濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法：應用SPSS11.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以ˉx±s表示，組間兩兩比較采用q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 血流動力學變化：與假手術(shù)組比較，模型組的SBP、DBP、MAP，明顯升高（P＜0.01），可見心室重構(gòu)模型組心功能下降。與模型組比較，氯沙坦組，美托洛爾組，氯沙坦+美托洛爾組的SBP，DBP，MAP均降低（P＜0.05），且氯沙坦+美托洛爾組降低最明顯（P＜0.05）。見表1。

表1 5周后各組血流動力學變化

2.2 心肌肥厚程度：造模后，模型組大鼠心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量/體質(zhì)量及左室質(zhì)量/體質(zhì)量較假手術(shù)組明顯增加（P＜0.05）。藥物組增加幅度均降低（P＜0.05），氯沙坦+美托洛爾組最明顯（P＜0.05），與假手術(shù)組接近，見表2。

表2 心肌肥厚指標比較

2.3 AngⅡ及膠原蛋白含量比較：模型組血漿AngⅡ水平與假手術(shù)組明顯升高（P＜0.01），表明大鼠心室重構(gòu)模型組的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)激活。與模型組血漿AngⅡ含量比較，氯沙坦組及氯沙坦+美托洛爾組明顯降低（P＜0.01），且氯沙坦+美托洛爾組顯著低于氯沙坦組和美托洛爾組。

模型組的心肌膠原蛋白含量較假手術(shù)組升高54.4%（P＜0.01），與模型組相比，美托洛爾組的心肌膠原蛋白含量降低了34.4%，氯沙坦+美托洛爾組降低了49.2%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表3。

表3 各組AngⅡ及Collagen含量比較

2.4 對高血壓大鼠細胞因子水平的影響：模型組動物細胞因子變化與假手術(shù)組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），IL-6、TNF-α明顯升高，IL-10降低；藥物組與模型組相比，IL-6、TNF-α水平降低，氯沙坦+美托洛爾組作用最強，氯沙坦組較弱。IL-10水平升高，氯沙坦+美托洛爾組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。見表4。

表4 各組大鼠細胞因子變化比較

3 討 論

左心室肥厚常見于高血壓心臟病，已被單獨列為心血管疾病的危險因子。因此，控制左心室肥厚成為控制高血壓心臟病的關(guān)鍵問題。現(xiàn)代運用的超聲心動圖、心肌活組織檢查、心血管造影和心電圖本身存在一定局限性［4］，故對心肌肥厚變化程度正確的評價有賴于動物實驗。

腹主動脈狹窄法是一種常用的壓力超負荷心肌肥厚動物模型的制備方法。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腹主動脈狹窄造模6周后，其左心室質(zhì)量與體質(zhì)量比明顯高于假手術(shù)組（P＜0.01），說明應用腹主動脈狹窄法制備壓力負荷性心肌肥厚的模型是成功的。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)在心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)中起著重要的作用。AngⅡ作為腎素-血管緊張素系統(tǒng)的主要作用因子，從血流動力學和非血流動力學兩方面起作用，具有長期致肥厚和重構(gòu)的作用。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑分別通過直接抑制心臟局部AngⅡ的生成和間接抑制心臟交感神經(jīng)末梢釋放兒茶酚胺兩方面預防心室肥厚的發(fā)生。

有研究顯示［5］，MAP與LVH程度呈正相關(guān)，說明血流動力學因素參與LVH形成過程；氯沙坦+美托洛爾組與氯沙坦組的AngⅡ較模型組顯著降低，提示氯沙坦作為血管緊張素Ⅱ型受體拮抗劑，其抗心肌肥厚作用可能主要依賴非血流動力學因素。心臟肥厚與膠原含量呈正相關(guān)，顯示心臟肥厚包括間質(zhì)成分的病理性增生，心肌膠原成分增加易導致心室收縮和舒張功能異常、心律失常等。

近年研究表明［6］，炎性細胞因子不僅與炎癥、冠心病等多種臨床疾病有關(guān)，而且與高血壓、心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展存在密切的聯(lián)系。IL-6通過刺激膜上gp-130受體復合物在心肌細胞的激活和表達增高，刺激炎性蛋白的產(chǎn)生和心肌肥厚促使左室重構(gòu)；TNF-α在體內(nèi)增加心肌細胞結(jié)構(gòu)與收縮蛋白的表達，激活AT1受體表達上調(diào)，刺激誘導型一氧化氮合酶水平增高，促進AngⅡ調(diào)節(jié)心肌纖維化的效應，并引起平滑肌細胞增殖，最終導致心肌肥厚［7］。IL -10有對抗IL-6等因子所致平滑肌增殖等作用。本研究采用腹主動脈結(jié)扎制備高血壓大鼠模型，結(jié)扎5周后，細胞因子IL-6、TNF-α水平升高、IL-10降低，當兩藥聯(lián)用后，IL-6、TNF-α水平降低，IL-10升高較明顯，表明聯(lián)用可改善細胞因子的紊亂現(xiàn)象。

總之，氯沙坦和美托洛爾聯(lián)合應用改善左室舒張功能可以產(chǎn)生良好的協(xié)同作用。原因可能為二者同時作用于腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)以及交感神經(jīng)系統(tǒng)等環(huán)節(jié)。

［1］ 辛穎，宋曉東，惠池太，等.左心室肥厚的影響因素及機制的研究進展［J］.中國分子心臟病學雜志，2009，9（1）：56-58.

［2］ 周懷能，李秀娟，廖新學，等.氯沙坦對自發(fā)性高血壓大鼠血管緊張素Ⅱ及炎癥因子的影響［J］.熱帶醫(yī)學雜志，2011，11（5）：577-578.

［3］ 孫愛梅.美托洛爾治療高血壓病的療效觀察［J］.右江醫(yī)學，2011，39（3）：334-335.

［4］ MATTFELDT T，MALL G.Growth of capillaries and myocardial cells inthe normal rat heart［J］.JMol Cell Cardiol，1997，60（3）：1237-1246.

［5］ 蔣嘉燁，王現(xiàn)珍，羅珊珊，等.半夏白術(shù)天麻湯對自發(fā)性高血壓大鼠左心室肥厚的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，30（10）：1061-1062.

［6］ WAGNER M.Signaling networks regulating cardiac myocyte survival and death［J］.Curr Opin Investig Drugs，2009，10（9）：928-937.

［7］ BANERJEE I，F(xiàn)USELER JW，INTWALA AR.IL-6 loss causes ventricular dysfunction，fibrosis，reduced capillary density，and dramatically alters the cell populations of the develop-ing and adult heart［J］.Am JPhysiol Heart Circ Physiol，2009，296（5）：1694-1704.

（本文編輯：趙麗潔）

R542.2

B

1007-3205（2012）02-0228-03

2011-10-28；

2012-01-11

李禎（1964-），男，河北康保人，河北北方學院附屬第一醫(yī)院副主任藥師，理學學士，從事醫(yī)院藥學和醫(yī)院制劑研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.02.046